《基因工程應(yīng)用》ppt課件-文庫(kù)吧
2025-08-27 18:25 本頁(yè)面
【正文】 透性 ,在細(xì)胞質(zhì)膜上形成多孔的結(jié)構(gòu) ,以使 R 和 Rz 基因產(chǎn)生的酶可以穿過(guò)細(xì)胞質(zhì)膜 ,到達(dá)細(xì)胞壁 ,從而作用于細(xì)胞壁PHB biosynthetic genes (phbCAB) phbA βketothiolase(β酮 硫解 酶 ) phbB acetoacetylCoA reductase(NADPH為輔 酶 的乙 酰 乙 酰 CoA還 原酶 ) phbC PHB synthasePHB 合成基因來(lái)源于 ：Alcaligenes eutrophus H16PHB 的合成 ：為裂解細(xì)胞，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物： 將 λ 噬菌體的裂解基因克隆在大腸桿菌中。使菌具有破壁溫和、可控、簡(jiǎn)單、無(wú)需加入外源酶等優(yōu)點(diǎn)?？山档头蛛x回收的成本，且提高了 PHB產(chǎn)品的質(zhì)量。 琥珀突變的 λ噬菌體裂解基因 （ SRRz）： 位于長(zhǎng)度為 1466bp的 EcoRⅠ ClaⅠDNA 片段上 Lytic genes from phage λ(SRRz)功能：編碼可裂解細(xì)菌細(xì)胞壁的幾種酶 S — 改變細(xì)胞膜的通透性，形成多孔結(jié)構(gòu)； R — 產(chǎn)生可溶于水的轉(zhuǎn)糖基酶，以分解細(xì) 胞壁的肽聚糖； Rz— 產(chǎn)生肽鏈內(nèi)切酶，可以切割肽聚糖寡 糖間及肽聚糖與胞壁外膜間的交聯(lián)；特性： S 基因琥珀突變解決了細(xì)胞壁裂解與菌體生長(zhǎng)和 PHB積累的矛盾。 Lytic genes from phage λ(SRRz)質(zhì)粒的構(gòu)建 為解決大規(guī)模、高密度培養(yǎng)時(shí)氧的供需矛盾，提高菌體對(duì)氧的利用率： 在大腸桿菌中克隆和表達(dá)透明顫菌血紅蛋白基因。具有這種基因的菌株，能合成血紅蛋白，提高對(duì)氧的利用率和耐低溶氧的能力。從而降低發(fā)酵的成本。透明顫菌血紅蛋白（ VHb） 及其基因（ vgb）VHb含 146個(gè)氨基酸殘基，有兩個(gè)相對(duì)分子量為 15775的亞基。 vgb基因位于 HindⅢSalⅠ 片段上；Vitreoscilla hemogobin gene (vgb)VG1(pTU14)中 vgb 的 表達(dá)VG1(pTU14) 細(xì)胞的 CO差光譜在 419nm 處呈現(xiàn)出明顯的透明顫菌血紅蛋白的特征吸收峰。說(shuō)明 vgb可以在 VG1(pTU14)成功表達(dá)。1 JM105 (pTU14) 2 VG1 (pTU14)How about the expressions of the three exogenous genes in VG1 (pTU14)?用 2 mM EDTA / 50 mM Tris (pH ) buffer處理前后VG1(pTU14)細(xì)胞的電鏡觀察22h culture, magnification: 6600VG1(pTU14)中 SRRz 基因的表達(dá)和調(diào)控VG1(pTU14)的細(xì)胞和胞內(nèi)積累的PHB顆粒 （裂解前）從 VG1(pTU14)細(xì)胞內(nèi)釋放出的PHB顆粒 （裂解后）VG1(pTU14)中 SRRz 基因的表達(dá)5 h58 h37 h11 hPHB 大量積累時(shí)VG1(pTU14)細(xì)胞的自動(dòng)裂解Magnification： 160050 h在優(yōu)化條件下，經(jīng)過(guò) 60小時(shí)的補(bǔ)料分批培養(yǎng)， VG1(pTU14)的細(xì)胞干重達(dá)到： 216g/L ， PHB濃度： 194g/L， PHB占細(xì)胞干重： 90 % — 達(dá)到了國(guó)際上文獻(xiàn)報(bào)道的高指標(biāo) 。VG1(pTU14)在發(fā)酵罐中的補(bǔ)料分批培養(yǎng)結(jié)論 利用基因工程的手段可以成功地解決某些化學(xué) (生物 )工程問(wèn)題，其效率和效益是非常明顯的。除了以上的例子外，其的用武之地還十分廣闊。 這是一個(gè)化學(xué) (生物 )工程工作者能創(chuàng)新性地發(fā)揮作用的舞臺(tái)，必將得到進(jìn)一步的發(fā)展。究進(jìn)展研究意義 :? 蟲(chóng)害是制約農(nóng)作物高產(chǎn)的重要因素 ,世界每年因蟲(chóng)害造成的損失約占農(nóng)作物總產(chǎn)量的 15%以上?；瘜W(xué)農(nóng)藥的施用在減少蟲(chóng)害的同時(shí)引起一系列副作用 ,如提高成本、污染環(huán)境、誘導(dǎo)害蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性、引起次要害蟲(chóng)的大發(fā)生等。? 而通過(guò)基因工程手段培育抗蟲(chóng)新品種 (系 )可從根本上解決問(wèn)題 ,對(duì)哺乳動(dòng)物和一些有益昆蟲(chóng)不產(chǎn)生毒害作用 ,且不造成環(huán)境污染 ,具有廣闊的應(yīng)用前景。研究?jī)?yōu)勢(shì) :? 利用基因工程手段培育抗蟲(chóng)新品種有以下優(yōu)點(diǎn) :? (1)保護(hù)作用具有連續(xù)性 。? (2)基因資源非常豐富 。? (3)對(duì)害蟲(chóng)的毒性具有專(zhuān)一性 。? (4)對(duì)害蟲(chóng)的毒害作用可不受時(shí)，空的限制 。? (5)不易被環(huán)境因素影響 ,也不對(duì)環(huán)境造成污染 。? (6)育種周期短 ,成本低 ,目的性強(qiáng)。 1. 抗蟲(chóng)基因? 來(lái)源于微生物的抗蟲(chóng)基因? 蘇云金桿菌毒蛋白基因 (Bt基因 ) ? Bt是蘇云金桿菌 Bacillus thuringiensi的簡(jiǎn)稱(chēng) ,是一種革蘭氏陽(yáng)性土壤芽胞桿菌 ,其殺蟲(chóng)毒性來(lái)自芽孢形成時(shí)所產(chǎn)生的具有 高度特異性 殺蟲(chóng)活性的晶體蛋白 ,通常稱(chēng)為蘇云
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