《第四章抗體》ppt課件-文庫吧
2025-01-03 16:24 本頁面
【正文】 一、抗原與動物免疫 制備特定抗原的單克隆抗體，首先要制備用于免疫的適當(dāng)抗原，再用抗原進(jìn)行動物免疫。 有的抗原可以用化學(xué)合成：地高辛 多數(shù)抗原物為混合物須經(jīng)免疫、篩選、克隆化。 為使雜交瘤細(xì)胞穩(wěn)定，免疫動物和骨髓瘤細(xì)胞供體同一品系動物進(jìn)行免疫。 目前常用的骨髓瘤細(xì)胞系多來自 BALB/c小鼠和 LOU大鼠，因此免疫動物也采用相應(yīng)的品系。 免疫的方法 采用體內(nèi)免疫法和體外免疫法。 體內(nèi)免疫法 適用于免疫原性強(qiáng)、抗原量較多時應(yīng)用，一般用 8～ 12周齡雌性鼠。 顆粒性抗原（如細(xì)菌細(xì)胞抗原）的免疫原性強(qiáng)，可不加佐劑，直接注入腹腔 10個細(xì)胞進(jìn)行初次免疫，間隔 1～ 3周，再追加免疫 1～ 2次。 7 可溶性抗原按每只小鼠 10～ 100μg 抗原與福氏完全佐劑等量混合后注 入腹腔內(nèi)，進(jìn)行初次免疫，間隔 2～ 4周，再用不加佐劑原抗原追加免疫 1～ 2次。 一般再采脾細(xì)胞前 3日由靜脈注射最 后一次抗原。刺激 B細(xì)胞分裂。 脾內(nèi)免疫法即在麻醉下直接將 ～ 免疫。細(xì)胞抗原需 105個， 可溶性抗原需 10μg 。 體外免疫法用于不能采用體內(nèi)免疫的情況下，如制備人源性單克隆抗體；免疫源性極弱，易引起免疫抑制。 優(yōu)點(diǎn)：需抗源量少，免疫期短，干擾因素少。 體外免疫法：用 4～ 8周齡 BALB/c 小鼠的脾臟制成單細(xì)胞懸液，再加入適當(dāng)抗原使其濃度達(dá) ～5μg/ml, 在 5% CO 37 C 下培養(yǎng)4～ 5天 ,再分離脾細(xì)胞 ,進(jìn)行細(xì)胞融合。 o 2 o 二、細(xì)胞融合與雜交瘤細(xì)胞的 選擇性培養(yǎng) 細(xì)胞融合的方法： 脾細(xì)胞（ 1 10 ） 骨髓瘤細(xì)胞（ 2 10 ）混合 聚乙二醇誘導(dǎo)下融合， 2分鐘，然后用培養(yǎng)液將融合液緩慢稀釋。 8 7 用于細(xì)胞融合的骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)具有融合率
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1