【正文】 析（chromatography）(二)填空題（二）填空題1． 氨；羧基；2． 16 ；3． 谷氨酸；天冬氨酸；絲氨酸；蘇氨酸 半胱氨酸4． 苯丙氨酸；酪氨酸；色氨酸；紫外吸收5． 負(fù)極6． 組氨酸；半胱氨酸；蛋氨酸7． α螺旋結(jié)構(gòu)；β折疊結(jié)構(gòu)8． C=O；N=H；氫；； ；；右9． 脯氨酸；羥脯氨酸10．極性；疏水性11．藍(lán)紫色；脯氨酸12．肽鍵；二硫鍵；氫鍵；次級(jí)鍵；氫鍵；離子鍵；疏水鍵；范德華力13．表面的水化膜；同性電荷14．谷胱甘肽；巰基；還原劑15．增加；鹽溶；減小；沉淀析出；鹽析；蛋白質(zhì)分離16．帶電荷量；分子大小；分子形狀；方向；速率17．兩性離子；最小18．FDNB 法（2,4二硝基氟苯法）；Edman 降解法（苯異硫氫酸酯法）19．沉降法；凝膠過濾法；SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法（SDSPAGE 法）20．不動(dòng)；向正極移動(dòng)；向負(fù)極移動(dòng)；21．兩性離子；負(fù)；22．23．氫鍵；24．C；a；b25．16 672； 66 687；26．50 圈；27nm1．蛋白質(zhì)多肽鏈中的肽鍵是通過一個(gè)氨基酸的_羧基____基和另一氨基酸的_氨基____基連接而形成的。2．大多數(shù)蛋白質(zhì)中氮的含量較恒定，平均為_16__%，如測(cè)得 1 克樣品含氮量為 10mg,則蛋白質(zhì)含量為____%。3．在 20 種氨基酸中，酸性氨基酸有____天冬氨酸_____和___谷氨酸_____2 種，具有羥基的氨基酸是___絲氨酸_____和__蘇氨酸_______，能形成二硫鍵的氨基酸是_____半胱氨酸_____.4．蛋白質(zhì)中的___酪氨酸______、___色氨酸________和____苯丙氨酸______3 種氨基酸具有紫外吸收特性，因而色氨酸 使蛋白質(zhì)在 280nm 處有最大吸收值。5．精氨酸的 pI 值為 ,將其溶于 pH7 的緩沖液中，并置于電場(chǎng)中，則精氨酸應(yīng)向電場(chǎng)的___陰極____方向移動(dòng)。6．組成蛋白質(zhì)的 20 種氨基酸中，含有咪唑環(huán)的氨基酸是___組氨酸_____，含硫的氨基酸有__半胱氨酸_______和_____甲硫氨酸______。7．蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)最基本的有兩種類型，它們是_____α螺旋________和_____β折疊_________。8．α螺旋結(jié)構(gòu)是由同一肽鏈的___羰基氧____和_亞氨基_______間的__氫鍵_鍵維持的，,每。天然蛋白質(zhì)分子中的α螺旋大都屬于_右手__手螺旋。9．在蛋白質(zhì)的α螺旋結(jié)構(gòu)中，在環(huán)狀氨基酸__脯氨酸__羥脯氨酸____存在處局部螺旋結(jié)構(gòu)中斷。10．球狀蛋白質(zhì)中有__親水___側(cè)鏈的氨基酸殘基常位于分子表面而與水結(jié)合，而有_疏水______側(cè)鏈的氨基酸位于分子的內(nèi)部。11．氨基酸與茚三酮發(fā)生氧化脫羧脫氨反應(yīng)生成__紫色____色化合物，而__脯氨酸______與茚三酮反應(yīng)生成黃色化合物。12．維持蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)的化學(xué)鍵有___肽鍵____和__二硫鍵_____；維持二級(jí)結(jié)構(gòu)靠___氫鍵_____鍵；維持三級(jí)結(jié)構(gòu)和四級(jí)結(jié)構(gòu)靠__次級(jí)鍵_______鍵，其中包括___疏水作用_____、__范德華力______、_離子鍵_______和_________.13．穩(wěn)定蛋白質(zhì)膠體的因素是____水化層______________和______電荷層________________。14． GSH 的中文名稱是 _谷胱甘肽___________，它的活性基團(tuán)是 __________，它的生化功能是____________________。15．加入低濃度的中性鹽可使蛋白質(zhì)溶解度_增大_______，這種現(xiàn)象稱為___鹽溶_____，而加入高濃度的中性鹽，當(dāng)達(dá)到一定的鹽飽和度時(shí)，可使蛋白質(zhì)的溶解度_減小_____并___沉淀_______,這種現(xiàn)象稱為___鹽溶____,蛋白質(zhì)的這種性質(zhì)常用于____蛋白質(zhì)的提純_________。