westernblot相關(guān)試劑與步驟-文庫(kù)吧
2025-04-30 23:33 本頁(yè)面
【正文】 Scientific）：（一）器材和試劑準(zhǔn)備：、BCA測(cè)試試劑盒、提蛋白剩余的RIPA蛋白裂解液（二）步驟詳見(jiàn)BCA Protein Assay 使用說(shuō)明書，配制溶液，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定蛋白濃度。（加好各試劑，混合于37攝氏度放置30分鐘）使用Amersham Biosciences GeneQuant Pro分光光度計(jì)的562nm測(cè)試，讀數(shù)三次，取平均值（ug/mL）四、SDS聚丙烯酰胺凝膠的配制（各濃度的配制見(jiàn)配方表）SDSPAGE試劑配制1） 30%丙烯酰胺溶液：丙烯酰胺（Acrylamide） 亞甲雙丙烯酰胺（BisAcrylamide） dddH2O，37℃溶解，定容至100ml，棕色瓶存于4℃。2) 分離膠緩沖液 ( PH ） Tris 1mol/L HCL 調(diào)節(jié)PH（可以使用分析純級(jí)別的濃鹽酸，下同） dddH2O 定容至100mL，4℃保存3) (PH 6. 8）： Tris 1mol/L HCL 調(diào)節(jié)PH dddH2O 定容至100mL，4℃保存4) 10% SDS溶液：SDS dddH2O定容至100ml，室溫保存5） 10%過(guò)硫酸銨（AP）：過(guò)硫酸銨 ，4℃保存，要在一周內(nèi)使用，最好新鮮配制6）TEMED 遮光保存，分裝于EP管凍存五、電泳（一）器材和試劑準(zhǔn)備：電泳儀、電磁鍋、浮板、離心機(jī)、Marker、5上樣緩沖液（loading buffer）、生理鹽水、電泳液5SDSPAGE Loading Buffer配制方法 （20mL體系總體積） ： DTT （DLDithiothreitol，二硫蘇糖醇）（）
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