【正文】 ? 通常 亞基 只有一條多肽鏈，但有的 亞基由兩條或多條多肽鏈組成 ，這些多肽鏈間多以 二硫鍵 相連 ,亞基單獨存在時無生物學(xué)活性。 定義 維持蛋白質(zhì)四級結(jié)構(gòu)的主要作用力 ? 在蛋白質(zhì)四級結(jié)構(gòu)中，亞基之間的作用力主要包括： 氫鍵、離子鍵、范德華力和疏水鍵。 ? 疏水鍵 是最主要的作用力。 四條肽鏈的三級結(jié)構(gòu)與肌紅蛋白相似，各自內(nèi)部有一個血紅素輔基。通過植物、動物和微生物等數(shù)百種生物的細胞色素 C一級結(jié)構(gòu)的研究表明： （ 1）親緣關(guān)系越近， AA順序的同源性越大。 ? 鐮刀形貧血病： ? 病因：血紅蛋白 AA順序的細微變化 ?鏈 N端氨基酸排列順序 1 2 3 4 5 6 7 8 HbA（正常人） ValHisLeuThrProGluGluLys… HbS（患 者） ValHisLeuThrProValGluLys… 鐮刀形貧血病： 病人體內(nèi)血紅蛋白的含量乃至紅細胞的量都較正常人少，且紅細胞的形狀為新月形，即鐮刀狀。 谷氨酸在生理 pH值下為帶 負電荷 R基氨基酸 ，而纈氨酸卻是一種 非極性 R基氨基酸 ，就使得HbS分子表面的荷電性發(fā)生改變，引起等電點改變， 溶解度降低 ，使之不正常地聚集成纖維狀血紅蛋白，致使紅細胞變形成鐮刀狀 ,輸氧功能下降 ,細胞脆弱易溶血 . ? 胰島素原與胰島素 （牛胰島素原的激活） Arg Lys Arg (二 ) 蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 ? 蛋白質(zhì)的功能通常取決于它的特定構(gòu)象 。 ? 如血紅蛋白 是四個亞基的寡聚蛋白，其與氧的結(jié)合存在別構(gòu)效應(yīng)。 蛋白質(zhì)的性質(zhì) （ 一 ） 蛋白質(zhì)的相對分子量 （ 自學(xué) ） （ 二 ） 蛋白質(zhì)的兩性電離性質(zhì)和等電點 （ 三 ） 蛋白質(zhì)的變性與復(fù)性 （四）蛋白質(zhì)膠體性質(zhì) (五 ) 蛋白質(zhì)的沉淀 (六）蛋白質(zhì)呈色反應(yīng) （七）蛋白質(zhì)的測定 蛋白質(zhì)的分離、分析技術(shù) （ 自學(xué) ） 六 蛋白質(zhì)的性質(zhì)與分離、分析技術(shù) (二 ) 蛋白質(zhì)的兩性電離及等電點 蛋白質(zhì)的等電點： 當(dāng)溶液在某一定 pH值時，使某特定蛋白質(zhì)分子上所帶正負電荷相等，成為兩性離子，在電場中即不向陽極移動也不向陰極移動，此時溶液的 pH值即為該蛋白質(zhì)的等電點（ pI）。 在外液 pH低于等電點的溶液中， 蛋白質(zhì)粒子帶正電荷，在電場中向負極移動； 在外液 pH高于等電點的溶液中， 蛋白質(zhì)粒子帶負電荷，在電場中向正極移動。 參見 p50 蛋白質(zhì)的性質(zhì) （一）蛋白質(zhì)的相對分子量（ 自學(xué) ） 參見 p51 電泳 蛋白質(zhì)在等電點 pH條件下，不發(fā)生電泳現(xiàn)象。 根據(jù)蛋白質(zhì)凈電荷的差異來分離蛋白質(zhì)的一種方法是 電泳法 。但 一級結(jié)構(gòu)未遭破壞 ，這種現(xiàn)象稱為 蛋白質(zhì)的變性。 C、蛋白質(zhì)的變性后的表現(xiàn) 生物活性喪失；溶解度降低，對于球狀蛋白粘度增加；光吸收系數(shù)增大；生物化學(xué)性質(zhì)改變。 D、蛋白質(zhì) 變性的本質(zhì) ： 分子中各種次級鍵斷裂，使其空間構(gòu)象從緊密有序的狀態(tài)變成松散無序的狀態(tài)， 一級結(jié)構(gòu)不破壞。 E、蛋白質(zhì)的復(fù)性 定義： 如果引起變性的因素 比較溫和 ，蛋白質(zhì)構(gòu)象僅僅是有些松散時，當(dāng)除去變性因素后，可根據(jù)熱力學(xué)原理緩慢地重新自發(fā)折疊恢復(fù)原來的構(gòu)象，這種現(xiàn)象稱作復(fù)性 。 (四 )蛋白質(zhì)膠體性質(zhì) 由于蛋白質(zhì)分子量很大，在水溶液中形成直徑 1100nm之間的顆粒，已達到膠體顆粒范圍的大小，因而具有膠體溶液的通性。 蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，在非等電狀態(tài)時，相同蛋白質(zhì)顆粒帶有同性電荷， 與周圍的反離子構(gòu)成穩(wěn)定的 雙電層 。 蛋白質(zhì)溶液由于具有 水化層 與 雙電層 兩方面的穩(wěn)定因素，所以作為膠體系統(tǒng)是相對穩(wěn)定的。 