【正文】 0~100MCH pg 27~35 臨床意義見貧血形態(tài)學分類MCHC g/L 310~370RDWCV % ~ 是反映紅細胞大小的客觀指標，增加RDWSD fl ~ 見于缺鐵性貧血、營養(yǎng)不良性貧血。貧 血 的 形 態(tài) 學 分 類1．Wintrobe分類法分類依據(jù)：MCV、MCH、MCHC這三個參數(shù)是否正常為依據(jù)。類 型MCV(80~100)MCH(27~35)MCHC(310~370)常 見 疾 病大細胞性貧血10035310~370巨幼細胞貧血、非巨幼細胞性大細胞貧血正常細胞性貧血80~10027~35310~370急性失血性貧血、溶血性貧血、癥狀性貧血、再生障礙性貧血單純小細胞性貧血8027310~370亞急性或慢性炎癥小細胞低色素貧血8027310缺鐵性貧血、鐵粒幼細胞貧血、珠蛋白生成障礙性貧血、鉛中毒貧血2．Bessman分類法 分類依據(jù)：以MCV、RDW是否正常為分類依據(jù)。類 型MCV(80~100)HDW(%)常 見 疾 病小細胞均一性貧血降低正常雜合子珠蛋白生成障礙性貧血、慢性疾病小細胞不均一性貧血降低上升缺鐵性貧血、血紅蛋白S(HbS)、β珠蛋白生成障礙性貧血、紅細胞破碎綜合癥、血紅蛋白H(HbH)正細胞均一性貧血正常正常少部分再生障礙性貧血、慢性粒細胞性或淋巴細胞性白血病、出血、慢性疾病、輸血、化療正細胞不均一性貧血正常上升缺鐵性貧血、缺葉酸或維生素B12雙相性貧血、鐵粒幼細胞貧血、溶血性貧血、骨髓纖維化大細胞均一性貧血增加正常多數(shù)再生障礙性貧血、前白血病、白細胞明顯增高的淋巴細胞白血病大細胞不均一性貧血增加上升缺葉酸或維生素B12缺乏性貧血、免疫性貧血貧血病因?qū)W分類根據(jù)貧血發(fā)生的不同機制進行分類。類 型發(fā) 病 機 制疾 病紅細胞生成減少 骨髓功能衰竭造血干細胞減少再生障礙性貧血造血干細胞或祖細胞暫時受抑制急性造血功能停滯紅系干細胞缺乏單純紅細胞再生障礙性貧血、先天性紅細胞生成障礙性貧血造血物質(zhì)缺乏或利用障礙造血調(diào)控因子缺乏腎性貧血、內(nèi)分泌紊亂所致貧血鐵缺乏缺鐵性貧血鐵利用障礙鐵粒幼細胞貧血單核巨噬系統(tǒng)鐵釋放障礙炎癥、感染所致慢性疾病貧血鐵運轉(zhuǎn)障礙先天性運鐵蛋白缺乏癥銅缺乏缺銅性貧血DNA合成障礙葉酸、維生素B12缺乏性巨幼細胞貧血及其他巨細胞貧血紅細胞破壞過多紅細胞酶缺陷遺傳性球性紅細胞增多癥遺傳性橢圓形紅細胞增多癥遺傳口形紅細胞增多癥遺傳性棘形細胞增多癥紅細胞酶缺陷遺傳性紅細胞G6PD缺乏癥遺傳性紅細胞丙酮酸激酶缺乏癥糖無氧酵解、戊糖旁路及谷胱甘肽代謝中其他酶缺乏所致溶血性貧血血紅蛋白異常 珠蛋白合成減少珠蛋白生成障礙性貧血、鐮狀細胞貧血、血紅蛋白C,D,E(HbC,D,E)病 珠蛋白結(jié)構(gòu)異常不穩(wěn)定Hb所致溶血性貧血 紅細胞對外補體過敏陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥類 型發(fā) 病 機 制疾 病紅細胞外在異常免疫反應 自身免疫溫抗體型自身免疫性溶血性貧血冷凝血綜合癥 同種免疫新生兒ABO溶血病、新生兒Rh溶血病、血型不合輸血后溶血病 藥物誘發(fā)免疫藥物性免疫性溶血性貧血機械性損傷紅細胞破碎綜合癥、行軍性Hb尿高溫燒傷所致溶血性疾病化學物質(zhì)藥物和化學毒物所致溶血性疾病微生物、寄生蟲瘧疾和多種細菌所致溶血性貧血脾功能亢進脾功能亢進所致溶血性貧血紅細胞丟失(失血)急性失血急性失血所致貧血慢性失血慢性失血所致缺鐵性貧血(3). 