【正文】 體液傳染病如艾滋病、乙肝、丙肝等獻(xiàn)血源的篩查，相信不久國(guó)內(nèi)亦會(huì)跟上。. 轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物檢出：將保護(hù)中國(guó)不受轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物傾銷之害。. 個(gè)人基因圖譜檔案的建立：可對(duì)個(gè)人壽命、性格、行為、智力等因素有效預(yù)測(cè)。目前此類服務(wù)因價(jià)格昂貴，只能提供給少數(shù)富人，但隨著技術(shù)的不斷完善，必將會(huì)成為大多數(shù)健康人大消費(fèi)內(nèi)容。總之，核酸檢測(cè)已經(jīng)具有了極為廣闊的應(yīng)用前景，而且還會(huì)不斷開發(fā)出新的用途。. 核酸檢測(cè)技術(shù)的特點(diǎn)由於基因序列的物種特異性及高度穩(wěn)定性(尤以DNA為甚)，核酸檢測(cè)技術(shù)比傳統(tǒng)的免疫檢測(cè)技術(shù)具有不可比擬的準(zhǔn)確度和靈敏度，例如能夠檢測(cè)出取樣標(biāo)本中的單個(gè)病原體，是疾病傳染早期唯一有效的檢測(cè)方法，對(duì)於象非典這種尚無有效治療手段且傳染性極強(qiáng)的傳染病，早期診斷就成為防治的關(guān)鍵。此技術(shù)的可定量性也是免疫檢測(cè)無法達(dá)到的。. 核酸檢測(cè)技術(shù)的原理核酸檢測(cè)技術(shù)包括：標(biāo)本樣品(如血液、生物組織、糞便、痰等)的采集和處理，核酸擴(kuò)增，產(chǎn)物檢測(cè)，及結(jié)果分析。其中擴(kuò)增與檢測(cè)是關(guān)鍵步驟。擴(kuò)增就是將處理過的樣品中的某種特定核酸(如乙肝病人血液中攜帶的乙肝病毒DNA)，在人工條件下，特異性地曾加某一段DNA分子的數(shù)量。擴(kuò)增技術(shù)有以PCR為代表的多種方法。產(chǎn)物檢測(cè)則是通過某種特定方法，確認(rèn)擴(kuò)增出來的大量核酸就是檢測(cè)目標(biāo)(即乙肝病毒DNA)。與擴(kuò)增技術(shù)相比，目前檢測(cè)方法則相對(duì)甚少。高效定量(CAD)PCR的獨(dú)特之處便是在檢測(cè)方面有其突出貢獻(xiàn)(詳見后述) 。 PCR及相關(guān)檢測(cè)技術(shù)PCR技術(shù)是目前世界上應(yīng)用最廣泛的核酸擴(kuò)增方法，也是高效定量(CAD)PCR中不可替代的關(guān)鍵步驟，故在此介紹一下PCR的技術(shù)背景。. PCR技術(shù)原理PCR技術(shù)是以一條病源(如乙肝病毒)DNA或RNA為模板，在人工控制的條件下，通過DNA合成酶的作用，經(jīng)過數(shù)十次溫度變化周期，于試管中復(fù)制出數(shù)以億計(jì)的完全一樣的DNA片段。如此眾多的DNA復(fù)制片段使得核酸檢測(cè)成為可能。. 與PCR相關(guān)的檢測(cè)技術(shù)這些復(fù)制出來的眾多DNA片段還要通過進(jìn)一步檢測(cè)，以確定是否真的是靶標(biāo)DNA。目前已有少數(shù)幾種成熟的檢測(cè)方法，但是只有Roche公司的熒光(TaqMan)PCR方法達(dá)到了單一步驟均一閉合系統(tǒng)檢測(cè)的水平。這里所說的單一步驟均一閉合系統(tǒng)在檢測(cè)中至關(guān)重要，下面詳細(xì)介紹。. 核酸的單一步驟均一閉合系統(tǒng)檢測(cè)首先討論非單一步驟均一閉合系統(tǒng)檢測(cè)。當(dāng)PCR在一個(gè)閉合容器內(nèi)完成后，將此閉合容器打開，取出眾多的DNA復(fù)制片段，移至另一容器中進(jìn)行檢測(cè)，如分子雜交，熒光染色，基因芯片等。此方法致命缺陷在于，一旦閉合容器被打開，大量的DNA復(fù)制片段在取出過程中，造成實(shí)驗(yàn)室交叉污染。因?yàn)镈NA十分穩(wěn)定，極難清洗，許多實(shí)驗(yàn)室因此而廢棄，為行業(yè)中大忌，另外也花費(fèi)更長(zhǎng)時(shí)間。例如目前國(guó)內(nèi)已宣布的一種非典檢測(cè)試劑以基因芯片為檢測(cè)手段，就屬于非均一閉合系統(tǒng)檢測(cè)。單一步驟均一閉合系統(tǒng)檢測(cè)就是把檢測(cè)染色試劑在PCR開始前即加入PCR反應(yīng)容器，使擴(kuò)增和檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行，擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，檢測(cè)反應(yīng)也同時(shí)完成，不必打開容器，取出DNA。這樣既消除了交叉污染，又節(jié)省了時(shí)間，還能在反應(yīng)過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，從而達(dá)到定量檢測(cè)的效果。目前只有熒光(TaqMan)PCR技術(shù)既能達(dá)到單一步驟均一閉合系統(tǒng)檢測(cè)，又推出了商業(yè)產(chǎn)品。 