透析法： 以半透膜提純蛋白質(zhì)的方法叫透析法 半透膜： 只允許溶劑小分子通過，而溶質(zhì)大分子不能通過，如羊皮紙、火棉膠、玻璃紙等 (五 )蛋白質(zhì)的沉淀 蛋白質(zhì)在溶液中的穩(wěn)定性是有條件的 、相對的 。 定義： 蛋白質(zhì)在溶液中靠水膜和電荷保持其穩(wěn)定性，水膜和電荷一旦除去，蛋白質(zhì)溶液的穩(wěn)定性就被破壞，蛋白質(zhì)就會從溶液中沉淀下來，此現(xiàn)象即為 蛋白質(zhì)的沉淀作用。 ? 在沉淀過程中， 結(jié)構(gòu)和性質(zhì)都沒有發(fā)生變化 ，在適當(dāng)?shù)臈l件下，可以重新溶解形成溶液，所以這種沉淀又稱為 非變性沉淀。 (1)鹽析 在蛋白質(zhì)的水溶液中，加入大量 高濃度 的強電解質(zhì)鹽 如硫酸銨、氯化鈉、硫酸鈉等，可破壞蛋質(zhì)分子表面的水化層，中和它們的電荷，因而使蛋白質(zhì)沉淀析出，這種現(xiàn)象稱為 鹽析 。 鹽析的機理 ： 破壞蛋白質(zhì)的水化膜，中和表面的凈電荷 。 各種蛋白質(zhì)的親水性及荷電性均有差別，因此不同蛋白質(zhì)所需中性鹽濃度也有不同，只要調(diào)節(jié)中性鹽濃度，就可使混合蛋白質(zhì)溶液中的幾種蛋白質(zhì)分散沉淀析出，這種方法稱為 分段鹽析 。 弱酸或弱堿沉淀法機理 ： 破壞蛋白質(zhì)表面凈電荷 。 有機溶劑沉淀法的機理 ： 破壞蛋白質(zhì)的水化膜 。 2 不可逆沉淀 ?定義： 在強烈沉淀條件下，不僅破壞了蛋白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定性，而且也 破壞了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì) ，產(chǎn)生的蛋白質(zhì)沉淀不可能再重新溶解于水。 ?如 加熱沉淀 （次級鍵） 、強酸堿沉淀 （影響電荷） 、重金屬鹽沉淀（ Hg2+、 Pb2+ 、 Cu2+、 Ag2+）和生物堿試劑或某些酸類沉淀 等都屬于不可逆沉淀。 重金屬沉淀法的機理 ： 重金屬鹽加入之后，與帶負電的羧基結(jié)合 。 能夠沉淀生物堿的試劑稱為 生物堿試劑 。 生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)的機理 ： 在酸性條件下，蛋白質(zhì)帶正電，可以與生物堿試劑的酸根離子結(jié)合而產(chǎn)生沉淀 。 少量鹽促進蛋白質(zhì)加熱凝固 。 參見 p55 雙縮尿在堿性溶液中能與硫酸銅發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生紅紫色絡(luò)合物，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。 C 雙縮脲反應(yīng) 蛋白質(zhì)在遠紫外光區(qū) （ 200230nm）有較大的吸收 ， 在280nm有一特征吸收峰 ， 可利用這一特性對蛋白質(zhì)進行定性定量鑒定 。 蛋白質(zhì)的功能 2. 蛋白質(zhì)的組成（元素組成、化學(xué)組成）及蛋白質(zhì)含量的測定 3. 20種氨基酸的 結(jié)構(gòu) 、 分類 及名稱（ 三字縮寫符 、單字縮寫符） 4. 氨基酸的 重要理化性質(zhì) ：兩性解離、 茚三酮 顯色、與 2,4二硝基氟苯（ DNFB）反應(yīng)、 與異硫氰酸苯酯（ PITC）的反應(yīng) 5. 蛋白質(zhì)的 一級結(jié)構(gòu) ：肽、肽鍵、活性多肽及一級結(jié)構(gòu)的測定 6. 蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)： 二級結(jié)構(gòu) 單元（ ?螺旋、 ?折疊、 ?轉(zhuǎn)角、無規(guī)卷曲）、 三級與四級結(jié)構(gòu) （超二級結(jié)構(gòu)、結(jié)構(gòu)域、亞基）及結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 7. 蛋白質(zhì)的性質(zhì)：大分子性質(zhì)、蛋白質(zhì)分子量的測定（離心法、凝膠過濾法、 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法）、 兩性電離 （等電點、電泳、離子交換）、 膠體性質(zhì)、蛋白質(zhì)沉淀 （可逆沉淀、不可逆沉淀）、 蛋白質(zhì)變性 、紫外吸收及顏色反應(yīng) 8. 蛋白質(zhì)的分離、分析技術(shù) 課外作業(yè) P6162思考題 ： 8