感染性疾病病原的診斷策略講座(已修改)
2025-01-27 04:27 本頁面
【正文】 感染性疾病病原的診斷策略上海交通大學醫(yī)學院病原生物學教研室 周與華感染和感染性疾病一直是臨床醫(yī)學的重要課題，引起人們的廣泛關注，自動化鑒定技術是怎樣的？ELISA、核酸探針、PCR診斷、16S文庫診斷技術的基本原理是什么？ELISA實驗的主要實驗策略和應用側重有哪些？基因芯片技術的原理是什么？下面，我們共同探討一下這些技術的原理策略以及發(fā)展的趨勢。在我們的日常生活中，小到一個皮膚創(chuàng)衛(wèi)，大到肺炎，肝炎，性傳播疾病，都有感染聲音的存在。在感染性疾病的診療過程中，對于其感染性病原體的診斷處于一個非常重要的位置，因為他既幫助我們確定疾病的病原，又指導我們后期的治療與用藥，可以說是一個不可或缺的因素。但我們都知道，造成感染性病原體的千差萬別，他們都具有不同的生物學特性，這就迫使我們用策略和手段去尋找他們。隨著科學技術的發(fā)展，微生物學的鑒定和專斷技術也有了長足的進步一、病原診斷策略的分類如今病原學的診斷技術多種多樣，從最簡單的手工平板劃線分離到最常規(guī)的自動化細菌鑒定儀，到最新的DNA測取技術，病原學的診斷技術幾乎覆蓋了醫(yī)學微生物學、分子生物學、生物化學的方方面面，具有很長的交叉性，這個問題看起來似乎復雜，沒有頭緒，但是我們能夠認真梳理還是很容易的理出一條主線，其實無論什么方法，都能歸入兩個大類。一類是以病原體表現(xiàn)型為基礎的方法；另一類是以病原體基因型為基礎的方法，所以表現(xiàn)型就是病原體直接表型出的一些性狀，其物理學性狀、生化反應特性、免疫學特性，特性可以通過平板劃線分離，生化反應，血性型實驗的檢測出來。從分子微生物學的角度講，表現(xiàn)型是病原體基因組，特別是一些活躍的基因經(jīng)過轉入翻譯后的外在表現(xiàn)，雖然只能體現(xiàn)病原體基因組的部分特征，但是由于針對其實驗技術成熟，操作方便，成本相對低廉，因此，仍然是當今病原體診斷的常規(guī)技術，相比之下以基因型為基礎的方法更加接近病原體的本質(zhì)，因為基因組的存在了病原組的全部遺傳信息，以基因性為基礎的方法大致可以分為基于退性基因的檢測，以及基于測序的兩大手段。前者主要針對退役性基因，這些基因包含了病原體的某些種系特征，該方法快速特異，但鑒于臨床標本千差萬別，有時會出現(xiàn)敏感性問題。而后者主要基于病原體ＤＮＡ剪輯系列，可以說做到了觸及病原體的本質(zhì)，是當今所有檢測技術的基因標準，但是由于經(jīng)濟成本和標準化的問題還很難廣泛推廣，不可否認它將是未來診斷技術的趨勢和發(fā)展方向。二、以表現(xiàn)型為基礎的方法（一）基因物理學特性和生化反應的診斷在整個微生物的發(fā)展歷史中，人類經(jīng)歷了經(jīng)驗時期、現(xiàn)代微生物學時期這幾個重要的歷史階段，在1670年荷蘭人發(fā)明了顯微鏡，第一次揭示了微生物世界的存在，開始人類進入了實驗時期，從那以后至今300多年的時間里，通過多種多樣的實驗方法來鑒別不同微生物的物種間的不同性質(zhì)；這其中有形態(tài)學的方法最基本的格蘭染色，鑒定白喉棒狀桿菌的染色。鑒定結核分枝桿菌的抗酸染色，也有基于生化反應的方法，如平板考察腸道細菌對于乳糖分解能力的不同以確定致病菌株，運用了整合了四個生化反應的實驗鑒定了不同的腸道桿菌的方法雖然這些方法被視作經(jīng)費的保留下來再醫(yī)學上廣泛和大量的應用 但是手工操作存在效率偏低的疫病。而隨著工業(yè)化的推進和科學技術的不斷發(fā)展，其中很多方法被系統(tǒng)化集成化標準化，許多手工作業(yè)被自動化儀器所取代，這樣便催生了自動化鑒定技術，手工鑒定和自動化鑒定技術可以說相同原理在不同技術條件下的不同形式
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