疏水層析hippt課件(已修改)
2025-05-13 18:10 本頁面
【正文】 疏 水 層 析 （ HIC） 一 實驗原理 疏水層析 (Hydrophobic Interaction Chromatography HIC) 是利用被分離 樣品中不同生物分子表面的疏水性差別，而將其分離純化的一種層析技術(shù)。疏 水層析的介質(zhì)通常是一類在惰性支持物上接有疏水基團(tuán)的層析載體，如苯基瓊 脂糖（ Phenyl Sepharose） , 辛基 (Octyl),丁基 (butyl) 瓊脂糖等。 對于不同的蛋白質(zhì)和多肽而言，其分子表面一般有著不同的疏水和親水結(jié)構(gòu) 區(qū)域，當(dāng)將這些生物樣品加入到含有高鹽（高離子）濃度緩沖液的 HIC 柱中時， 由于溶液中高濃度鹽離子與水分子的作用，降低了樣品分子的溶劑化作用，從而 增加暴露了樣品分子表面的疏水區(qū)，這樣就促使樣品分子表面疏水基團(tuán)與 HIC 柱 上的疏水基團(tuán)相互作用結(jié)果使樣品被吸附到 HIC柱上。因此疏水層析亦稱疏水相 互作用層析。樣品吸附在 HIC柱上的強(qiáng)弱程度，取決于樣品本身的疏水性質(zhì)和樣 品環(huán)境中鹽離子的強(qiáng)度。 一般來說疏水性強(qiáng)的只需要較低的鹽濃度，疏水性弱的則需要較高的鹽濃度 [如 mol/L (NH4)2SO4]。吸附在 HIC柱上的生物分子，可以采用降低洗脫液中 鹽濃度的方法，使其從柱上洗脫下來，洗脫方法可以是梯度也可以是階段洗脫的 方式。樣品中不同分子被洗脫的順序依據(jù)其疏水性強(qiáng)與弱從先到后，從而達(dá)到分 離的目的。 二 實驗?zāi)康呐c要求 通過苯基瓊脂糖疏水層析柱，采用階段洗脫的方 式分離 —— 血紅蛋白，以此了解疏水層析的原理、方法 和實際的應(yīng)用。 三 實驗儀器與器材 3實驗儀器 （ 1）、層析工作站裝置 （ 2）、筆記本電腦 （ 3）、紫外檢測儀 （ 4）、磁力攪拌器 （ 5）、恒流泵 （ 6）、天 平 （ 7）、混合器 3實驗器材 （ 1）、 可調(diào)取液器 （ 2）、 量 筒
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