16．用電泳方法分離蛋白質(zhì)的原理，是在一定的 pH 條件下，不同蛋白質(zhì)的__帶電荷量______、__相對(duì)分子質(zhì)量_______和____極性_______不同，因而在電場(chǎng)中移動(dòng)的__方向_____和__快慢_____不同，從而使蛋白質(zhì)得到分離。17．氨基酸處于等電狀態(tài)時(shí)，主要是以_兼性離子_______形式存在，此時(shí)它的溶解度最小。?18．鑒定蛋白質(zhì)多肽鏈氨基末端常用的方法有__________和_______________。FDNB 法（2,4二硝基氟苯法）；Edman 降解法（苯異硫氫酸酯法）?19．測(cè)定蛋白質(zhì)分子量的方法有_________、____________和__________________。沉降法；凝膠過濾法；SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法（SDSPAGE 法）20．今有甲、乙、丙三種蛋白質(zhì)，它們的等電點(diǎn)分別為 、 和 ,當(dāng)在 緩沖液中，它們?cè)陔妶?chǎng)中電泳的情況為：甲_不移動(dòng)______，乙__陰極_____，丙____陽極____。21．當(dāng)氨基酸溶液的 pH=pI 時(shí)，氨基酸以__兼性離子___離子形式存在，當(dāng) pHpI 時(shí)，氨基酸以_負(fù)______離子形式存在。22．谷氨酸的pK1(αCOOH)＝, pK2 (αNH+3 ) = , pKR(R基)= ,谷氨酸的等電。23．天然蛋白質(zhì)中的α—螺旋結(jié)構(gòu)，其主鏈上所有的羰基氧與亞氨基氫都參與了鏈內(nèi)__氫鍵___鍵的形成，因此構(gòu)象相當(dāng)穩(wěn)定。24．將分子量分別為 a（90 000）、b（45 000）、c（110 000）的三種蛋白質(zhì)混合溶液進(jìn)行凝膠過濾層析，它們被洗脫下來的先后順序是___cab_________。25．肌紅蛋白的含鐵量為 %， %，但每分子含有 4 個(gè)鐵原子， 672； 66 687；26．一個(gè)α螺旋片段含有 180 個(gè)氨基酸殘基，該片段中有__50___圈螺旋？該α螺旋片段的軸長(zhǎng)為_27nm____.(三) 選擇題C：5 種氨基酸中只有賴氨酸為堿性氨基酸，其等電點(diǎn)為 ,大于生理 pH 值，所以帶正電荷。2．B：人（或哺乳動(dòng)物）的必需氨基酸包括賴氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸 8 種，酪氨酸不是必需氨基酸。3．A：酪氨酸和苯丙氨酸在 280nm 處的克分子消光系數(shù)分別為 540 何 120,所以酪氨酸比苯丙氨酸有較大吸收，而且大多數(shù)蛋白質(zhì)中都含有酪氨酸。肽鍵的最大吸收在 215nm,半胱氨酸的硫原子在 280nm 和 215nm 均無明顯吸收。4．D：在此 4 種氨基酸中，只有賴氨酸的 R 基團(tuán)可接受氫質(zhì)子，作為堿，而其它 3 種氨基酸均無可解離的 R 側(cè)鏈。5．B：氨基酸的α碳上連接的是亞氨基而不是氨基，所以實(shí)際上屬于一種亞氨基酸，而其它氨基酸的 α碳上都連接有氨基，是氨基酸。6．B：天然蛋白質(zhì)的α螺旋結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)是，肽鏈圍繞中心軸旋轉(zhuǎn)形成螺旋結(jié)構(gòu)，而不是充分伸展的結(jié)構(gòu)。另外在每個(gè)螺旋中含有 個(gè)氨基酸殘基，螺距為 ,每個(gè)氨基酸殘基上升高度為 ,所以 B 不是α螺旋結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)。7．C：蛋白質(zhì)處于等電點(diǎn)時(shí)，凈電荷為零，失去蛋白質(zhì)分子表面的同性電荷互相排斥的穩(wěn)定因素，此時(shí)溶解度最??