血小板檢測項目 單位 參考值 臨床意義PLT 109/L 100~300 增加： 急性大出血、急性溶血、真性紅細胞增多癥、原發(fā)性血小板增多癥、慢性粒細胞白血病等。 減少： 急性白血病、再生障礙性貧血、原發(fā)性血小板減少性紫瘢、脾功能亢進、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、DIC、血栓性血小板減少性紫瘢等。MPV fl ~12 增加： 非免疫性血小板破壞、骨髓抑制恢復時期、體外循環(huán)手術后8天、先兆子癇、ITP初期、慢性白血病、心肌梗塞直到7周后、巨血小板綜合癥、脾切除后、原發(fā)性血小板增多癥等。 減少： 再生障礙性貧血、藥物抑制骨髓、巨幼細胞性貧血(治療后上升)、惡性腫瘤化療期、腎移植等。PCT L/L ~ 臨床意義見血小板計數(shù)(PLT)。PDWCV % ~ MPV與MPV呈負的線形相關，急淋、慢淋、糖尿病可正常。巨幼細胞性貧血、惡性貧血PDW升高，血小板體積大小不均是PDW可增加。PLCR % 13~43第二部分 血液分析儀檢測原理簡介一、血液分析儀主要檢測項目1．CBC分析： 只進行細胞計數(shù)和初步分析的檢驗模式。主要項目：WBC、RBC、HCT、HGB、PLT、MCV、MCH、MCHC。2．CBC+DIFF分析： 進行細胞計數(shù)和白細胞分類的檢驗模式。 二分類血液分析儀主要項目： WBC、WSCR%、WLCR%、SWCR、 LWCR、RBC、HGB、HCT、MCV、 MCH、MCHC、RDWCV(或SD)、PLT、 MPV、PDW； WBC、RBC、PLT直方圖。 三分類血液分析儀主要項目： WBC、WSCR%、WMCR%、WLCR%、 WSCR、WMCR、WLCR、RBC、 HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDWCV(或SD)、PLT、MPV、PDW等和WBC、RBC、PLT直方圖。 五分類血液分析儀主要項目： WBC、LYM%、MONO%、NEU%、EOS%、BASO%、LYM、MONO、NEU、EOS、BASO%、RBC、 HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDWCV(或SD)、PLT、MPV、PDW；PLCR等以及WBC、RBC、PLT散點圖、直方圖。3．CBC+DIFF+RET分析： 在某些高檔血液分析儀中還有檢測網(wǎng)織紅細胞的功能，CBC+DIFF+RET分析就是在進行細胞計數(shù)和白細胞分類的基礎上進行網(wǎng)織紅細胞分析的檢驗模式。二、基本原理1．電阻抗原理電阻抗法是血液分析儀中使用最為普遍的方法。其原理如下： 電阻 電源 電 負 流 極 血細胞通過小孔 小 孔 傳感器 正極 電解質(zhì)溶液 血液細胞脈沖信號圖1. 電阻抗法細胞計數(shù)原理圖 如上圖所示，由全血稀釋的懸浮于電解質(zhì)溶液中的細胞流經(jīng)隔板上的一個小孔。正負電極置于小孔兩側(cè)的電解質(zhì)溶液中。