《核糖體展示技術(shù)》ppt課件-文庫吧
2025-04-16 01:09 本頁面
【正文】 基因活動，而是通過與稱為轉(zhuǎn)錄因子的這種蛋白質(zhì)結(jié)合而控制基因活動的。質(zhì)粒設(shè)計時都需要加入啟動子序列，以保證目的基因的表達。啟動子可分為誘導(dǎo)型啟動子和組成型啟動子兩大類，后者包括CMV， SV40， T7, pMC1， PGK啟動子等 。 產(chǎn)生 Kawasaki 曾建議采用類似的途徑從肽庫中篩選多肽配體。在此之前，利用前期多肽抗體進行免疫沉淀，已經(jīng)分離到了與核糖體和多肽偶聯(lián)的 mRNA。 Mattheakis等人首次將前人的設(shè)想付諸實踐，建立了篩選多肽類配體的多聚核糖體展示技術(shù)，并從一個庫容為 10^12的肽庫中，篩選到親和力常數(shù)達到 10^9 (nmol級 ) 的固定化單抗的多肽配體。 Gersuk等人利用該技術(shù)也篩選到前列腺癌腫瘤標(biāo)記的多肽配體。體外翻譯時，蛋白或多肽的折疊與翻譯同步進行。與核糖體結(jié)合的天然多肽也具有酶活性。 這些研究結(jié)果說明，如果某種蛋白質(zhì)的折疊不受核糖體蛋白通道的影響，那么與核糖體的解離就不是該蛋白獲得天然構(gòu)像的必要條件。 1997年， Pl252。ckthun 實驗室在以上研究成果的基礎(chǔ)上，對 Mattheakis的多聚核糖體展示技術(shù)進行了改進，建立了體外篩選完整功能蛋白 (如抗體）的新技術(shù)：核糖體展示技術(shù)。 操作步驟 為了使基因片段能有效轉(zhuǎn)錄和翻譯 ,5′ 端應(yīng)接上T7啟動子序列和 SD序列，去掉 3′ 端的終止密碼子 ,從而成功地使核糖體停留在 mRNA3′ 末端 ,將蛋白質(zhì)和mRNA連接在一起。在對基因片段改造時 ,常進行多次延伸 PCR： ①分別將需要的基因片段和間隔序列各自擴出
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