專(zhuān)題22土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)安中-文庫(kù)吧
2025-04-16 18:57 本頁(yè)面
【正文】 計(jì)算出單位體積內(nèi)的微生物總數(shù)。 優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡(jiǎn)單、能觀察微生物的形態(tài)特征。 缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌和活菌；不適于運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌計(jì)數(shù) 難以計(jì)數(shù)微小的細(xì)菌。 應(yīng)用：一般用于純培養(yǎng)懸浮液中各種單細(xì)胞菌體的計(jì)數(shù)。 （二）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目 （ 活菌計(jì)數(shù)法） ⑴原理： 在稀釋度足夠高時(shí)，微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個(gè)菌落是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成的，即一個(gè)菌落代表原先的一個(gè)單細(xì)胞。 ⑵常用方法：稀釋涂布平板法。 每克樣品中的菌落數(shù)＝ (C247。 V) M 其中， C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)， V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積 (ml)， M代表稀釋倍數(shù)。 注意事項(xiàng) ①為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在 30—— 300的平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)。 ②為使結(jié)果接近真實(shí)值可將 同一稀釋度加到三個(gè)或三個(gè)以上的平皿中 ，經(jīng)涂布，培養(yǎng)計(jì)算出菌落平均數(shù)。 ③ 統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。 ④ 涂布平板法所選擇的稀釋度很重要，一般以三個(gè)稀釋度中的第二個(gè)稀釋度所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在 50個(gè)左右為最好。 說(shuō)明設(shè)置重復(fù)組的重要性 。 第一位同學(xué)只涂布了一個(gè)平板 ， 沒(méi)有設(shè)置重復(fù)組 ， 因此結(jié)果不具有說(shuō)服力 。 第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問(wèn)題 ， 涂布了 3個(gè)平板 ，但是 ， 其中 1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另 2個(gè)相差太遠(yuǎn) ， 說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤 ， 因此 ， 不能簡(jiǎn)單地將 3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來(lái)求平均值 。 這個(gè)實(shí)例啟示學(xué)生 ，在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí) ， 一定要涂布至少 3個(gè)平板 ， 作為重復(fù)組 ，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性 。 在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí) ，一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否一致 ， 結(jié)果不一致 ， 意味著操作有誤 ， 需要重新實(shí)驗(yàn) 。 （三）設(shè)置對(duì)照 對(duì)照實(shí)驗(yàn)： 指除了被測(cè)試條件以外，其他條件都相同的實(shí)驗(yàn)，作用是比照實(shí)驗(yàn)組，排除任何其他可能原因的干擾，證明確實(shí)是所測(cè)試條件引起的相應(yīng)結(jié)果。 對(duì)照實(shí)驗(yàn)的目的： 排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。 一是由于土樣不同 ， 二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤 。 究竟是哪個(gè)原因 ， 可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)證明 。實(shí)驗(yàn)方案有兩種 。 一種方案 是可以由其他同學(xué)用與 A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn) ， 如果結(jié)果與 A同學(xué)一致 ， 則證明 A無(wú)誤；如果結(jié)果不同 ， 則證明 A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問(wèn)題 。
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