免疫組化染色操作步驟-文庫(kù)吧
2025-06-22 12:48 本頁(yè)面
【正文】 。圖1. 免疫組織化學(xué)基本原理示意圖（引自八年制《組織學(xué)與胚胎學(xué)》）圖2. SP法原理示意圖 SP法與ABC法相似，其不同于ABC法之處在于用生物學(xué)特性與親和素相似的鏈親和素標(biāo)記過(guò)氧化物酶。在標(biāo)本孵育過(guò)一抗和二抗后，加入鏈親和素標(biāo)記的過(guò)氧化物酶使其結(jié)合到二抗的生物素上，最后加入DAB進(jìn)行顯色。與親和素相比，鏈酶親和素的結(jié)合力與親和素相似而非特異性結(jié)合較親和素低。SP法簡(jiǎn)化了操作步驟，同時(shí)也減少了非特異性背景，是目前應(yīng)用最為廣泛的免疫綏化染色技術(shù)。 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：1. 標(biāo)本準(zhǔn)備①石蠟包埋組織切片：由病理室常規(guī)處理②冰凍組織切片：由病理室常規(guī)處理③細(xì)胞爬片：將無(wú)菌蓋玻片置于六孔板中，接種細(xì)胞，待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到60％以上后取出玻片，4%多聚甲醛固定2 h。2. 試劑準(zhǔn)備①抗體選擇單克隆抗體針對(duì)單一表位，具有較高的特異性，但在該表位破壞后將得不到陽(yáng)性結(jié)果；多克隆抗體表位針對(duì)多個(gè)表位，可避免單克隆抗體的缺點(diǎn)，但是可能出現(xiàn)非特異性雜交。因此，不論選擇單克隆還是多克隆抗體，最好同時(shí)購(gòu)買兩個(gè)貨號(hào)的抗體，購(gòu)買抗體時(shí)一定要明確是能夠做IHC的抗體，抗體說(shuō)明書上必須有IHC測(cè)試結(jié)果。如果該分子文獻(xiàn)報(bào)道較多，可選擇文獻(xiàn)上常用的經(jīng)典抗體。②二抗試劑盒目前本實(shí)驗(yàn)室所用二抗試劑盒為L(zhǎng)ife Technologies HistostainPlus Kit (HRP, Broad Spectrum)，貨號(hào)859043，一抗反應(yīng)性有小鼠、大鼠、兔和豚鼠。③DA
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