《植物胚胎培養(yǎng)》ppt課件-文庫(kù)吧
2024-12-29 20:03 本頁(yè)面
【正文】 進(jìn) 行 幾秒 種 的表 面 消毒 ， 再用 無(wú) 菌水 沖 洗34 次 ，然 后 在無(wú) 菌 條件 下 進(jìn)行 解 剖， 取 出胚 并 接種 在 適當(dāng) 的 培養(yǎng) 基 上培 養(yǎng) 。 （2 ）幼胚培養(yǎng) 幼 胚 是指 子 葉期 以 前的 幼 小胚 ， 由于幼 胚 培養(yǎng) 在 遠(yuǎn)緣 雜 交育 種 上有 極 大的 利 用價(jià) 值 ，因 此 ，其 研 究和 應(yīng) 用越 來(lái) 越深 入 和廣泛。 ? Laibach 在1925 ～1929 年 間 ，通 過(guò) 培養(yǎng) 亞 麻種 間 雜種 幼 胚， 成 功地 獲 得了 種 間雜 種 ，首 次 證實(shí) 了 這種 方 法在 實(shí) 際應(yīng) 用 中的 價(jià) 值。 ? 李 繼 侗 ，1933 年 在 銀 杏 培 養(yǎng) 中 發(fā) 現(xiàn) 了 胚 乳 提 取 物能 夠 促 進(jìn) 銀 杏 離 體 胚 的 生 長(zhǎng) 。 這 一 發(fā) 現(xiàn) 為 后 人 使用 植 物 胚 乳 汁 液 、 幼 嫩 種 子 及 果 實(shí) 提 取 液 等 天 然物 質(zhì) 促 進(jìn) 培 養(yǎng) 物 生 長(zhǎng) 具 有 啟 示 作 用 。 ? 隨 著 組 織 培 養(yǎng) 技 術(shù) 的 不 斷 完 善 ， 幼 胚 培 養(yǎng) 技 術(shù) 也在 進(jìn) 步 ， 現(xiàn) 在 可 使 心 形 期 胚 或 更 早 期 的 長(zhǎng) 度 僅 的 胚 生 長(zhǎng) 發(fā) 育 成 植 株 。 現(xiàn) 在 幼 胚 培 養(yǎng) 成功 的 有 大 麥 、 甘 蔗 、 甜 菜 、 胡 蘿 卜 等 。 二 、培養(yǎng)方法 材料的選擇與滅菌 取 回大田 或溫室里 種植的雜 交植物的 子房，用70%的 酒精進(jìn)行 幾秒鐘表 面消毒， % HgCl2滅菌10 ～30min ， 無(wú)菌 水沖洗， 即可用于 外植體的 分離 和培養(yǎng)。 ? 取 材 時(shí)期 大 多 數(shù)幼 胚 培養(yǎng) 成 功的 實(shí) 例證 明 ，適宜 于 幼胚 培 養(yǎng)的 胚 發(fā)育 時(shí) 期多 為 球形 胚 至魚(yú) 雷 形胚 （ 原胚 期 、球 形 胚期 、 心形 胚 期、魚(yú) 雷 胚期 和 子葉 期 ，進(jìn) 而 成為 成 熟的 有 機(jī)體）。 ? (A) globular (B) heart shaped, (C) torpedo ② 幼 胚剝 離 ? 胚 剝 離 的 成 功 與 否 是 幼 胚 培 養(yǎng) 成 功 與 否 的 關(guān) 鍵 。幼 胚 是 一 種 半 透 明 、 高 粘 稠 狀 組 織 ， 剝 離 過(guò) 程 中極 易 失 水 干 縮 ， 一 定 要 注 意 保 濕 ，且 操 作 要 迅 速 。 ? 有 關(guān) 胚 發(fā) 育 的 細(xì) 胞 學(xué) 和 生 理 生 化 研 究 表 明 ， 胚柄積 極 參 與 幼 胚 的 發(fā) 育 ， 特 別 是 球 形 期 以 前 的 幼 胚培 養(yǎng) ， 胚 剝 離 時(shí) 應(yīng) 帶 胚 柄 。 另 外 胚 柄 促 進(jìn) 幼 胚 離體 生 長(zhǎng) 的 作 用 能 被 濃 度 為5mg/L 的 赤 霉 素 （GA）有效 取 代 。 ③ 培 養(yǎng)條 件 的控 制 ? 剝 離 出 來(lái) 的 幼 胚 要 立 即 接 種 到 培 養(yǎng) 基 上 進(jìn) 行 培 養(yǎng) 。 ? 在 培 養(yǎng) 之 前 必 須 對(duì) 所 培 養(yǎng) 的 對(duì) 象 在 自 然 發(fā) 育 條 件下 的 特 性 充 分 了 解 ， 比 如 胚 的 休 眠 問(wèn) 題 、 是 否 需要 春 化 作 用 、 胚 萌 發(fā) 的 溫 度 等 。 