20xx人教版高中生物選修3專題1第1節(jié)dna重組技術(shù)的基本工具-閱讀頁
2024-12-07 22:43本頁面
【正文】 宿主細(xì)胞后不一定都要整合到染色體 DNA上 ， 如宿主細(xì)胞是細(xì)菌細(xì)胞則不需整合 。 思 維 升 華 1． 與遺傳有關(guān)的各種酶的比較 名稱 作用 參與的生理 過程與應(yīng)用 作用位點(diǎn) (如下圖 ) DNA 連接酶 連接兩個(gè) DNA片段 基因工程 a 限制性核 酸內(nèi)切酶 能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開 a 名稱 作用 參與的生理 過程與應(yīng)用 作用位點(diǎn) (如下圖 ) DNA 聚合酶 在脫氧核苷酸鏈上添加單個(gè)脫氧核苷酸 DNA的復(fù)制 a RNA 聚合酶 在核糖核苷酸鏈上添加單個(gè)核糖核苷酸 轉(zhuǎn)錄 a 解旋酶 使核堿基間氫鍵斷裂形成單脫氧核苷酸鏈 DNA復(fù) 制及轉(zhuǎn)錄 b 逆轉(zhuǎn)錄酶 以 RNA為模板合成 DNA 逆轉(zhuǎn)錄、 基因工程 — 特別提醒： ① DNA連接酶和 DNA聚合酶的作用都是催化形成磷酸二酯鍵 ， 而不是氫鍵 ， 氫鍵是分子間的靜電吸引力 ，不需要通過酶的催化形成 。 ③ 目前發(fā)現(xiàn)的DNA連接酶不具有連接單鏈 DNA的能力 。 限制酶在細(xì)菌內(nèi)會(huì)將外源 DNA切割掉 ， 以保證自身的安全 。 知 識(shí) 構(gòu) 建 基因工程的基本工具????????????? 分子手術(shù)刀：限制性核酸內(nèi)切酶????? 來源作用結(jié)果分子縫合針： DNA 連接酶????? 分類作用分子運(yùn)輸車：基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體????? 常用載體：質(zhì)粒載體的條件其他載體 應(yīng) 用 探 究 目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細(xì)菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒 ， pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體 ， 其主要結(jié)構(gòu)如下圖所示 。 (2)pBR322分子中有單個(gè) EcoR I限制酶作用位點(diǎn) ， EcoR I只能識(shí)別序列 —GAATTC—， 并只能在 G與 A之間切割 。 (3)pBR322分子中另有單個(gè)的 BamH I限制酶作用位點(diǎn) ， 現(xiàn)將經(jīng) BamHI處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶 BglⅡ 處理得到的目的基因 ， 通過 DNA連接酶作用恢復(fù) ________________鍵 ， 成功獲得了重組質(zhì)粒 ， 說明 ______________________________ (4)為了檢測(cè)上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無 ampR和 tetR的大腸桿菌 ， 將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng) ， 得到如圖二的菌落 。 與圖三空圈相對(duì)應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是 ___________________________， 圖三結(jié)果顯示 ， 多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是 ___________________。 (2) 同一限制酶切割 DNA 分子產(chǎn)生的黏性末端相同，根據(jù)題意可知：該目的基因兩側(cè)被限制酶 EcoR Ⅰ 切割后所形成的黏性末端為： 目的基因 — G AA T TC — ?? — G AA TTC — — CT T AA C — ?? — CT T AA G — (3)DNA連接酶催化兩個(gè) DNA片段形成磷酸二酯鍵；而通過 DNA連接酶作用能將兩個(gè) DNA分子片段連接 ， 表明經(jīng)兩種限制酶 (BamH I和 BglⅡ )切割得到的 DNA片段 ， 其黏性末端相同 。 由圖二 、 圖三結(jié)果顯示 ， 多數(shù)大腸桿菌都能抗氨芐青霉素 ， 而經(jīng)限制酶 BamH I作用后 ， 標(biāo)記基因 tetR被破壞 ， 而不能抗四環(huán)素 ， 故多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是 pBR322質(zhì)
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