顯微操作技術(shù)-----熒光顯微鏡技術(shù)的特點(diǎn)和應(yīng)用-文庫(kù)吧
2025-07-31 23:03 本頁(yè)面
【正文】 藍(lán)等 )兼有熒光染料的性能 ? 用細(xì)胞熒光測(cè)定技術(shù)測(cè)量 DNA,是熒光顯微技術(shù)和細(xì)胞光度技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物 ,標(biāo)志著前者由定性向定量測(cè)定發(fā)展 . 吖啶橙 ? 3， 6－（二甲胺基）吖啶鹽酸鹽，分子式C17H19N3 HCl ZnCl?, 分子量 ,是一種熒光 色素 ，其檢測(cè)激發(fā)濾光片波長(zhǎng) 488nm,阻斷 濾光片 波長(zhǎng) 515nm。 吖啶橙 ? 染色原理 :吖啶橙可對(duì)細(xì)胞中的 DNA和 RNA同時(shí)染色而顯示不同顏色的熒光。其激發(fā)峰為 492nm，熒光發(fā)射峰為 530nm（ DNA）、 640（ RNA），它與雙鏈 DNA的結(jié)合方式是嵌入雙鏈之間，而與單鏈 DNA和 RNA則由靜電吸引堆積在其磷酸根上。在藍(lán)光（ 502nm）激發(fā)下，細(xì)胞核發(fā)亮綠色熒光（約530nm），胞質(zhì) RNA發(fā)橘紅色熒光（ 580nm）。 ? 它與 細(xì)胞 中 DNA和 RNA結(jié)合量存在差別，可發(fā)出不同顏色的 熒光 ，與 DNA結(jié)合量少發(fā)綠色熒光，與RNA結(jié)合量多發(fā)桔黃色或桔紅色熒光。該染料具有膜通透性，能透過(guò)細(xì)胞膜，使核 DNA和 RNA染色。因此，在熒光顯微鏡下觀察，吖啶橙可透過(guò)正常細(xì)胞膜，使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光。 體外培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞吖啶橙熒光染色 可見(jiàn)含 DNA的細(xì)胞核顯示黃綠色熒光，含 RNA的細(xì)胞質(zhì)顯示橘紅色熒光
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