組織切片免疫組化-張-文庫吧
2025-06-15 09:15 本頁面
【正文】 ） 漂洗前先用自來水洗一遍（漂洗后觀察分色情況）蒸餾水 3min 伊紅 5min 若置于90％酒精中褪色很快，往伊紅中加200ml冰醋酸，攪勻，重復(fù)染色至深桃紅（染色穩(wěn)定后一般不再加冰醋酸）70％乙醇 浸提80％乙醇 浸提90％乙醇 3min95％乙醇① 5min95％乙醇② 5min100％乙醇① 5min100％乙醇② 5min二甲苯＋100％乙醇（1：1） 3min二甲苯①3min二甲苯②3min （浸在二甲苯中，一片封完取另一片）封片封片擦干二甲苯中性樹膠滴于組織邊蓋玻片朝上一面酒精燈上晃一下（去水分）蓋玻片一邊小心置于樹膠液滴外沿輕輕蓋上（組織應(yīng)在中間）置片盤晾干（片盤晾干）【從脫蠟起直至封片，注意組織片均不能干】【看片時(shí)，若是蘇木精顏色有點(diǎn)發(fā)黑，說明透明時(shí)組織干了】【看片時(shí)，若發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)，一要注意蘇木精染色時(shí)要去氧化物，染色時(shí)要輕放輕取，二要在自來水漂洗前將水龍頭包上棉花，紗布過濾】免疫組化：修復(fù)檸檬酸緩沖液放在燒杯中，置于水浴中，當(dāng)檸檬酸緩沖液溫度達(dá)到95度時(shí)，將玻片放入檸檬酸緩沖液中，當(dāng)溫度達(dá)到92度開始計(jì)時(shí)9298度30min，取出涼到室溫，再將玻片取出，（檸檬酸緩沖液只能使用一次）。然后蒸餾水洗，PBS洗5min，3次，最后一次時(shí)間可長，1擦去玻片周圍的水，放置在濕盒中，加B液，蓋上濕盒；2再取另一片重復(fù)上一步，大約9片后計(jì)時(shí)15min；然后全部結(jié)束；，從第一片開始取出玻片用蒸餾水沖洗23次，放入浸在PBS的架子上，繼續(xù)另一片；4．全部結(jié)束后計(jì)時(shí)5min，3次，期間提起架子混勻液體。，取出按照1和2的步驟加一抗，和空缺一抗對(duì)照；【注意放置一抗過夜時(shí)一定要放平濕盒，保證液滴不流，否則標(biāo)本會(huì)干】6．重復(fù)3和4步7 重復(fù)5加A液8重復(fù)69重復(fù)5加DAB顯色液6min10蒸餾水沖洗，終止顯色，浸入蒸餾水中的架子上；蘇木精復(fù)染同前蘇木精染色。直至封片。試劑的配制：1. 各級(jí)濃度酒精2. 1％伊紅：1g曙紅Y溶于100ml 70％乙醇中3. Harris (德國最好) 蘇木精1g10ml 無水乙醇（充分溶解）鉀礬20g200ml 蒸餾水?dāng)嚢柚蠓? 蘇木色精，上海潤捷化學(xué)試劑有限公司，進(jìn)口分裝；生化試劑。十二水合硫酸鋁鉀，廣東汕頭西隴化工廠4. 蘇木精酒精液攪拌緩慢礬液（微沸）（逐漸少量加入，邊加入邊攪拌，防止染液濺出冷水浴(充分冷卻或過夜)過濾（準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)時(shí)配制，若染不上再配）紅色氧化汞廣東汕頭西隴化工廠5. 苦味酸飽和水溶液 苦味酸（－三硝基酚）picric acid6. 酸酒精（1%鹽酸）1ml鹽酸 100ml 70％酒精 鹽酸：廣東汕頭市西隴化工廠
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1