電極之間的電源遵守Ohms定律： R=V/I=P(L/a) V：電極兩端的電壓 I： 電流 R：小孔電阻 P：電解質(zhì)阻抗 L：小孔長度 a：小孔橫截面積 當細胞快速通過小孔時，由于是不良導體，小孔電阻R增大，相當于小孔的橫截面積a減小，當電流恒定的情況下，出現(xiàn)瞬間的電壓變化而產(chǎn)生一個電脈沖，電脈沖的數(shù)量就是流經(jīng)小孔的細胞數(shù)。電脈沖的大小與細胞大小成正比。由此對細胞進行計數(shù)和測定細胞大小。 小孔的孔徑影響著測定細胞大小的線性。孔徑50μm小孔適合測定RBC和PLT，孔徑100μm的小孔適合測定WBC。信號/噪聲比影響著測定的分辨率。 由于在實際操作中存在著兩個細胞同時通過小孔而產(chǎn)生重合誤差的現(xiàn)象，多數(shù)血液分析儀通過對一系列不同濃度的標本進行檢測后，繪制出儀器本身所固有的重合誤差曲線。但這種方法仍無法鑒別某一大的電脈沖到底是由一個大的細胞流經(jīng)小孔還是由兩個小細胞同時流經(jīng)小孔所引起。為解決這一問題，有些儀器采用了鞘流技術(見右圖)，由此從根本上減少了重合誤差的發(fā)生。 圖2. 鞘流技術原理示意圖2．光散射原理 光散射測量方法見下圖。同電阻抗法一樣，全血標本首先需要按照一定比例稀釋成細胞懸浮液，在鞘流的作用下形成細胞流，細胞被排列成單列快速通過光學檢測區(qū)，當液流中的細胞與測定光束相交時，由于血細胞透光度與鞘液不同，引起光散射變化，引發(fā)一脈沖信號，信號大小與細胞體積有關，由此來進行細胞計數(shù)和體積測定。這種方法還可以同時對細胞進行多項參數(shù)的分析，如電阻性、光散射、酶含量等。聚光透鏡 流動細胞 收集透鏡 光阻斷器 光電增益管光源 光阻斷器 光阻斷器圖3. 光散射細胞計數(shù)原理示意圖3．血紅蛋白測定 被稀釋的血液加入溶血劑后，紅細胞溶解，釋放血紅蛋白，血紅蛋白同溶血劑形成血紅蛋白衍生物，在特定波長(530~550nm)下比色，吸光度的變化與液體中的HGB含量成比例，儀器便可顯示HGB濃度。 ICSH推薦使用氰化高鐵法，HiCN最大吸收在540nm，儀器的校正必須以HiCN為標準。 目前在血液分析儀中采用的方法有：氰化血紅蛋白、SLS血紅蛋白、季胺鹽血紅蛋白等。其中多數(shù)儀器的溶血劑內(nèi)含有氰化鉀(而不是氰化高鐵)，與血紅蛋白作用后形成氰化血紅蛋白(注意：絕對不是氰化高鐵血紅蛋白)，其特點是顯色穩(wěn)定，最大吸收接近540nm，但吸收光譜與HiCN有明顯不同。 為減少試劑毒性，避免環(huán)境污染，Sysmex的K1000、K4500、KX2SE9000等儀器使用非氰化溶血劑，形成的SLS血紅蛋白與HiCN吸收光譜相似，實驗結(jié)果的準確性、精確性達到含氰化物溶血劑同樣的水平。二、白細胞分類原理1．電阻抗白細胞分類 R1 R2 R3 R4 小型白細胞 中型白細胞 大型白細胞 圖4. 電阻抗白細胞分類計數(shù)示意圖 電阻抗測定法進行白細胞分類數(shù)據(jù)是根據(jù)白細胞體積直方圖計算而得出。經(jīng)溶血劑處理后得到的細胞大小可初步確認其相應的種類：小型白細胞、中型白細胞和大型白細胞。一般認為小型白細胞為淋巴細胞；中型白細胞為單核細胞；大型白細胞為粒細胞。