生物技術(shù)制藥ppt課件(2)(已修改)
2025-01-20 04:55 本頁面
【正文】 生物技術(shù)制藥 第四章 抗體制藥 第四章 抗體制藥 ? 第一節(jié) 概述 ? 第二節(jié) 單克隆抗體 ? 第三節(jié) 鼠源性單克隆抗體的改造 ? 第四節(jié) 基因工程抗體和抗體工程 ? 第五節(jié) 抗體診斷試劑 ? 第六節(jié) 抗體治療藥物 第一節(jié) 概述 ? 1890年： Behring和北里柴三郎等發(fā)現(xiàn)了白喉抗毒素，并建立了血清療法，開抗體制藥之先河。 ? 1937年： Tiselius等人用電泳法將血清蛋白分為白蛋白、甲種（ ?）球蛋白、乙種（ ? ）球蛋白和丙種（ ? ）球蛋白，并證明抗體活性主要存在于丙種球蛋白組分。 ? 20世紀(jì) 60年代初期：抗原決定簇，精制單價(jià)血清。 ? 1975年： K246。hler和 Milstein等，單克隆抗體，其具有高度特異性、均一性，以及來源穩(wěn)定可大量生產(chǎn)等特點(diǎn)。 ? 1984年：人 鼠嵌合抗體 ? 1984年至今：單克隆抗體的鼠源性及分子過大的問題得以解決，可僅作為與抗原特異性結(jié)合試劑。 單克隆抗體的應(yīng)用 ? 用于疾病的診斷和治療：如利用單克隆抗體檢測與某些疾病相關(guān)的抗原，輔助臨床診斷，或用放射性核素標(biāo)記 單克隆抗體進(jìn)行腫瘤顯像，進(jìn)行免疫鑒定。用于臨床治療，如針對(duì) T淋巴細(xì)胞共有的分化抗原 CD3的單克隆抗體，用作免疫抑制劑。 ? 單克隆抗體還可作為載體制備導(dǎo)向藥物。但是要解決以下兩個(gè)問題 ：（ 1）鼠源性單克隆抗體的免疫原性；（ 2）完整的抗體分子分子量過大，難以穿透實(shí)體腫瘤組織，達(dá)不到有效的治療濃度。 單克隆抗體的應(yīng)用 ? 基因工程技術(shù)為解決這兩個(gè)問題提供了可能。 ? 已通過基因工程技術(shù)，制備出改形抗體、單鏈抗體、單域抗體、最小識(shí)別單位等很多類型的抗體或抗體單位?；鞠藛慰寺】贵w的鼠源性，相對(duì)分子質(zhì)量只有完整抗體分子的 1/80~1/3，而且鼠源性單克隆抗體的生物學(xué)活性如激活補(bǔ)體、促進(jìn)吞噬功能（免疫調(diào)理）、抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用等，只保留同抗原特異性結(jié)合的活性。 第二節(jié) 單克隆抗體 ? 單克隆抗體是將抗體產(chǎn)生細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，通過有限稀釋法及克隆化使雜交瘤細(xì)胞成為純一的單克隆細(xì)胞系而生產(chǎn)的。由于這種抗體是針對(duì)一個(gè)抗原決定簇的抗體，又是單一的 B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，因此稱為單克隆抗體。它是結(jié)構(gòu)和特異性完全相同的高純度抗體。制備的一般流程見下圖。 單克隆抗體和 多克隆抗體的制備 抗原 脾 B淋巴細(xì)胞 融合 融合 淋巴細(xì)胞 骨髓瘤細(xì)胞 克隆 1 克隆 2 克隆 3 克隆 4 第二節(jié) 單克隆抗體 ? 一、抗原與動(dòng)物免疫 ? 二、細(xì)胞融合與雜交瘤細(xì)胞的選擇性培養(yǎng) ? 三、篩選陽性克隆與克隆化 ? 四、雜交瘤細(xì)胞與抗體性狀的鑒定 ? 五、單克隆抗體的大量制備 ? 六、單克隆抗體的純化 一、抗原與動(dòng)物免疫 ? （ 1）制備用于動(dòng)物免疫的適當(dāng)抗原。 ? 化學(xué)合成抗原，如精制的地高辛。 ? 多數(shù)情況下抗原物質(zhì)只能得到部分純化，甚至是極不純的混合物，如部分純化的干擾素。 ? 通過克隆化選出最適當(dāng)?shù)膯慰寺】贵w。 ? 在制備惡性腫瘤細(xì)胞表面抗原的單克隆抗體時(shí)，情況較復(fù)雜，需用整個(gè)腫瘤細(xì)胞做為免疫原，經(jīng)過篩選、克隆化，制備出僅存在于腫瘤細(xì)胞而不存在于正常細(xì)胞上的表面標(biāo)志分子上的單克隆抗體。 一、抗原與動(dòng)物免疫 ? （ 2）穩(wěn)定的雜交瘤的獲得 ? 因免疫動(dòng)物品系和骨髓瘤細(xì)胞在種系發(fā)生上距離越遠(yuǎn)，產(chǎn)生的雜交瘤越不穩(wěn)定，故一般采用與骨髓瘤供體同一品系的動(dòng)物進(jìn)行免疫。目前常用的骨髓瘤細(xì)胞系多來自 BALB/c小鼠和 Lou大鼠，因此免疫動(dòng)物也多采用相應(yīng)的品系，最常用的也是BALB/c小鼠。 ? 選擇動(dòng)物時(shí)應(yīng)考慮到動(dòng)物品系的免疫應(yīng)答基因（ Ir） 對(duì)抗原免疫應(yīng)答的影響。不同品系的小鼠與大鼠在對(duì)某類抗原的免疫應(yīng)答上是不同的。書中表 41是骨髓瘤細(xì)胞系一覽表，可以參考。 一、抗原與動(dòng)物免疫 ? （ 3）免疫方法：體內(nèi)免疫法和體外免疫法 ? 體內(nèi)免疫法：適用于免疫原性強(qiáng)、抗原量較多時(shí)應(yīng)用，一般用 8~12周齡的雌性鼠。顆粒性抗原（如細(xì)菌、細(xì)胞抗原）的免疫原性強(qiáng)，可不加佐劑，直接注入腹腔 107個(gè)細(xì)胞進(jìn)行初次免疫，間隔 1~3周，再追加免疫 1~2次，可溶性抗原則按每只小鼠 10~100?g抗原與福氏完全佐劑等量混合后注入腹腔內(nèi)，進(jìn)行初次免疫，間隔 2~4周，再用不加佐劑的原抗原追加免疫 1~2次。一般在采集脾細(xì)胞前 3日由靜脈注射最后一次抗原，其目的是使對(duì)應(yīng)的 B淋巴細(xì)胞克隆受到可靠的最大限度的刺激，使其迅速地增殖分裂，因?yàn)榧?xì)胞融合后增殖最好的細(xì)胞是迅速分裂的細(xì)胞。有人認(rèn)為在常規(guī)免疫的基礎(chǔ)上用脾內(nèi)免疫法做追加免疫較佳。 一、抗原與動(dòng)物免疫 ? （ 3）免疫方法：體內(nèi)免疫法和體
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