【正文】 細(xì)口瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，生長(zhǎng)到一定密度后依次作為生產(chǎn)用二級(jí)菌種、三級(jí)菌種放大到 500~1000mL 試劑瓶、 150L 液體厭氧發(fā)酵罐中培養(yǎng)，三級(jí)菌種培養(yǎng)物然后轉(zhuǎn)移到固體厭氧發(fā)酵罐中進(jìn)行固體培養(yǎng)，工藝控制細(xì)胞生長(zhǎng)到最高密度、產(chǎn)量達(dá)到最高產(chǎn)量時(shí)停止培養(yǎng)。然后往固體培養(yǎng)物中加入經(jīng) 165℃ 滅菌的葡萄糖、無菌食用玉米淀粉，經(jīng)混合均勻后置于 40℃ 冷凍干燥 24 小時(shí)，對(duì)干燥后的產(chǎn)物進(jìn)行粉碎、過篩，篩下物即成為雙歧桿菌菌粉。然后對(duì)原料粉在無菌條件下于膠囊填充機(jī)中裝膠囊，經(jīng)膠囊拋光 、剔除廢料后，再對(duì)膠囊進(jìn)行鋁塑泡罩包裝，最后進(jìn)行外包裝、入庫(kù)。 ① 嬰兒雙歧桿菌原種液體培養(yǎng) 液體原種培養(yǎng) 一級(jí)菌種培養(yǎng) 二級(jí)菌種培養(yǎng) 三級(jí)菌種培養(yǎng) 固體培養(yǎng) 混合、凍干 粉碎、過篩 裝膠囊 膠囊拋 光 鋁塑泡罩包裝 檢測(cè) 嬰兒雙歧桿菌粉 加葡萄糖 食用玉米淀粉 嬰兒雙歧桿菌原種、培養(yǎng)基 1 培養(yǎng)基 2 培養(yǎng)基 2 培養(yǎng)基 2 培養(yǎng)基 3 噪聲、粉塵 空膠囊 噪聲、粉塵 PVC 加熱廢氣 噪聲、 水蒸汽 鋁箔 PVC 藥粉 廢 包裝料 膠囊殼、藥粉 化驗(yàn)廢液 外包裝、入庫(kù) 檢測(cè) 檢測(cè) 檢測(cè) 檢測(cè) 12 培養(yǎng)基 1 配方：培養(yǎng)基 1000mL，酪胨 ，胨 ，酵母浸膏，葡萄糖 ，瓊脂 ，微量鹽溶液 。微量鹽溶液每 1000mL 需氯化鈣 ，硫酸鎂 ，磷酸氫鉀 ，碳酸氫鈉 ，用蒸餾水配制。 滅菌、接種與培養(yǎng)：將培養(yǎng)基裝入 10mL 試管（占試管垂直長(zhǎng)度的 2/3 左右）塞上未脫脂棉塞，置于蒸汽滅菌柜內(nèi)于 下滅菌 30min，然后將棉塞立即換成經(jīng)滅菌的橡皮 塞。用冷水速凍成 45℃后立即接種原種，并用經(jīng)滅菌的食用植物油 ~ 倒在培養(yǎng)基上面，封以原橡皮塞，在厭氧環(huán)境 37℃ 溫度下培養(yǎng)。培養(yǎng) 24~48h后終止培養(yǎng)，在厭氧及 0~4℃ 保存?zhèn)溆谩? ② 生產(chǎn)用一級(jí)菌種液體培養(yǎng) 培養(yǎng)基 2 配方：培養(yǎng)基 1000mL，胨 ，酵母浸膏 ，葡萄糖 ，微量鹽溶液 ，低聚異麥芽糖 ，用自來水配制。微量鹽溶液每 1000mL 需氯化鈣 ，硫酸鎂 ，磷酸氫鉀，碳酸氫鈉 ，用蒸餾水配制。 滅菌、接種與培養(yǎng)：將培養(yǎng)基裝入 100mL 無色透明細(xì)口瓶（占細(xì)口瓶體積約 80%），以聚丙烯塑料封口，置于蒸汽滅菌柜內(nèi)于 下滅菌 40min，滅菌后立即在液面上倒一層（ 左右厚度）無菌食用植物油。用冷水速凍成 42℃ 后立即接種 5%嬰兒雙歧桿菌原種液體培養(yǎng)物，以橡皮塞封口。在溫度為 37~38℃ 的恒溫箱中培養(yǎng) 24~96h，每隔 3h 搖動(dòng) 1min。待細(xì)胞數(shù)達(dá)到 億個(gè) /mL 時(shí)終止培養(yǎng)。 ③ 生產(chǎn)用二級(jí)菌種液體培養(yǎng) 培養(yǎng)基配方、各項(xiàng)操作和培養(yǎng)條件同生產(chǎn)用一級(jí)菌種，接種用一級(jí)菌種，接種量為 10%。