【正文】 83。 10 參考文獻(xiàn) 12 致謝 13 I 摘 要 通過(guò)配制一系列不同 Fe， Ca 離子濃 度的固體培養(yǎng)基培養(yǎng)杏鮑菇菌絲，觀察其生長(zhǎng)情況，得出微量元素對(duì)杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)的最適濃度。 結(jié)果表明：當(dāng)鐵離子的濃度在1150ug/ml 時(shí)，杏鮑菇的菌絲菌落的直徑最大；當(dāng)鈣離子的濃度 350ug/ml 時(shí)，杏鮑菇的菌絲菌落的直徑最大。 通過(guò)研究 Fe、 Ca 兩種金屬元素對(duì)杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)的影響，為進(jìn)一步優(yōu)化杏鮑菇菌絲培養(yǎng)基的研究提供可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 關(guān)鍵詞： 鐵離子 。鈣離子； PDA 培養(yǎng)基，杏鮑菇 II ABSTRACT Through the preparation of a series of different Fe, Ca medium of elements in Pleurotus solid culture medium to observe the growth, derived trace elements on growth of Pleurotus optimal concentration. The results showed that: when the concentration of iron ions 1150ug/ml, the mushroom mycelium fastest increasing trend in the diameter of colony。 when the concentration of calcium ions 350ug/ml, the mushroom mycelium fastest increasing trend in the diameter of colony. Through the research Fe, Ca two metal elements of Pleurotus, the influence of hypha growth for further optimization Pleurotus hyphae medium research provides reliable experimental data. Key words: Iron ion, Calcium ions, PDA medium， Pleurotuseryngii 1 1 引言 杏鮑菇 杏鮑菇 (Pleurotus eryngii) 是歐洲南部、非洲北部以及中亞地區(qū)高山、沙 漠地帶的一種品質(zhì)優(yōu)良的大型肉質(zhì)傘菌 , 屬于傘形花科、刺芹屬、刺芹枯死的植株上，所以又稱(chēng)為刺芹側(cè)耳。該菌隸屬于真菌門(mén)、真擔(dān)子菌綱、傘菌目、側(cè)耳屬。杏鮑菇子實(shí)體單生或群生，菌蓋初球形、半球形，后漸平展，淺黃白色。菌褶延生，密集，乳白色。菌柄偏生至側(cè)生，中實(shí)，棒狀到球莖狀，表面平滑，淺黃白色，無(wú)菌環(huán)，孢子橢圓至紡錘形 法國(guó)、意大利、印度都先后進(jìn)行過(guò)杏鮑菇的栽培研究。 Kalmar (1958) 第一次進(jìn)行栽培實(shí)驗(yàn) []。 Henda (1970) 在印巴交界的克什米爾高山上發(fā)現(xiàn)杏鮑菇 , 并首次在段木上進(jìn)行栽培 。V essey (1971) 分離到杏鮑菇的菌株 。 Cailleux (1974) 用菌褶分離到杏鮑菇的菌株 , 并試驗(yàn)栽培成功 。 