質(zhì)譜分析法鑒定多形漢遜酵母pex14p的磷酸化位點(diǎn)-文庫(kù)吧
2025-04-20 22:58 本頁(yè)面
【正文】 14，轉(zhuǎn)化 Δpex14細(xì)胞。 ? 用含甲醇的培養(yǎng)基誘導(dǎo)酵母表達(dá)，培養(yǎng)基中僅含有 32P的磷酸鹽。酵母中過(guò)氧化物酶體大量增殖。 ? 隨著時(shí)間增長(zhǎng)， Pex14p中的磷酸化位點(diǎn)都會(huì)變成 32P標(biāo)記的。 ? 質(zhì)譜分析 ? A 從過(guò)表達(dá)酵母菌株中提取 H6Pex14p ，然后進(jìn)行 SDSPAGE，考馬斯亮藍(lán)染色 ? B 劃線部分是觀測(cè)的多肽序列，帶 *的是磷酸化位點(diǎn) ? C 通過(guò)分析質(zhì)譜圖得知，磷酸化位點(diǎn)在Thr248和 Ser258 ? 為了進(jìn)一步研究磷酸化的生理作用，作者選育三種不同的突變株，分別是 T248A 、S258A 和 T248A/S258A 突變體。 ? 分別用 Ala取代 T248和 S258 Pex14p的 western
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