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質譜分析法鑒定多形漢遜酵母pex14p的磷酸化位點-文庫吧

2025-04-20 22:58 本頁面


【正文】 14,轉化 Δpex14細胞。 ? 用含甲醇的培養(yǎng)基誘導酵母表達,培養(yǎng)基中僅含有 32P的磷酸鹽。酵母中過氧化物酶體大量增殖。 ? 隨著時間增長, Pex14p中的磷酸化位點都會變成 32P標記的。 ? 質譜分析 ? A 從過表達酵母菌株中提取 H6Pex14p ,然后進行 SDSPAGE,考馬斯亮藍染色 ? B 劃線部分是觀測的多肽序列,帶 *的是磷酸化位點 ? C 通過分析質譜圖得知,磷酸化位點在Thr248和 Ser258 ? 為了進一步研究磷酸化的生理作用,作者選育三種不同的突變株,分別是 T248A 、S258A 和 T248A/S258A 突變體。 ? 分別用 Ala取代 T248和 S258 Pex14p的 western
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