由于溶血試劑的不同，在SYSMEX三分類儀器中：小型白細胞為淋巴細胞；而中型白細胞則包括單核細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞；大型白細胞為嗜中性粒細胞。當單核細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞中的任何一種增加時，中型細胞結(jié)果數(shù)值和圖形都有明顯的變化，作為異常結(jié)果對用戶進行提示，以進行鏡檢確定。與單獨將單核細胞作為中間細胞的儀器相比，在很大程度上降低了假陽性率。 電阻抗原理進行白細胞計數(shù)和分類的儀器可分為兩種：178。 二分類血液分析儀：報告淋巴細胞和其他白細胞的百分比和絕對值；178。 三分類血液分析儀：報告淋巴細胞、中型白細胞和嗜中性粒細胞的百分比和絕對值。(2). 白細胞五分類的工作原理 白細胞五分類血液分析儀是在三分類的基礎上，增加某些檢測手段，使得WBC的分類更為準確、可靠。由于各儀器生產(chǎn)廠家采用不同的方法，其工作原理亦有所不同。178。 Coulter STKS/MAXM 在三分類的基礎上，用電阻抗法測定WBC的大小，用高頻傳導法測定細胞內(nèi)的傳導性，用光散射法測定每個細胞的結(jié)構(gòu)和形狀。以阻抗法測得的信號為Y軸，激光散射信號為X軸作散點圖，從而將白細胞分類。178。 Sysmex NE系列 在三分類的基礎上，用甲醛和溶血劑溶解RBC和固定WBC，用阻抗法和高頻傳導測定WBC，區(qū)分LYM、MONO和GRAN。在另外兩個通道中，分別用酸性溶血劑和堿性溶血劑處理血細胞，用阻抗法測定嗜堿性粒細胞和嗜酸性粒細胞。178。 Technicon H系列 配置4個獨立的測定通道：血紅蛋白測定通道、紅細胞/血小板測定通道、嗜堿性粒細胞測定通道和過氧化酶測定通道。 在進行WBC測定時，用十二烷基硫酸鈉、甲醛和山梨醇破壞RBC、固定WBC和使白細胞脫水，用4氯苯酚和H2O2作底物，在過氧化酶的催化下，4氯苯酚在細胞內(nèi)沉淀、著色。由于LYM和BASO無過氧化酶、MONO過氧化酶活性較低、NEU活性較高、EOS活性最強，通過光散射可測定細胞大小和酶活性。以細胞大小為Y軸，酶活性為X軸，作散點圖。從而對WBC進行四分類。 在另一個通道內(nèi)，用酸性表面活性劑進行處理，用光散射法測定嗜堿性粒細胞。178。 Abbott CellDyn 3000/3500 在三分類的基礎上，用合適的試劑使WBC盡可能接近自然狀態(tài)，用激光照射通過四個特定的角度的光散射確定每個細胞的特征，將WBC分成五類。178。 ABX HELLOS/ARGOS 用一種特定的試劑破壞RBC和固定WBC，使嗜酸性粒細胞染色，然后用電阻抗法測定細胞大小，用光學法測定細胞的光吸收，作散點圖進行分類。 嗜堿性粒細胞的測定則是用特定試劑破壞RBC和WBC中的LYM、MONO、NEU、EOS而進行單獨計數(shù)。三、定量方法1．浮球定量技術(SYSMEX專利)： 浮球定量原理如圖所示，當儀器處于待用狀態(tài)時，所有電磁閥處于靜止狀態(tài)，此時NC和NO兩個接口相通，浮球位于計量管的下方。當啟動計數(shù)程序時，SV1和SV4首先被啟動，C和NC接口相通稀釋液吸入，流經(jīng)SV4和SV小孔計數(shù)感應器、SV1和SV3。定量管內(nèi)的小球被推到上方。SV1和SV4