蛋白質(zhì)化學(xué)最終版ppt課件-閱讀頁
2025-05-27 13:55本頁面
【正文】 級(jí)結(jié)構(gòu) 模體 多肽鏈順序上相鄰的二級(jí)結(jié)構(gòu)常常在空間折疊中靠近，彼此相互作用，形成有規(guī)則的二級(jí)結(jié)構(gòu)聚集體，是蛋白質(zhì)發(fā)揮特定功能的基礎(chǔ)。 結(jié)構(gòu)域特點(diǎn) ： ★ 結(jié)構(gòu)域與分子整體以共價(jià)鍵相連 ★ 具有相對(duì)獨(dú)立的空間構(gòu)象和生物學(xué)功能 免疫球蛋白 G的立體結(jié)構(gòu) 疏水鍵、離子鍵、氫鍵和 范德華力等。即肽鏈中所有原子在三維空間的排布位置。 胰島素分子的三級(jí)結(jié)構(gòu) 溶菌酶的三級(jí)結(jié)構(gòu) （六）蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu) 血紅蛋白的四級(jí)結(jié)構(gòu) 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)示意圖 視頻：蛋白質(zhì)的折疊 三、蛋白質(zhì)和多肽合成的基本原理 （二）采用生物技術(shù)合成蛋白質(zhì) （一）化學(xué)合成法的基本原理 1. 氨基酸的基團(tuán)保護(hù)： 氨基保護(hù)、羧基保護(hù)、側(cè)鏈基團(tuán)保護(hù) 2. 多肽的液相合成 P80 3. 多肽的固相合成 P81 1. 基因工程 2. 細(xì)胞工程 3. 酶工程 P82 基因工程合成蛋白質(zhì) 基因工程藥品 （ 1） .傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)藥品（如動(dòng)物激素）： 控制某種物質(zhì)合成基因 轉(zhuǎn)基因“工程菌” 基因工程藥品 基因表達(dá)產(chǎn)物 基因工程 發(fā)酵 分離提取 從動(dòng)物組織中提取，生產(chǎn)量小，價(jià)格昂貴。 his thr glu C(146) HbS β 肽鏈 HbA β 肽 鏈 Nval leu pro glu 二、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 1. 蛋白質(zhì)前體的活化 蛋白質(zhì)分子特定的空間構(gòu)象是蛋白質(zhì)實(shí)現(xiàn)其功能或活性所必需 蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的改變伴隨其功能的變化 ， 而一級(jí)結(jié)構(gòu)沒有變化 ， 稱為 變構(gòu)效應(yīng) 。 瘋牛病是由朊病毒蛋白 ( PrP)引起的一組人和動(dòng)物神經(jīng)退行性病變。 天然狀態(tài)，有催化活性 非折疊狀態(tài)，無活性 尿素、 β巰基乙醇 變性的本質(zhì) —— 破壞非共價(jià)鍵和二硫鍵，不改變蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)。 變性蛋白的特征 變性作用的因素 加熱、紫外線、乙醇等有機(jī)溶劑、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、重金屬離子及生物堿試劑等 。 變性作用的意義 視頻：蛋白質(zhì)的變性 三 .蛋白質(zhì)的兩性電離 * 蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) （ pI) 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一 pH時(shí) ， 蛋白質(zhì)解離成正 、 負(fù)離子的趨勢(shì)相等 ， 即成為兼性離子 ， 凈電荷為零 ， 此時(shí)溶液的 pH稱為 蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) 。 四、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì) 蛋白質(zhì)分子大小在膠粒范圍之內(nèi) 。 1. 中性鹽沉淀蛋白質(zhì)： 在蛋白質(zhì)溶液中加入大量的硫酸銨 ， 硫酸鈉或氯化鈉等中性鹽 ， 破壞蛋白質(zhì)的水化膜和同種電荷 ， 使蛋白質(zhì)顆粒相互聚集 ，發(fā)生沉淀 。 5. 生物堿試劑沉淀法 蛋白質(zhì)溶液 PH小于其等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)解離成 正離子， 易與生物堿試劑結(jié)合，生成不溶性的 鹽而沉淀。但是單純使用此方法不易使蛋白質(zhì)沉淀完全，常與其他方法配合使用。 鹽析沉淀： 視頻：蛋白質(zhì)的鹽析 超過濾 加壓 蛋白質(zhì)溶液 半透膜 支持膜的柵板 超濾液 透析 （二）根據(jù)分子大小不同的分離純化方法 未知 logMr 洗出液中的蛋白質(zhì)濃度 洗脫體積（ mL） 層析的主要設(shè)備 3. 密度梯度離心 蔗糖密度梯度 滴加樣品 CsCl密度梯度離心 蛋白質(zhì)在高于或低于其 pI的溶液中為帶電的顆粒 ， 在電場(chǎng)中能向正極或負(fù)極移動(dòng) 。 （三）根據(jù)電離性質(zhì)的分離純化方法 幾種重要的蛋白質(zhì)電泳 *SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 ，常用于蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定。 *雙向凝膠電泳 是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要技術(shù)。例如，酶蛋白和輔酶、抗原和抗體、激素與其受體等都具有這種特性。 ?特點(diǎn)： 1. 高度特異性 ? 2. 可逆行 （四）根據(jù)配基特異性的分離純化方法 三、蛋白質(zhì)的純度鑒定、含量測(cè)定和結(jié)構(gòu)分析 （一）蛋白質(zhì)的純度鑒定 1. 層析法： 層析純 2. 電泳法： 電泳純 3. 免疫化學(xué)法： 免疫純 （二）蛋白質(zhì)含量測(cè)定 1. 凱氏定氮法 2. 福林（ Folin ） 酚試劑法（ Lowry法） 3. 雙縮脲法 4. 紫外分光光度法 5. BCA比色法 6. Bradford蛋白分析法 視頻：蛋白質(zhì)含量測(cè)定 X射線衍射法和核磁共振技術(shù) （ NMR)是研究蛋白質(zhì)三維空間結(jié)構(gòu)最準(zhǔn)確的方法 。 ?螺旋的 CD峰有 222nm處的負(fù)峰 、208nm處的負(fù)峰和 198 nm處的正峰三個(gè)成分；而 ?折疊的 CD譜不很固
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