2 、幼胚的分離及培養(yǎng) ①幼胚的剝離 ②幼胚的培養(yǎng) 胚胎發(fā)育過(guò)程分為兩個(gè)時(shí)期： 1 ） 異養(yǎng)期（heterotrophy period ），即在胚發(fā)育早期，幼胚由胚乳及周?chē)慕M織提供養(yǎng)分。 2 ） 自養(yǎng)期(autotrophy period) ，胚在代謝上已經(jīng)能在基本的無(wú)機(jī)鹽和蔗糖的合成培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，在營(yíng)養(yǎng)上已相當(dāng)獨(dú)立。 Monnier(1976,1978) 介 紹 了 一 種 培 養(yǎng) 方 法 胚乳看護(hù)培養(yǎng) Ziebur 等 (1951) 報(bào)道，在進(jìn)行大麥未成熟胚離體培養(yǎng) 時(shí)，培養(yǎng)基上存在來(lái)自同一物種另一種子的離體胚乳，對(duì)胚 的生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用。 谷類胚胎嫁接的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)大麥胚移植到小麥的胚乳上 時(shí)，比在大麥胚乳上生長(zhǎng)更好。 Kruse(1974) 在某些屬間雜交中，若把雜交未成熟的胚放 在事先培養(yǎng)的大麥胚乳上培養(yǎng)，能顯著提高獲得雜種植株的 頻率。 大麥（Hordeum vulgare ）黑麥(Secale cereale) 屬間雜交 ，采 用這種方法 有30% ～40% 的雜種 未成熟胚 可以 發(fā)育成苗 ，而 用傳統(tǒng)的 胚培養(yǎng)法只有1%能 成功。 （2 ） 幼胚 離 體培 養(yǎng) 的生 長(zhǎng) 發(fā)育 方 式 ① 胚 性 發(fā) 育(embryonal development) 幼 胚 接 種到 培 養(yǎng)基 上 以后 ， 仍然 按 照在活 體 內(nèi)的 發(fā) 育方 式 發(fā)育 ， 最后 形 成成 熟 胚( 有 時(shí) 甚至 可 能類 似 種子) ， 然后 再 按種 子萌 發(fā) 途徑 出 苗形 成 完整 植 株 ， 這 種途 徑 發(fā)育 的 幼胚 一 般一 個(gè) 幼胚 將 來(lái)就 是 一個(gè) 植 株。 ② 早 熟 萌 發(fā)(early mature sprouting) 幼 胚 接 種后 ， 離體 胚 不繼 續(xù) 胚性 生 長(zhǎng)，而 是 在培 養(yǎng) 基上 迅 速 萌 發(fā) 成幼 苗 ，通 常 稱之 為 早熟 萌 發(fā)（ 未 經(jīng)完 成 正常 的 胚胎 發(fā) 育過(guò) 程 而形 成 幼苗 的 現(xiàn)象 叫 早熟 萌 發(fā)）。 在 大 多 數(shù)情 況 下， 一 個(gè)幼 胚 萌發(fā) 成 一個(gè)植 株 ，但 有 時(shí)會(huì) 由 于細(xì) 胞 分裂 產(chǎn) 生大 量 的胚 性 細(xì)胞 ， 以后 形 成許 多 胚狀 體 ，從 而 可以 形 成許 多 植株 ， 這種 現(xiàn) 象就 是 所謂 的 叢生 胚 現(xiàn)象 。 ③ 愈 傷組 織(callus) 在 許 多 情況 下 ，幼 胚 在離 體 培養(yǎng) 中 首先發(fā) 生 細(xì)胞 增 殖， 形 成 愈 傷 組織 。 一般 來(lái) 講由 胚 形成 的 愈傷 組 織大 多 為胚 性 愈傷 組 織 ，這 種 胚 性 愈 傷組 織 很容 易 分 化形 成 植株 。 （3 ） 離體 幼 胚培 養(yǎng) 的影 響 因素 ① 培 養(yǎng)基 胚 的 成 熟程 度 不同 ， 所用 培 養(yǎng)基 的 類型 也 不同 。 ? 成 熟 胚的 培 養(yǎng)基
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