菌種的傳代與保藏ppt課件-閱讀頁
2025-04-06 05:51本頁面
【正文】 平，無定形，周邊擴(kuò)散，表面濕潤(rùn)，灰白色，周圍有藍(lán)綠色素?cái)U(kuò)散 ?金黃色葡萄球菌 —— 甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基 ?金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍有黃色環(huán) ?沙門菌 —— SS瓊脂平板 ?無色，透明或半透明，光滑濕潤(rùn)的圓形菌落 顯微鏡檢查 ? 將菌種作革蘭氏色，在顯微鏡下觀察 ? 制片步驟：涂片－干燥－固定－染色－鏡檢 ? 革蘭氏染色步驟：初染－媒染－脫色－復(fù)染 ? 制好片后先用低倍鏡再用油鏡觀察 ? 革蘭氏色陽性菌為紫色 ? 革蘭氏色陰性菌為紅色 細(xì)菌涂片制作 ：取清潔玻片一張，取 1～ 2環(huán)生理鹽水在玻片上，滅菌接種環(huán)后，取少許菌苔于鹽水中研磨成乳濁狀，并涂成1平方厘米左右的菌膜，若用液體培養(yǎng)物涂片，可直接涂，不用加生理鹽水。 ? ：手持玻片一端，標(biāo)本面向上，在外層火焰上以鐘擺速度來回通過３次。 革蘭氏染色 ? ：滴加結(jié)晶紫染液 1～ 2滴于標(biāo)本菌膜上。 ? ：加革蘭氏碘液 1～ 2滴于菌膜上， 1min后，用水沖洗，傾去玻片上余水。 ? ：加稀釋石炭酸復(fù)紅 1～ 2滴于菌膜上， 1min后，用水沖洗，傾去玻片上余水。 ? 注意事項(xiàng)： ? ，菌膜應(yīng)薄而均勻。 ? ，如細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間，染色技術(shù)等。一般選用 16～ 24h培養(yǎng)物為宜。 ? 大腸埃希菌：革蘭氏陰性，短小桿菌 ? 沙門菌：革蘭氏陰性，桿菌 ? 銅綠假單胞菌：革蘭氏陰性，桿菌 ? 金黃色葡萄球菌：革蘭氏陽性，葡萄串狀球菌 金黃色葡萄球菌 大腸埃希菌 3 菌懸液的制備 ? 取上述培養(yǎng)好的菌種斜面移入接種室或凈化工作臺(tái) ， 放置室溫后 , 用接種環(huán)取菌苔少許接種置營(yíng)養(yǎng)肉湯中 （ 已滅菌 ） ， 將 已 接 種 畢 的 細(xì) 菌 管 置35~37℃ 培養(yǎng) 18~24小時(shí) ， 取出備用 。 4 對(duì)照用菌液制備 ? 取上述培養(yǎng)好的營(yíng)養(yǎng)肉湯菌懸液（濃菌液） 1ml，加到 9ml %無菌氯化鈉溶液混勻，為 101，再取另一只吸管吸取 101菌液 1 ml加到9ml %無菌氯化鈉溶液混勻，為102 …… 以此類推，稀釋至含活菌數(shù)在 50 ~ 100 cfu。 菌種 菌種 工作菌種培養(yǎng)基 菌懸液 對(duì)照菌液 大腸桿菌 營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面 營(yíng)養(yǎng)肉湯 % 氯 化 鈉 溶液 沙門菌 營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面 營(yíng)養(yǎng)肉湯 % 氯 化 鈉 溶液 金黃色葡萄球菌 營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面 營(yíng)養(yǎng)肉湯 % 氯 化 鈉 溶液 銅綠假單胞菌 營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面 營(yíng)養(yǎng)肉湯 % 氯 化 鈉 溶液 生孢梭菌 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 % 氯 化 鈉 溶液 白色念珠菌 真菌瓊脂斜面 真菌培養(yǎng)基 % 氯 化 鈉 溶液 五、菌種保管 ? 菌種保管應(yīng)有專人負(fù)責(zé) ， 保存于加鎖的冰箱中或特制的白鐵箱中加鎖置陰暗處 ， 確保菌種安全 。 ? 菌種應(yīng)有詳細(xì)登記本 ， 包括名稱 、 分離日期 、鑒定日期 、 鑒定者 、 主要鑒定性能 ， 并注意記錄使用 、 轉(zhuǎn)移及銷毀情況和原因 。 一般每移種3次后作一次全面鑒定 。 ? 購置菌種 ， 應(yīng)有介紹信 。 由于驗(yàn)證試驗(yàn)中包括黑曲霉菌，在轉(zhuǎn)種或洗菌時(shí)應(yīng)注意關(guān)閉無菌室或超凈工作臺(tái)的抽風(fēng)機(jī)并在酒精燈火焰旁操作，以免菌孢子飛揚(yáng)。除生物危險(xiǎn)外，還應(yīng)加強(qiáng)微生物檢查的安
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