【正文】 [4]可知豬場 80%以上發(fā)病都以兩種或多種病原的混合感染或繼發(fā)感染形式出現(xiàn)。在眾多的混合感染中，既有病毒混合感染、細(xì)菌混合感染，還有病毒細(xì)菌與寄生蟲的混合感染 [6]。而病毒病的混合感染居多且危害嚴(yán)重， 臨床上以藍(lán)耳病毒與豬瘟病毒、藍(lán)耳病毒與圓環(huán)病毒、豬瘟病毒與偽狂犬病毒、藍(lán)耳病毒與偽狂犬病毒混合感染常見 [1,2,3,4,5]。這幾種病毒病均為免疫抑制性疾病，感染后導(dǎo)致豬只抵抗力下降，處于亞健康狀態(tài)，使多種病毒、細(xì)菌、寄生蟲等病原體趁虛而入，導(dǎo)致疾病癥狀復(fù)雜，疫苗免疫失敗或藥物治療不佳 [4]，并出以下綜合征：豬呼吸道疾病綜合征（ PRDC）、豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征（ PMWS）、豬皮炎腎病綜合征（ PDNS）[1,2,3]及 06 年夏季出現(xiàn)在我國的“高熱病” [6]，導(dǎo)致豬群發(fā)病率和死亡率明顯升高[1]，故豬病的防 控形勢依然嚴(yán)峻。 豬瘟 (Classical Swine Fever， CSF）是我國乃至全球養(yǎng)豬業(yè)最重要的傳染病之一 [7]，早期叫做豬霍亂、爛腸瘟，在歐洲稱它為“古典豬瘟”以與非洲豬瘟相區(qū)分。它是由豬瘟病毒（ CSFV）引起的豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病 [8]，嚴(yán)重影響我國及世界各國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為此，國際獸醫(yī)局（ OIE）將此病列為 A類法定傳染病之一，也是我國法定的一類動(dòng)物傳染病 [8]。近年來我國出現(xiàn)了溫和型豬瘟、非典型豬瘟、隱性豬瘟及免疫后發(fā)病的情況，臨床癥狀與病理變化均不明顯，持 續(xù)感染及先天免疫耐受現(xiàn)象頻發(fā)，免疫失敗現(xiàn)象增加，與其他疾病的混合感染現(xiàn)象普遍 [9]。這些新的現(xiàn)象出現(xiàn)，意味著豬瘟的防控愈加發(fā)雜，要想全面消滅控制該病尚需廣大獸醫(yī)工作者不懈努力。 藍(lán)耳?。?Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome， PRRS）是豬繁殖與呼吸綜合癥的俗稱，而高致病性藍(lán)耳?。?HPPRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合癥病毒（ PRRSV）變異株引起的一種急性高致死性傳染病 [8]。據(jù)楊曉花 [10]等報(bào)道，仔豬發(fā)病率可達(dá) 100%、死亡率可達(dá) 50%以上，母豬流產(chǎn)率 可達(dá) 30%以上，育肥豬也能發(fā)病死亡 ,因此對(duì)養(yǎng)豬業(yè)健康生產(chǎn)構(gòu)成嚴(yán)重威脅。加上 PRRSV的感染可導(dǎo)致豬只的免疫抑制，使其免疫系統(tǒng)功能下降，在一些誘發(fā)因子的刺激下易引起繼發(fā)感染金陵科技學(xué)院學(xué)士學(xué)位論文 材料與方法 2 和混合感染，致使豬病臨床癥狀更加復(fù)雜，診斷難度增加，防治效果較差 [11]。據(jù)田克恭 [12]報(bào)道我國目前絕大部分豬場均為藍(lán)耳病陽性豬場，對(duì)我國養(yǎng)豬業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)損失巨大，因此藍(lán)耳病的防控依然是近期我國豬病防控的熱點(diǎn)，可見在生產(chǎn)中預(yù)防藍(lán)耳病的發(fā)生和傳播意義重大。 豬瘟與高致病藍(lán)耳病的混合感染是臨床上常見的一種現(xiàn)象，目前，我國很多豬場都存在這兩種病 原體混合感染的情況，已有幾十篇關(guān)于此病的報(bào)道。據(jù)王隆柏 [13] 等在 2020年對(duì) 102個(gè)規(guī)模化豬場豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬偽狂犬病原的檢測結(jié)果可知，豬瘟與藍(lán)耳病的混合感染豬場有 31個(gè)，占豬場總數(shù)的 %；馬慧玲 [14]等在 2020年對(duì) 126個(gè)豬場發(fā)病情況調(diào)查分析，豬瘟與藍(lán)耳病的混合感染占到 %，曲建議 [15]的研究表明，在我國豬瘟與藍(lán)耳病混合感染還呈上升趨勢，給養(yǎng)豬業(yè)蒙上一層陰影。面對(duì)如此嚴(yán)峻的形勢，對(duì)于豬瘟與藍(lán)耳病混合感染的快速診斷與確切治療就顯得意義重大，是我們廣大獸醫(yī)工作者應(yīng)該認(rèn)真研究的課題方向 。 本文詳細(xì)報(bào)道了江蘇省某規(guī)模化養(yǎng)豬場發(fā)生的一起豬瘟與高致病性藍(lán)耳病混合感染的診治過程，通過綜合性的治療和防控措施取得了良好的效果， 為目前規(guī)?；i場豬瘟與高致病性藍(lán)耳病等混合感染病例的診斷與治療提供了一定參考。 一、 材料與方法 材料 主要試劑 豬藍(lán)耳病抗體 ELISA 檢測試劑盒，豬偽狂犬抗體 ELISA 檢測試劑盒，豬瘟抗體 ELISA 檢測試劑盒購自 IDEXX 公司。 