實驗三植物不定芽誘導與快繁技術(shù)(已修改)
2025-05-31 01:46 本頁面
【正文】 第四章 器官培養(yǎng) 宜職院 目的與要求 了解離體根培養(yǎng)的實踐意義，掌握離體根的培養(yǎng)方法，熟悉離體根培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方。了解植物莖尖培養(yǎng)的意義，掌握莖尖培養(yǎng)的方法，以及莖尖微繁技術(shù)。掌握葉培養(yǎng)概念，離體葉組織培養(yǎng)方法，了解影響葉片組織脫分化和再分化因素。 具有植物離體根培養(yǎng)的認知和進行根培養(yǎng)的基礎能力，具有熟練進行植物莖尖培養(yǎng)和莖段培養(yǎng)的能力，具有葉培養(yǎng)認知和進行葉培養(yǎng)的基礎能力。 一、根培養(yǎng)的實踐意義 是進行根系生理代謝研究的最優(yōu)良試驗體系。 是研究器官分化、形態(tài)建成的良好體系。 建立快速生長的根無性系，對藥物生產(chǎn)有重要意義。 對根細胞培養(yǎng)物進行誘變處理，可篩選突變體，用于育種實踐。 第一節(jié) 根的培養(yǎng) 二、離體根的培養(yǎng)方法 培養(yǎng)步驟： 離體根培養(yǎng)的第一步是要獲得無性繁殖系。 方法如下： 種子表面消毒 —— 無菌條件下萌發(fā) —— 根伸長后切取 —— 接種于培養(yǎng)基 —— 側(cè)根生長 —— 切取側(cè)根的根尖擴大培養(yǎng) —— 獲離體根無性系 胡蘿卜根培養(yǎng) 一般方法 100ml三角瓶，內(nèi)裝 4050ml培養(yǎng)液，如長時間培養(yǎng)，可采用大型器皿 5001000ml培養(yǎng)液的發(fā)酵瓶進行培養(yǎng)。根據(jù)需要可在瓶中添加新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或分割轉(zhuǎn)移后繼代培養(yǎng)。為避免培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基成分變化對生長的影響，可采用流動培養(yǎng)方法。 根瘤菌結(jié)瘤實驗的特殊方法 Raggio1965年等設計了離體根的結(jié)瘤實驗裝置。 此裝置由兩個部分組成，下部是試管，管中裝有含無機鹽的營養(yǎng)液，并接種根瘤菌，上部是玻璃蓋，蓋中有一單向開口的管狀凹槽，槽中盛放含有有機化合物的瓊脂固體培養(yǎng)基。故有機營養(yǎng)從根基部吸收，無機營養(yǎng)從根尖吸收。 Bunting和Horrocks1964年修改了 Raggio等的裝置，變?yōu)樵诖稚持刑峁o機鹽。利用這一技術(shù)研究菜豆、大豆等離體根根瘤菌的固氮情況，結(jié)果表明這些根瘤菌含有血紅蛋白，并能固定大氣中的氮。 Raggio 裝置 三、離體根培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基 離體根培養(yǎng)多用無機離子濃度低的White培養(yǎng)基或其他培養(yǎng)基， MS、 B5等也可采用，但必須將其濃度稀釋到 2/3或 1/2。 苜蓿離體根的培養(yǎng)液和西紅柿離體根的培養(yǎng)液如下： 成份 苜蓿濃度 (mg/L) 西紅柿濃度 (mg/L) Ca(NO3) 200 Na2SO4 200
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