乳酸菌實驗報告-文庫吧
2025-07-19 08:38 本頁面
【正文】 0ml 95%乙醇中）20ml，1g草酸銨于蒸餾水100ml。將兩液混勻即成。盧戈氏碘液：碘1g，碘化鉀2g，蒸餾水300ml。先將碘化鉀溶于少量蒸餾水中，然后加入碘使之完全溶解，再加入蒸餾水300ml即成。蕃紅溶液：，95%乙醇100ml，溶解后存于密閉的棕色瓶中。用時取10ml與80ml蒸餾水混勻即可。%的呂氏美藍染液：A液：，95%乙醇300ml；B液：% KOH 100ml?；旌螦和B液即成，按1：100稀釋即可。生理鹽水：，溶解在少量蒸餾水中，稀釋到100毫升。實驗步驟：一、 培養(yǎng)基的培養(yǎng)1．稱量 用天平稱取蛋白胨1g, 牛肉膏1g , , , K2HPO4 , MnSO44H2O , MgSO47H2O , 葡萄糖2g , 吐溫80 , CaCO3 1g放入燒杯。2．溶解 向上述燒杯中加入蒸餾水50 mL無菌水，用玻璃棒攪勻后，放到酒精燈上加熱, 在石棉網(wǎng)上加熱溶解后,，并繼續(xù)用微火加熱。在瓊脂溶化的過程中，要控制火力的大小，并且不斷攪拌，以免培養(yǎng)基溢出或燒焦。待瓊脂完全溶化后，補加蒸餾水至100mL。3．調(diào)節(jié)pH 用滴管逐滴滴入1mol/L的NaOH溶液，邊滴邊攪拌，并隨時用精密的pH試紙測pH。4．過濾 要趁熱用四層紗布過濾5．培養(yǎng)基的分裝 將培養(yǎng)基趁熱分裝到2個三角瓶里(一半為宜)。注意：分裝時不要將培養(yǎng)基沾在管口和試管上段，以免引起污染。6．加棉塞 培養(yǎng)基分裝完畢以后，在管口上加一個棉塞。棉塞能防止雜菌污染，保證通氣良好。加棉塞時，應使棉塞長度的2/3在試管口內(nèi)。7．包扎 在管口外面包上一層牛皮紙，然后，用線繩扎好。在每捆試管外掛上標簽，注明培養(yǎng)基名稱、配制日期和制作者姓名 二、滅菌1．打開高壓蒸汽滅菌鍋，將里面的滅菌桶取出，向鍋內(nèi)加水(最好用開水)，水面與底架平齊為宜（直至高水位燈亮起）。2．將扎好的試管管口向上豎放在滅菌桶內(nèi)，再將滅菌桶放回滅菌鍋。（注意：滅菌桶內(nèi)的物品不能放得太擠，否則會影響滅菌效果）。3．加蓋，并將排氣軟管插入滅菌桶的排氣槽內(nèi)。（以兩兩對稱的方式，同時旋緊相對的兩個緊固螺栓，以防漏氣）同時關(guān)閉滅菌鍋上方的安全閥，打開排氣閥，使水沸騰時得以排除鍋內(nèi)的冷空氣。4．設(shè)置滅菌溫度和時間。溫度為121℃,20分鐘滅菌5．排出鍋內(nèi)的冷空氣，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升，當鍋內(nèi)的壓力上升到98kPa時，控制火力大小，使壓力維持在98kPa左右20min。 6．滅菌所需時間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當壓力表的壓力將至0時，打開排氣閥，旋開蓋子，取出滅菌物品。三、無菌檢查 將取出的滅菌培養(yǎng)基放入37℃ 溫箱保溫培養(yǎng)24小時，經(jīng)檢查若無雜菌生長，即可待用。四、菌懸液的配制先將酸奶樣品攪拌均勻，用無菌移液管吸取樣品10ml加入盛有90ml無菌水的三角瓶中，在旋渦均勻器上充分振搖20分鐘，使樣品均勻分散。用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml酸奶懸液注入9ml無菌水的試管中，吹息三次，使充分混勻。然后再用一支1ml無菌吸管從此試管中吸取1ml注入另一盛有9ml無菌水的試管中，以此類推制成101010101010107各種稀釋度的菌懸液（要取7只15ml試管）。五、倒平板取無菌平板12個，編號標明101010107各三套；將經(jīng)高溫消毒的培養(yǎng)基冷卻到50℃左右，按無菌操作法倒12只平板，每皿約15ml；平置使培養(yǎng)基均勻分布在皿底，待凝固。六、分離方法A．涂布平板法用三支1ml無菌吸管分別吸取10106和107的稀釋菌懸液各1ml，對號接種于與之對應的3個無菌平板中，；盡快用無菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，平放與試驗臺上20 Min；然后倒置于40℃恒溫箱中培養(yǎng)48小時。 B．平板劃線劃線在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，按無菌操作對標有‘101‘的3個平板進行劃操作。常用的劃線方法有。(a)用接種環(huán)以無菌操作挑取菌液一環(huán)，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線34條，再轉(zhuǎn)
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1