培養(yǎng)容器改為 500~1000mL 無色透明試劑 13 瓶。在恒溫箱中培養(yǎng)時(shí)，每隔 4h 搖動(dòng) 1min。培養(yǎng) 24~96h，待細(xì)胞數(shù)達(dá)到 億個(gè) /mL 時(shí)終止培養(yǎng)。 ④ 生產(chǎn)用三級(jí)菌種液體培養(yǎng) 培養(yǎng)基配方、各項(xiàng)操作和培養(yǎng)條件仍同生產(chǎn)用一級(jí)菌種，接種用二級(jí)菌種，接種量為 18%。培養(yǎng)容器改為 150L 液體厭氧發(fā)酵罐。培養(yǎng) 24~96h，待細(xì)胞數(shù)達(dá)到 億個(gè) /mL 時(shí)終止培養(yǎng)。 ⑤ 固體培養(yǎng) 培養(yǎng)基 3 配方：食用大豆粕 %（質(zhì)量比，以下同），小麥粉%，脫脂乳粉 %，低聚異麥芽糖 %，葡萄糖 %，酵母浸膏 %，硫胺素 2mg/kg，核黃素 4mg/kg，自 來水 20~30%。 滅菌、接種與培養(yǎng)：將培養(yǎng)基裝入 3000L 固體厭氧發(fā)酵罐中，置于蒸汽滅菌柜內(nèi)于 120min。用冷水速凍成 42℃ 時(shí)，在厭氧環(huán)境中立即接入 25%三級(jí)菌種液體培養(yǎng)物。在溫度為 37℃ 下培養(yǎng) 24~60h，待細(xì)胞數(shù)達(dá)到 億個(gè) /g 時(shí)終止培養(yǎng)。 ⑥ 雙歧桿菌菌粉制備 向上述終止培養(yǎng)后的固體培養(yǎng)物中加入經(jīng) 165℃ 滅菌的葡萄糖（按固體培養(yǎng)物質(zhì)量的 5%添加）、無菌食用玉米淀粉（按固體培養(yǎng)物質(zhì)量的 5%添加），于多維運(yùn)動(dòng)混合機(jī)中在轉(zhuǎn)速為 150r/min 的條件下混合 5~6min，經(jīng)混合均勻后置 于冷凍式干燥機(jī)（系統(tǒng)通過制冷壓縮機(jī)輸入電能，把制冷劑由低壓提升為高壓，并使制冷劑不斷循環(huán)流動(dòng)，將系統(tǒng)內(nèi)部熱量不斷地由低溫環(huán)境排放到高溫環(huán)境中）中于40℃ 冷凍干燥 24 小時(shí)，使含水率低于 %，然后對(duì)干燥后的產(chǎn)物經(jīng)粉碎機(jī)粉碎至 60 目，篩粉機(jī)進(jìn)行過篩，篩上物返回粉碎機(jī)組繼續(xù)粉碎，篩下物即成為雙歧桿菌菌粉，備用。 ⑦ 雙歧膠囊生產(chǎn) 14 干燥、粉碎后的雙歧桿菌菌粉即在無菌條件下于膠囊填充機(jī)中灌裝膠囊。項(xiàng)目擬采用 NJP1200A 型膠囊填充機(jī)，該機(jī)器生產(chǎn)能力可達(dá) 萬粒 /小時(shí)，自帶真空回收裝置（真空度 ~，剔廢、吸塵真空度 ~，剔廢、吸塵氣流量 360m3/h），不需另配吸塵機(jī)，真空回收裝置可保證藥粉填充率在 %以上。經(jīng)灌裝藥粉后的膠囊然后經(jīng)膠囊拋光機(jī)（主要是應(yīng)用毛刷拋光）對(duì)膠囊進(jìn)行拋光，拋光和潔凈附著在膠囊上的藥粉，以提高膠囊表面的光潔度。項(xiàng)目擬采用 YPJⅢ 型膠囊拋光機(jī)，生產(chǎn)率達(dá) 3000~7000 粒/min，為封閉式輸送結(jié)構(gòu)。膠囊經(jīng)拋光后即進(jìn)行鋁塑包裝，在 DPH200型鋁塑泡罩包裝機(jī)下依次完成 PVC 加熱（成形溫度控制在 150~190℃以內(nèi)）、泡罩成型、藥品充填、漏片檢測(cè) 、熱壓封合、打印批號(hào)、硌撕裂線、沖切板塊、剔除廢品、成品裝盒等程序。經(jīng)鋁塑包裝入盒后，即可進(jìn)行外包裝、入庫(kù)。項(xiàng)目每粒膠囊裝藥粉 克，每盒 60粒膠囊， 150 盒裝一箱。 鋁塑泡罩包裝涉及到的包裝材料為鋁箔、 PVC 塑料硬片，每版裝12 粒膠囊，每盒裝 5 版，共 60 粒膠囊。