Ferri (1977) 首先進(jìn)行商業(yè)化栽培 , 但只得到有限的成功。長(zhǎng)期以來(lái) , 杏鮑菇在全世界鮮有商業(yè)化栽培。近年 , 泰國(guó)、美國(guó)、日本、我國(guó)的臺(tái)灣省采用調(diào)溫、調(diào)濕的自動(dòng)化生產(chǎn)工藝進(jìn)行試驗(yàn)性栽培 , 取得成功 [3]。 杏鮑菇的肉質(zhì)肥厚 , 質(zhì)地脆嫩 , 特別是菌柄色澤雪白 , 粗長(zhǎng) , 組織極其致密 , 結(jié)實(shí) , 脆感強(qiáng) , 其口感獨(dú)具一格 , 是味道最好的 菇類(lèi)之一 , 被稱(chēng)為“平菇王”、“干貝菇”。前蘇聯(lián)的瓦西爾柯夫 (1955) 稱(chēng)它為“草原的美味牛肝菌” , 可見(jiàn)味道鮮美之極 ,目前在國(guó)際市場(chǎng)上是人工栽培的食用菌中數(shù)量稀少 , 價(jià)格最高的菇類(lèi)。杏鮑菇的營(yíng)養(yǎng)十分豐富 , 植物蛋白含量高達(dá) 25% , 含 18 種氨基酸和具有提高人體免疫力、防癌抗癌的多糖。同時(shí) ,它含有大量的寡糖 , 是灰樹(shù)花的 15倍、金針菇的 315倍、真姬菇的 2倍 , 它與胃腸中的雙岐菌一起作用 , 具有很好的促進(jìn)消化、吸收功能 .是一種口感好又具有藥用功能的珍稀食用菌 品種 [4]。 杏鮑菇營(yíng)養(yǎng)豐富，每 100g杏鮑菇 干物質(zhì)中含粗蛋白 ，含粗脂肪，符合高蛋白低脂肪的營(yíng)養(yǎng)食品要求。杏鮑菇子實(shí)體的氨基酸已知含有 17種，其中人體必需的 8種氨基酸占氨基酸總量的 ﹪。礦物元素也很豐富，人體必需的微量元素鈣和鎂的含量特別高。此外，還含有銅、鋅、錳、鐵、鉀、磷等元素，膳食中多食用杏鮑菇可提高人體免疫功能，有抗癌、降血脂、潤(rùn)腸胃、美容等功效，亦可促進(jìn)人體對(duì)脂類(lèi)物質(zhì)的消化吸收和膽固醇的溶解，是老年人和心血管疾病下肥胖癥患者理想的營(yíng)養(yǎng)保健品 [5]。 金屬元素 2 鐵元素在生物體中的作用 鐵氧化還原蛋 白屬于穩(wěn)定的鐵 硫蛋白 ,存在于葉綠體中 ,是光合電子傳遞鏈中第一個(gè) 穩(wěn)定氧化還原化合物 ,是最初的電子受體。鐵氧化還原蛋白具有很高的負(fù)氧化還原電位 ,能還原多種物質(zhì) ,如 NADP+、 O2，亞硝酸、硫酸鹽和血紅蛋白 [6]。 鐵是卟啉分子的結(jié)構(gòu)組分 ,諸如細(xì)胞色素、鐵血紅素、羥高鐵血紅素和豆血紅蛋白均參與葉綠體中光合作用和線(xiàn)粒體中呼吸作用兩個(gè)代謝過(guò)程中的氧化還原反應(yīng)。呼吸作用中鐵化合物將氧還原為水 [6]。 植物中大部分鐵是以鐵磷蛋白的形式儲(chǔ)存 ,稱(chēng)為植物鐵蛋白。細(xì)胞中約 75 %的鐵與葉綠體結(jié)合 ,葉片中高達(dá) 90 %的鐵與葉綠 體和線(xiàn)粒體膜的脂蛋白結(jié)合。葉子中植物鐵蛋白儲(chǔ)存作為形成質(zhì)體用 ,是進(jìn)行光合作用所必需的 [6]。 鐵是鉬 2鐵蛋白和鐵蛋白的組分 ,固氮酶缺鐵就沒(méi)有固氮活性。固氮酶在固氮微生物中處于 N2固定過(guò)程中心，在大豆中 ,鐵也能部分取代鉬作硝酸還原酶的金屬輔助因子 [6]。 鈣元素在生物體中的作用 鈣是植物結(jié)構(gòu)組分元素。主要構(gòu)成果膠酸鈣、鈣調(diào)素蛋白、肌醇六磷酸鈣鎂等 , 在液泡中有大量的有機(jī)酸鈣 , 如草酸鈣、檸檬酸鈣、蘋(píng)果酸鈣等 [7]。 鈣是細(xì)胞伸長(zhǎng)所必需。鈣離子能降低原生膠體的分散度 , 調(diào)節(jié)原生質(zhì)的膠體狀態(tài) , 使細(xì)胞 充水度、粘滯性、彈性以及滲透性等適合于正常作物生長(zhǎng)。 