Trizol Reagent、反轉(zhuǎn)錄酶和 Taq 酶分別購自 Invitrogen、 Promega 和 TaKaRa 公司。 主要儀器 3K15 高速冷凍離心機(jī) （ 德國 Sigma 公司 ） ； 7500 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀（ ABI公司） ； JS2380A 自動(dòng)凝膠圖像分析儀 （ 上海培清科技公司 ） ； LDZM 型立式智能壓力蒸汽滅菌器 （ 上海申安醫(yī)療器械廠 ）； JA2020 型電子天平 （ 上海良平儀器儀表有限公司 ）； HG1011 型電熱鼓風(fēng)干燥箱 （ 南京電器三廠 ）； DK8D 型電熱恒溫水槽 （ 上海一恒科技有限公司 ）； JN3034 型電熱恒溫培養(yǎng)箱 （ 南京市江寧電器儀器廠 ）； QB296 型梯度 PCR 儀 （ 英國 Quanta Biotech 公司 ） ； HYQ2121A 型渦旋混勻器 （ 蘇州捷美 電子有限公司 ）； 紫外分光光度計(jì) （ Eppendorf 公司 ）。 發(fā)病情況 金陵科技學(xué)院學(xué)士學(xué)位論文 材料與方法 3 該發(fā)病豬場位于江蘇南通，發(fā)病期間基礎(chǔ)母豬 450頭，主要是斷奶前后（ 21日齡斷奶）后哺乳仔豬和保育豬呼吸困難，腹部和末端發(fā)紅，精神沉郁，少食或不食，腹瀉，嘔吐，絕大多數(shù)發(fā)病豬從發(fā)病到死亡不超過 5天。死前出現(xiàn)劃水樣神經(jīng)癥狀，呼吸急促，消瘦，高熱稽留。發(fā)病率 30%，死亡率接近 55%。妊娠母豬流產(chǎn)和木乃伊胎顯著增加。母豬豬藍(lán)耳病疫苗，豬瘟疫苗和豬偽狂犬疫苗分別于產(chǎn)前 60天，產(chǎn)前 30天和產(chǎn)前 20天免疫。 病理剖檢 選擇 3 頭典型癥狀的仔豬進(jìn)行病理剖檢，并記錄結(jié)果。 細(xì)菌學(xué)檢測 采集心包積液、肺和腹股溝淋巴結(jié) ,按實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法進(jìn)行涂片 ,采用革蘭氏染色的方法，按《獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》所述步驟進(jìn)行染色，并用普通光學(xué)顯微鏡在 400倍放大倍數(shù)下鏡檢。具體操作步驟如下： （ 1）涂片：取一潔凈載玻片，在載玻片上滴一小滴水，用無菌鑷無菌操作挑取少許病變組織于水滴中，輕輕涂抹在載玻片上，室溫自然干燥，火焰固定。 （ 2）初染：草酸銨結(jié)晶紫染色液， 12分鐘左右 .水洗：傾去染液，用自來水的細(xì)水流由載玻片上端流下無色為止。 （ 3）煤染 ：革蘭氏典液染色 13分鐘，水洗。 （ 4）脫水：酒精脫水 30秒 1分鐘，水洗。 （ 5）復(fù)染：石碳酸復(fù)紅染 1020秒，水洗。 （ 6）鏡檢：待標(biāo)本片完全干燥后，先用低倍鏡和高倍鏡觀察，再用油鏡觀察。 革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。 血清學(xué)檢測 對(duì)采集的 22 份血清樣本，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ ELISA）檢測豬瘟（ CSF）、豬藍(lán)耳病 (PRRS)、豬偽狂犬?。?PR）血清抗體。豬瘟抗體檢測方法按照 美國IDEXX 公司試劑盒說明書 嚴(yán)格操作，豬藍(lán)耳病抗體與豬偽狂犬病抗體檢測方法按照 武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé) 任公司的試劑盒嚴(yán)格操作。具體方法如下： 豬瘟抗體 ELISA 檢測方法 （ 1）洗滌液配制 : 去離子水將濃縮洗滌液按 1： 10稀釋，即為工作洗滌液。各試劑盒中的試劑均單獨(dú)稀釋并作好標(biāo)記，用于對(duì)應(yīng)的試劑和盒上，不混用。 （ 2）樣本稀釋 : 用樣本稀釋液將待檢血清樣本按 1： 40稀釋，混勻。 （ 3）加樣反應(yīng)：取豬瘟及口蹄疫抗體檢測試劑盒里的預(yù)包被板，每塊板子設(shè)置陰性對(duì)照 2孔，陽性對(duì)照及空白對(duì)照各 1孔，剩余孔為樣品檢測孔。陰性對(duì)照孔、陽性對(duì)照孔及空白對(duì)照孔每孔分別加入陰性對(duì)照品、陽性對(duì)照品和樣品稀釋液金陵科技學(xué)院學(xué)士學(xué)位論文 材料與方法 4 100181。L，樣 本檢測孔每孔加已稀釋血清樣本 100181。L。 37℃ 避光反應(yīng) 30min后，甩去孔內(nèi)液體，洗板機(jī)洗滌 3次，拍干。 （ 4）加酶反應(yīng)：除空白對(duì)照孔外，每孔加酶結(jié)合物 50181。L。 37℃ 避光反應(yīng) 30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。 （ 5）顯色反應(yīng)：每孔先加底物液 A50181。L、再加底物液 B50181。L，混勻，室溫避光顯色 10min，混勻， 37℃ 避光顯色 10min。 （ 6）終止反應(yīng)：加終止液 50μL，終止反應(yīng) （ 7）酶標(biāo)儀檢測結(jié)果：以空白對(duì)照調(diào)零，酶標(biāo)儀 450nm處讀取 OD值。