沖裁后藥板尺寸為64mm100mm ，所選設(shè)備的 PVC 片材及鋁箔寬 200mm?？漳z囊、鋁塑包裝的損耗率均按 1%計(jì)算。 ⑧檢測(cè) 培養(yǎng)物檢測(cè)：項(xiàng)目每一級(jí)菌種培養(yǎng)至預(yù)定時(shí)間后，建設(shè)單位會(huì)對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行檢測(cè)，主要測(cè)定其菌落總數(shù)、雙歧桿菌指標(biāo)。 數(shù)的測(cè)定 采用 《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定。 所用試劑為：瓊脂、磷酸二氫鉀、氯化鈉；所用設(shè)備為：高壓 15 滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、恒溫水浴箱、天平等。 檢測(cè)過程中會(huì)產(chǎn)生廢棄的培養(yǎng)基、化驗(yàn)廢液。 采用 《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 雙歧桿菌檢驗(yàn)》對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定。 所用試劑為：半胱氨酸、氟化鈉、碘乙酸鈉、果糖 6磷酸鹽、鹽酸羥胺、三氯乙酸、甲醇、三氯甲烷、硫酸、冰乙酸、乳酸；所用設(shè)備為：高壓滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、天平、氣相色譜儀 配FID 檢測(cè)器等。 檢測(cè)過程中會(huì)產(chǎn)生廢棄的培養(yǎng)基、化驗(yàn)廢液。 產(chǎn)品檢測(cè)：雙歧膠囊制備完成后，建設(shè)單位將對(duì)其進(jìn)行抽樣檢測(cè)，同一批次產(chǎn)品抽取的菌粉量至少為 336g。項(xiàng)目通過物理、化學(xué)、生物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)產(chǎn)品的水分、總鉛、總砷、雙歧桿菌、大腸菌群、霉菌和酵母等。 采用食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 《食品中水分的測(cè)定》中的直接干燥法進(jìn)行測(cè)定。 所用試劑為：無（物理方法）；所用設(shè)備為：電熱恒溫干燥箱、天平。 檢測(cè)過程中會(huì)產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)廢液和容器器皿的沖洗水。 采用 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中鉛的測(cè)定》中二硫腙比色法進(jìn)行測(cè)定。 所用試劑為：氨水、鹽酸、酚紅、鹽酸羥胺、檸檬酸銨、氰化鉀、三氯甲烷、二硫腙、硝酸鉛；所用設(shè)備為：分光光度計(jì)、天 16 平。 檢測(cè)過程中會(huì)產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)廢液和容器器皿的沖洗水。 采用 GB/《食品中總砷的測(cè)定方法》中的銀鹽法進(jìn)行測(cè)定。 所用試劑：硝酸、硫酸、氧化鎂、無砷鋅粒、高氯酸、碘化鉀、氯化亞錫、鹽酸、乙酸鉛、氫氧化鈉、二乙基二硫代氨基甲酸銀、三氧化二砷；所用設(shè)備：可見分光光度計(jì)。 檢測(cè)過程中會(huì)產(chǎn)生容器器皿的沖洗 水、實(shí)驗(yàn)廢液。 測(cè)定方法、所用試劑及設(shè)備同前述。 采用 《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定。 