《核酸類藥物的分析》ppt課件-文庫吧
2024-12-21 12:06 本頁面
【正文】 N2二甲基鳥嘌呤。 ? 嘧啶 —— 5甲基胞嘧啶、 5羥甲基胞嘧啶、二氫尿嘧啶、 4巰尿嘧啶 ? 都是基本堿基的 化學(xué)修飾型 。 NNNNONH2H鳥嘌呤 NNNNOH次黃嘌呤 CH31甲基次黃嘌呤 二、理化性質(zhì) ?（一）兩性性質(zhì)： 磷酸基；堿基（通常：酸性） pH影響堿基間氫鍵穩(wěn)定： DNA ~ ?（二）水解性： 微溶于水，不溶于一般的有機溶劑 ?（三） UV： λ max=260nm 蛋白質(zhì) 280nm A260/A280 純 DNA＞ 純 RNA應(yīng)達(dá)到 混有雜蛋白 比值降低 ?（四）變性和復(fù)性 ?： 在某些理化因素影響下， DNA雙螺旋區(qū)的氫鍵斷裂和堿基堆積力破壞，有規(guī)律的雙螺旋結(jié)構(gòu)變成單鏈無規(guī)律的 “ 線團 ” ，但不發(fā)生共價鍵的斷裂，這過程稱之。 ?變性原因：高溫（一般＞ 75℃ ）、強氧化劑、強酸、堿、尿素等； ?機理： 雙鏈間氫鍵斷開，成為兩條單鏈（ DNA雙螺旋二級結(jié)構(gòu)的破壞，生物活性的喪失） ?特征性 TmDNA的變性溫度 82~95℃ ? 一定條件下，去除變性因素后，核酸 恢復(fù)二級結(jié)構(gòu)及生物活性的現(xiàn)象 ；通常使用 熱復(fù)性 。（退火） 高溫變性 緩慢冷卻 熱復(fù)性 急速冷卻 復(fù)性失敗 熱復(fù)性在基因測序中被廣泛應(yīng)用 ?（五）顏色反應(yīng) ? 苔黑酚反應(yīng) : RNA中核糖 +濃 HCl（濃 H2SO4） → 糠醛 +苔黑酚 → 深綠色化合物（ λ max=670nm ） ? 二苯胺反應(yīng) : DNA中脫氧核糖 +濃 H2SO4 →5 羥基 4羰基戊醛 +二苯胺 → 藍(lán)色化合物（ λ max=595nm ） ? 水解后磷酸： 磷酸 +鉬酸 → 磷鉬酸 +還原劑（維生素 C、氯化亞錫等） → 鉬藍(lán)（ λ max=660nm ） Fe3+ 脫水 第二節(jié) 嘌呤類核苷酸藥物分析 ? 嘌呤堿（腺嘌呤、鳥嘌呤） ? 戊糖 ? 磷酸 一、鑒別 ?戊糖鑒別 ?嘌呤鑒別 ?磷酸鑒別 ?特征吸收光譜 ?熔點測定 （一）戊糖的鑒別 ?苔黑酚反應(yīng) （地衣酚反應(yīng)） 凡核糖均有此反應(yīng) 試劑：濃鹽酸，苔黑酚試劑，三氯化鐵（
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