鈣與環(huán)狀多肽結(jié)合而成的化學(xué)物質(zhì)鈣調(diào)素 , 在控制植物細(xì)胞膜的功能和酶的活性方面起重要作用。鈣是一些重要酶類(lèi)的活化劑 [7]。 鈣可促進(jìn)硝態(tài)氮吸收 , 與氮代謝有關(guān) , 它有助于減少植物中的硝酸鹽 , 中和植物中的有機(jī)酸 , 對(duì)代謝過(guò)程中產(chǎn)生的有機(jī)酸有解毒作用。如鈣可與產(chǎn)生的草酸形成草酸鈣結(jié)晶 , 避免草酸過(guò)多的不良影響 [7]。 鈣對(duì)植株挺立和莖桿硬度起作用 , 也影響籽粒形成 , 許多種子中有肌醇六磷酸鈣鎂。固氮細(xì)菌大量需要鈣 [8]. 選題的意義 杏鮑菇是一種珍 稀食用菌 , 雖然人工栽培已獲得成功 , 但其菌絲生長(zhǎng)緩慢 , 生物轉(zhuǎn)化率偏低 [9]。國(guó)內(nèi)外對(duì)杏鮑菇的研究雖有很多，但金屬離子對(duì)杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)量的影響尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道 [10]。 通過(guò)研究 Fe、 Ca兩種金屬元素對(duì)杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)的影響，得到最適合杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)的含 Fe、 Ca金屬元素濃度的培養(yǎng)基對(duì)提高杏鮑菇的產(chǎn)量具有重要意義，另外將為進(jìn)一步優(yōu)化杏鮑菇菌絲培養(yǎng)基的研究提供可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 2 實(shí)驗(yàn)部分 3 主要儀器與試劑 主要儀器 立式壓力蒸汽滅菌器 上海博迅實(shí)業(yè) 有限公司醫(yī)療設(shè)備廠 ,220V 無(wú)菌操作工作臺(tái) 上海亞榮生化儀器廠 電子萬(wàn)用爐 北京市永光明醫(yī)療儀器廠 DL1 型 ,1000W,220V 電子分析天平 中國(guó)輕工業(yè)機(jī)器總公司常熟衡天 DF110 型 干燥箱 上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠 2022 型 ,220V,300℃ 恒溫生化培養(yǎng)箱 上海綠宇生物科技有限公司 RXZ300D 型 220V 0～ 50℃ 基本試劑和藥品 氯化鐵 分析純 ,含量大于 99% 北京化學(xué)試劑公司 無(wú)水氯化鈣 分析純， 含量大于 99% 北京化工廠 葡萄糖 分析純 ， 含量大于 % 天津市永大化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心 瓊脂 上?；瘜W(xué)試劑站分裝廠 馬鈴薯 郴州市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi) 主要的玻璃儀器及其他實(shí)驗(yàn)用具 燒杯 ,試管 ,玻璃棒 ,容量瓶（ 1000ml， 100ml） ,錐形瓶 ,移液管（ 100ml， 10ml） ,漏斗 ,紗布 ,接種針 ,酒精燈 ,標(biāo)簽紙 ,培養(yǎng)皿 ,棉花塞 ,牛皮紙， 直徑為 的打孔器 。 