；加入少量中性鹽可增加蛋白質(zhì)的溶解度，即鹽溶現(xiàn)象；因?yàn)榈鞍踪|(zhì)中含有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸，所以具有紫外吸收特性；變性蛋白質(zhì)的溶解度減小而不是增加，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)變性后，近似于球狀的空間構(gòu)象被破壞，變成松散的結(jié)構(gòu)，原來處于分子內(nèi)部的疏水性氨基酸側(cè)鏈暴露于分子表面，減小了與水分子的作用，從而使蛋白質(zhì)溶解度減小并沉淀。8．C：甘氨酸的α碳原子連接的 4 個(gè)原子和基團(tuán)中有 2 個(gè)是氫原子，所以不是不對(duì)稱碳原子，沒有立體異構(gòu)體，所以不具有旋光性。9．B：雙縮脲反應(yīng)是指含有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物（肽及蛋白質(zhì)）與稀硫酸銅的堿性溶液反應(yīng)生成紫色（或青紫色）化合物的反應(yīng)，產(chǎn)生顏色的深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比，所以可用于蛋白質(zhì)的定量測(cè)定。茚三酮反應(yīng)是氨基酸的游離的αNH 與茚三酮之間的反應(yīng)；凱氏定氮法是測(cè)定蛋白質(zhì)消化后產(chǎn)生的氨；紫外吸收法是通過測(cè)定蛋白質(zhì)的紫外消光值定量測(cè)定蛋白質(zhì)的方法，因?yàn)榇蠖鄶?shù)蛋白質(zhì)都含有酪氨酸，有些還含有色氨酸或苯丙氨酸，這三種氨基酸具有紫外吸收特性，所以紫外吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比。10．D：靡蛋白酶即胰凝乳蛋白酶作用于酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸的羧基參與形成的肽鍵；羧肽酶是從肽鏈的羧基端開始水解肽鍵的外肽酶；氨肽酶是從肽鏈的氨基端開始水解肽鍵的外肽酶；胰蛋白酶可以專一地水解堿性氨基酸的羧基參與形成的肽鍵。11．A：蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)是指蛋白質(zhì)分子內(nèi)的正電荷桌能總數(shù)與負(fù)電荷總數(shù)相等時(shí)的 pH 值。蛋白質(zhì)鹽析的條件是加入足量的中性鹽，如果加入少量中性鹽不但不會(huì)使蛋白質(zhì)沉淀析出反而會(huì)增加其溶解度，即鹽溶。在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)的凈電荷為零，分子間的凈電斥力最小，所以溶解度最小，在溶液中易于沉淀，所以通常沉淀蛋白質(zhì)應(yīng)調(diào) pH 至等電點(diǎn)。12．A：在蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)中，通常是疏水性氨基酸的側(cè)鏈存在于分子的內(nèi)部，因?yàn)槭杷曰鶊F(tuán)避開水相而聚集在一起，而親水側(cè)鏈分布在分子的表面以充分地與水作用；蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)是多肽鏈中氨基酸的排列順序，此順序即決定了肽鏈形成二級(jí)結(jié)構(gòu)的類型以及更高層次的結(jié)構(gòu)；維持蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的作用力主要是次級(jí)鍵。13．E：脯氨酸是亞氨基酸,參與形成肽鍵后不能再與C=O 氧形成氫鍵，因此不能形成α螺旋結(jié)構(gòu)。氨基酸殘基的支鏈大時(shí)，空間位阻大，妨礙螺旋結(jié)構(gòu)的形成；連續(xù)出現(xiàn)多個(gè)酸性氨基酸或堿性氨基酸時(shí)，同性電荷會(huì)互相排斥，所以不能形成穩(wěn)定的螺旋結(jié)構(gòu)。14．C：β折疊結(jié)構(gòu)是一種常見的蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的類型，分為平行和反平行兩種排列方式，所以題中 C 項(xiàng)的說法是錯(cuò)誤的。在β折疊結(jié)構(gòu)中肽鏈處于曲折的伸展?fàn)顟B(tài)，氨基酸殘基之間的軸心距離為 , 相鄰肽鏈（或同一肽鏈中的幾個(gè)肽段）之間形成氫鍵而使結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。15．