所用試劑為：肉湯、瓊脂、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氫氧化鈉、鹽酸；所用設(shè)備為：高壓滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、恒溫水浴箱、天平、細(xì)菌計(jì)數(shù)器等。 檢測(cè)過程中會(huì)產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)廢液和實(shí)驗(yàn)器皿的沖洗廢水。 采用 《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母計(jì)數(shù)》對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定。 所用試劑為：馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂、氯霉素、蛋白胨 、孟加拉紅、磷酸二氫鉀；所用設(shè)備為：高壓滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、恒溫振蕩器、電子天平、細(xì)菌計(jì)數(shù)器等。 六、設(shè)備選型及布置 17 表 2 項(xiàng)目主要設(shè)備一覽表 序號(hào) 設(shè)備名稱 規(guī)格及型號(hào) 數(shù)量 用途 所在車間區(qū)域 一、 主體工程 1 冰箱 制冷劑用R600a 1 臺(tái) 冷藏菌種 位于綜合車間中部生物發(fā)酵區(qū)的種子庫(kù)內(nèi) 2 化糖罐 HTG1000L 1 臺(tái) 用于化糖 位于綜合車間東部生物發(fā)酵區(qū)的配料室內(nèi) 3 濃配罐 PYG1000 1 臺(tái) 用于溶液濃配 4 稀配罐 XPG2020 1 臺(tái) 用于溶液稀配 5 儲(chǔ)液罐 CG3000 1 臺(tái) 用于儲(chǔ)液 6 培養(yǎng)箱 LRH250A 7 臺(tái) 用于菌種培養(yǎng) 綜合車間嬰兒雙歧桿菌原種培養(yǎng)間3 臺(tái)，一級(jí)種子和二級(jí)種子之間的培養(yǎng)間 4 臺(tái) 7 蒸汽滅菌柜 2 臺(tái) 1 臺(tái)為 培養(yǎng)基及回收的藥粉滅菌 ， 1 臺(tái)為及發(fā)酵失敗菌液、廢培養(yǎng)基滅菌 位于綜合車間內(nèi)發(fā)酵區(qū)中部 8 液體厭氧 GRJY150 型 2 臺(tái) 用于發(fā)酵 綜合車間東 18 發(fā)酵罐 部南端二級(jí)種子發(fā)酵間內(nèi) 9 固體厭氧發(fā)酵罐 GRT3000 型 2 臺(tái) 用于發(fā)酵 綜合車間東部固體發(fā)酵間內(nèi) 10 操作臺(tái) 2 個(gè) 位于綜合車間內(nèi)的菌種培養(yǎng)間 11 設(shè)備臺(tái) 1 個(gè) 放置培養(yǎng)箱 3臺(tái) 位于嬰兒雙歧桿菌原種培養(yǎng)間 12 超凈工作臺(tái) 3 個(gè) 分屬于綜合車間內(nèi)的無菌室、一級(jí)菌種培養(yǎng)間 13 多維運(yùn)動(dòng)混合機(jī) HD1000 型 1 臺(tái) 用于總混 位于綜合車間中部偏南側(cè)總混間 14 冷凍式干燥機(jī) SLAD6NF，空氣處理量1 臺(tái) 用于凍干 位于綜合車間東部 15 制冷壓縮機(jī) 采用 R134a 作為制冷劑，風(fēng)冷，制冷功率2HP，風(fēng)扇功率2 150W 1 臺(tái) 19 16 真空機(jī)組 1 臺(tái) 17 粉碎機(jī) GF400A2X 1 臺(tái) 用于粉碎，粉碎 至 60 目 位于綜合車間東北部粉篩間內(nèi) 1