菌種 杏鮑菇母種 湘南學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系微生物實(shí)驗(yàn)室提供 實(shí)驗(yàn)方法 菌種的純化 斜面培養(yǎng)基制作 配制 PDA 培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮） 200g 加水 1000ml 煮沸 15～ 20min 后，用 4 層紗布過(guò)濾將濾液煮沸加入瓊脂 20g，葡萄糖 20g，補(bǔ)足無(wú)菌水至 1000ml，調(diào)節(jié) PH 至 5～ ，趁熱分裝至試管中，每管 10ml，進(jìn)行加塞包扎。 高壓蒸汽滅菌：首先將內(nèi)層鍋取出 ,再向外層鍋內(nèi)加入適量的水 ,使水面與三角擱架相平為宜。放回內(nèi)層鍋 ,并裝入待滅菌物品，旋緊滅菌鍋上的螺栓 ,使螺栓松緊一致 ,勿使漏氣。接通電源加熱 ,同時(shí)打開(kāi)排氣閥 ,幾分鐘后排氣閥內(nèi)有冷空氣排出 ,待冷空氣完全排盡后 , 關(guān)閉排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到 時(shí) , 約為 121℃ ,控制熱源 ,維持壓力 25min. 切斷電源使溫度自然下降 ,當(dāng)壓力表的壓力降至 0 時(shí) ,打開(kāi)排氣閥 ,排氣完畢后 ,旋松螺栓 ,打開(kāi)蓋子 ,取出滅菌物品。 擱置斜面：當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至 50℃左右 ,將試管帶綿塞的一端擱在一根木棒上 .擱置的長(zhǎng)度要適合 ,使培養(yǎng)基形成的斜面的長(zhǎng)度不超過(guò)試管總長(zhǎng)的一半 ,冷卻待用。（斜面培養(yǎng) 4 基最好提前幾天制作，防止水蒸氣過(guò)重影響菌絲生長(zhǎng)） 無(wú)菌接種及培養(yǎng) 無(wú)菌條件下，在超凈工作臺(tái)上從斜面母種中取黃豆粒大小的菌種塊（帶原培養(yǎng)基），在酒精燈下接種于用 PDA 培養(yǎng)基制作的斜面培養(yǎng)基中，置 25℃恒溫培養(yǎng)箱中，避光靜置培養(yǎng)，培養(yǎng) 2 天后菌絲萌發(fā)，約 15 天后試管內(nèi)長(zhǎng)滿(mǎn)菌絲， 檢查有無(wú)雜菌 [11]。選擇生長(zhǎng)良好，生物特征明顯，無(wú)雜菌的菌種用于接下來(lái)的實(shí)驗(yàn) [12]。 菌種的活化 活化菌種 培養(yǎng)皿的制作 配制 PDA 培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮） 200g 加水 1000ml 煮沸 15～ 20min 后，用 4 層紗布過(guò)濾將濾液煮沸加入瓊脂 20g，葡萄糖 20g，補(bǔ)足無(wú)菌水至 1000ml，調(diào)節(jié) PH 至 5～ ，趁熱分裝至試管中，每管 15ml，進(jìn)行加塞包扎 ,高壓蒸汽滅菌。 將用于培養(yǎng)用的培養(yǎng)皿用報(bào)紙包好，干熱滅菌。 在無(wú)菌操作下，在超凈工作臺(tái)內(nèi)將滅好菌的試管冷卻至 50～ 60℃時(shí)倒入冷卻后的培養(yǎng)皿內(nèi)（實(shí)驗(yàn) 所用平板采用直徑 9cm 的培養(yǎng)皿，裝量 15ml/皿），冷卻靜置待用。 接種及培養(yǎng) 在超凈工作臺(tái)中，從純化后的斜面菌種中，無(wú)菌操作，取黃豆粒大小的菌種塊，無(wú)菌操作，接于活化菌種所用平板中，置 25℃恒溫培養(yǎng)箱中，避光倒置培養(yǎng) 10 天，作為實(shí)驗(yàn)菌種。 鐵元素對(duì)杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)的影響 配制 鐵元素母液：精確稱(chēng)量氯化鐵 1g，用熱水溶解，然后倒入 1000ml 容量瓶中，定容至 1000ml 為 1mg/ml 的鐵元素母液； 不