C：蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的兩種主要類型是α螺旋結(jié)構(gòu)和 β折疊結(jié)構(gòu)。在 α螺旋結(jié)構(gòu)中肽鏈上的所有氨基酸殘基均參與氫鍵的形成以維持螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。在 β折疊結(jié)構(gòu)中，相鄰肽鏈或肽段之間形成氫鍵以維持結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定，所以氫鍵是維持蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的主要作用力。離子鍵、疏水鍵和范德華力在維持蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)和四級(jí)結(jié)構(gòu)中起重要作用，而二硫鍵在穩(wěn)定蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)中起一定作用。16．E：肽鍵是連接氨基酸的共價(jià)鍵，它是維持蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的作用力；而硫鍵是 2 分子半胱氨酸的巰基脫氫氧化形成的共價(jià)鍵，它可以存在于 2 條肽鏈之間也可以由存在于同一條肽鏈的 2 個(gè)不相鄰的半胱氨酸之間，它在維持蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)中起一定作用，但不是最主要的。離子鍵和氫鍵都是維持蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的因素之一，但此項(xiàng)選擇不全面，也不確切。次級(jí)鍵包括氫鍵、離子鍵、疏水鍵和范德華力，所以次項(xiàng)選擇最全面、確切。17．A：用凝膠過濾柱層析分離蛋白質(zhì)是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同進(jìn)行分離的方法，與蛋白質(zhì)分子的帶電狀況無關(guān)。在進(jìn)行凝膠過濾柱層析過程中，比凝膠網(wǎng)眼大的分子不能進(jìn)入網(wǎng)眼內(nèi)，被排阻在凝膠顆粒之外。比凝膠網(wǎng)眼小的顆?？梢赃M(jìn)入網(wǎng)眼內(nèi)，分子越小進(jìn)入網(wǎng)眼的機(jī)會(huì)越多，因此不同大小的分子通過凝膠層析柱時(shí)所經(jīng)的路程距離不同，大分子物質(zhì)經(jīng)過的距離短而先被洗出，小分子物質(zhì)經(jīng)過的距離長(zhǎng)，后被洗脫，從而使蛋白質(zhì)得到分離。18．A：蛋白質(zhì)的變性是其空間結(jié)構(gòu)被破壞，從而引起理化性質(zhì)的改變以及生物活性的喪失，但其一級(jí)結(jié)構(gòu)不發(fā)生改變，所以肽鍵沒有斷裂。蛋白質(zhì)變性的機(jī)理是維持其空間結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的作用力被破壞，氫鍵、離子鍵和疏水鍵都是維持蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的作用力，當(dāng)這些作用力被破壞時(shí)空間結(jié)構(gòu)就被破壞并引起變性，所以與變性有關(guān)。19．A：蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)即蛋白質(zhì)多肽鏈中氨基酸的排列順序決定蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象，因?yàn)橐患?jí)結(jié)構(gòu)中包含著形成空間結(jié)構(gòu)所需要的所有信息，氨基酸殘基的結(jié)構(gòu)和化學(xué)性質(zhì)決定了所組成的蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)的類型以及三級(jí)、四級(jí)結(jié)構(gòu)的構(gòu)象；二硫鍵和次級(jí)鍵都是維持蛋白質(zhì)空間構(gòu)象穩(wěn)定的作用力，但不決定蛋白質(zhì)的構(gòu)象；溫度及 pH 影響蛋白質(zhì)的溶解度、解離狀態(tài)、生物活性等性質(zhì)，但不決定蛋白質(zhì)的構(gòu)象。20．B：