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《重組體的篩選》ppt課件-文庫吧

2024-12-20 21:02 本頁面


【正文】 雜交雙方: 待測的核酸序列 插入片段基因制備的 DNA或 RNA探針 核酸雜交方法: 菌落印跡原位( in situ)雜交 斑點( dot)印跡雜交 Southern印跡雜交 都是通過一定的物理方法將菌落(噬菌斑)或突起的 DNA從平板或凝膠上轉(zhuǎn)移到固體支持物上,然后同液體中的探針進行雜交。 菌落印跡原位雜交 ? 將標(biāo)記的核酸探針與 細(xì)胞或組織中的 核酸進行雜交,稱為原位雜交。 ? 特點 – 能在成分復(fù)雜的組織中進行單一細(xì)胞的研究 – 不需從組織或細(xì)胞中提取核酸,對含量極低的靶序列靈敏度高 – 能準(zhǔn)確反映組織細(xì)胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài) 實驗步驟 Smad2 mRNA在系膜增生型 IgA腎病腎小球的表達(dá) 原位雜交 200 肺腺癌 β cat mRNA 原位雜交法 400 斑點印跡雜交 ★ 斑點印跡雜交與菌落原位雜交的原理相同 ★ 將 RNA或 DNA變性后直接點樣于 NC膜或尼龍膜上 ★ 優(yōu)點:簡單、快速、可同時檢測多個樣品 ★ 常用于病毒核酸的定量檢測 RNA或 DNA 變性 NC膜 固定 雜交 放射自顯影 檢測 實驗原理與步驟 提取 堿溶液 點樣 加熱 放射性探針 一定條件 X底片 顯影、定影 標(biāo)記斑點 Southern 印跡雜交 ★ 1975年,英國 Southern創(chuàng)建 ★ DNA與 DN
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