13第十三章基因工程與基因組學(xué)-文庫吧
2025-01-04 03:55 本頁面
【正文】 載體的基本條件 ①有獨(dú)立的復(fù)制原點(diǎn) (ori)，能獨(dú)立地自我復(fù)制，而且能帶動(dòng)外源 DNA一起復(fù)制。 ②具有多種限制性酶的切點(diǎn)，用于連接外源DNA 片段。 ③載體上的限制酶酶切位點(diǎn)對于任何一種限制酶來說只能有一個(gè)。 ④具有一個(gè)選擇標(biāo)記基因。 獲得外源 DNA片段（分） 限制性內(nèi)切酶切割外源 DNA片段與載體（切） 外源 DNA片段與載體連接（接） 重組 DNA分子轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞（轉(zhuǎn)） 重組子的篩選與鑒定（篩） 目的基因的確認(rèn)與分析 三、基因工程的流程及相關(guān)技術(shù) （一）外源 DNA片段的分離方法 1. 構(gòu)建基因組文庫分離法 2. 差別顯示反轉(zhuǎn)錄 PCR 3. 利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)擴(kuò)增目的基因 用克隆載體將某種生物的基因組全部遺傳信息儲存于一個(gè)受體菌的群體，即構(gòu)成了這種生物的基因組文庫。若只儲存某生物基因組的部分遺傳信息，即構(gòu)成部分基因組文庫。 ?供體生物的基因組 DNA切割成許多片段 ?將所有片段分別連接到載體上，構(gòu)成一個(gè)重組 DNA群體 ?這個(gè)群體包含全基因組的遺傳信息。 保存、篩選 差別顯示分析基本流程 PCR（ DDRTPCR） 利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)擴(kuò)增目的基因 （ 1）套式 PCR （ 2）反向 PCR （ 3）不對稱 PCR （ 4）錨定 PCR （ 5）長程 PCR （ 6）反轉(zhuǎn)錄 PCR 人工合成基因 ? 根據(jù)已知的基因序列 ， 或根據(jù)氨基酸序列推測 DNA序列 ? 將化學(xué)合成寡核苷酸的方法與酶促合成DNA的方法結(jié)合起來 ， 可以很快地人工合成基因 。 通過用相同的限制性核酸內(nèi)切酶切割，連接形成一個(gè)重組DNA分子 （二）、外源 DNA片段與載體的切割和連接 （三）、重組 DNA轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞 DNA轉(zhuǎn)入原核細(xì)胞 熱激轉(zhuǎn)化法 電穿孔轉(zhuǎn)化法 DNA轉(zhuǎn)入真核細(xì)胞 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 重組 DNA 感受態(tài) 細(xì)胞 冰浴 混合、靜置 42186。C 熱激 加入培養(yǎng)基 擴(kuò)培 轉(zhuǎn)化液涂含抗菌素的平板 吸附 DNA 攝入
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