熒光(TaqMan)PCR技術(shù)Roche公司以其強(qiáng)大的技術(shù)優(yōu)勢(shì)和雄厚的財(cái)務(wù)實(shí)力于幾年前并購(gòu)了TaqMan公司，緊接著推出了熒光(TaqMan)PCR產(chǎn)品，以其明顯的優(yōu)越性很快就成為了行業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品，在中國(guó)目前臨床檢驗(yàn)所用的核酸檢測(cè)產(chǎn)品基本上都是此種產(chǎn)品。但該產(chǎn)品也有其難以克服的缺陷。. 熒光(TaqMan)PCR的特點(diǎn). 迅速：整個(gè)過程在2小時(shí)內(nèi)完成。. 清潔：不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)室造成交叉污染。. 定量：通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，定量檢測(cè)病源體。. 檢測(cè)方便：與探針聯(lián)接的熒光標(biāo)記物被新合成的DNA分子激活而發(fā)出熒光，由PCR儀上附設(shè)的熒光光度儀直接讀數(shù)即可，數(shù)據(jù)分析也可以由機(jī)器附帶的電腦軟件同時(shí)完成。. 熒光(TaqMan)PCR的缺陷熒光(TaqMan)PCR必須使用一種特殊的DNA合成酶(Taq合成酶)，而這種酶的生物活性有些天生難以克服的缺陷。該技術(shù)存在的所有問題基本都是由所用的酶系造成的，主要有以下表現(xiàn)。. 熱穩(wěn)定性差。由於該技術(shù)使用的DNA合成酶的最適溫度遠(yuǎn)低于PCR的反應(yīng)溫度，因此該酶在反應(yīng)后期容易降解而失去活性，造成信噪比很低。在標(biāo)本樣品中病源體含量低時(shí)(100拷貝)，經(jīng)常產(chǎn)生假陰性結(jié)果。假陰性會(huì)在臨床上產(chǎn)生大量疑似病例，如今年SARS流行時(shí)大量疑似患者的隔離。這樣就起不到早期檢測(cè)的效果。. 準(zhǔn)確性差由於熒光(TaqMan)PCR所用DNA合成酶的保真度和特異性差，導(dǎo)致大量復(fù)制錯(cuò)誤，降低了擴(kuò)增反應(yīng)的準(zhǔn)確性，從而大大影響了定量檢測(cè)的結(jié)果。. 對(duì)各種DNA合成抑制劑均敏感由於所用的DNA合成酶對(duì)多種抑制劑都過於敏感，因此熒光(TaqMan)PCR對(duì)樣品的前處理和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求極高，稍有不慎就會(huì)使酶失活，擴(kuò)增反應(yīng)停止，因而出現(xiàn)大量假陰性結(jié)果。中國(guó)大多數(shù)臨床實(shí)驗(yàn)室條件普遍偏低，急需一種更適合中國(guó)國(guó)情的高質(zhì)量產(chǎn)品替代熒光(TaqMan)PCR,. 無模板合成多年來熒光(TaqMan)PCR的使用結(jié)果顯示，其所用的酶生物活性不穩(wěn)定，經(jīng)常有無模板聚合反應(yīng)，即合成出的DNA并非模板的復(fù)制物，由此產(chǎn)生多種意想不到的結(jié)果，既有假陰性，也有假陽性，大大降低了其使用效果。. 價(jià)格昂貴熒光(TaqMan)PCR的專利為Roche公司擁有。該公司已宣布正在加緊開發(fā)以熒光(TaqMan)PCR為基礎(chǔ)的SARS檢測(cè)試劑盒，并將于今年秋季投放中國(guó)市場(chǎng)。它選擇的時(shí)機(jī)說明了它要在今年冬季可能出現(xiàn)的SARS高峰期搶占中國(guó)SARS檢測(cè)市場(chǎng)的企圖。而中國(guó)公司迄今已開發(fā)出的SARS檢測(cè)產(chǎn)品絕大多數(shù)都是基於熒光(TaqMan)PCR技術(shù)的，屆時(shí)將在知識(shí)產(chǎn)權(quán)方面受到來自Roche的強(qiáng)大挑戰(zhàn)。中國(guó)要么向Roche支付天價(jià)的專利使用費(fèi)，要么將本國(guó)SARS檢測(cè)市場(chǎng)拱手讓給Roche。在這種情況下，高效定量(CAD)PCR就成了中國(guó)人民可以用來對(duì)抗SARS可能回潮的唯一有效的檢測(cè)手段。在其他疾病的檢測(cè)方面，中國(guó)也面臨同樣的問題。 高效定量(CAD)PCR技術(shù). 高效定量(CAD)PCR技術(shù)的特點(diǎn)高效定量(CAD)PCR是一種將PCR與單一步驟均一閉合系統(tǒng)檢測(cè)巧妙結(jié)合起來的最新核酸檢測(cè)平臺(tái)技術(shù)，是下一代的實(shí)時(shí)定量PCR。高效定量(CAD)PCR汲取了熒光(TaqMan)PCR的優(yōu)點(diǎn)，并對(duì)熒光(TaqMan)PCR的熒光染色檢測(cè)方法及所用的酶系做了革命性的改進(jìn)。高效定量(CAD)PCR已于2002年申請(qǐng)了專利。 鑒于熒光(TaqMan)PCR所用的酶的缺陷，高效定量(CAD)PCR采用了一種全新的DNA合成酶。這種酶具有熱穩(wěn)定性高，擴(kuò)增保真度和準(zhǔn)確性高，不易受核酸合成酶抑制因子的影響，主要生物活性指標(biāo)均穩(wěn)定等明顯優(yōu)點(diǎn)。另外，因?yàn)榇思夹g(shù)的專利為中國(guó)人所擁有，所以不必要擔(dān)心高昂的技術(shù)轉(zhuǎn)讓費(fèi)。高效定量(CAD)P