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細胞實驗教案1最終版-在線瀏覽

2024-11-16 00:21本頁面
  

【正文】 。細胞膜允許一些物質(zhì)通透,又能降低甚至阻止另一些物質(zhì)的通透,所以細胞膜具有選擇通透性。將紅細胞放在低滲鹽溶液中,水分子大量滲到細胞內(nèi),可使細胞脹破,血紅蛋白釋放到介質(zhì)中,由不透明的紅細胞懸液變?yōu)榧t色透明的血紅蛋白溶液,這種現(xiàn)象稱為溶血。在不同相對分子量、脂溶性大小以及電解質(zhì)和非電解質(zhì)等各種溶液中,紅細胞質(zhì)膜對各種溶質(zhì)的滲透性不同。因此,發(fā)生溶血現(xiàn)象所需時間長短可作為測量物質(zhì)進入紅細胞速度的一種指標(biāo)。三、實驗用品血液(兔血或雞血,含適量肝素)50mL燒杯、10ml試管、試管架、移液槍及槍尖,標(biāo)簽紙、吸水紙等。:,晃動試管使之混合均勻,注意觀察溶液的顏色變化,溶液由不透明 的紅色變?yōu)橥该鞯募t色,紅細胞發(fā)生破裂,造成100%紅細胞溶血,使光線比較容易透過溶液。:取10支試管,分別加入3ml不同的等滲溶液,做好標(biāo)記后,輕輕振蕩,仔細觀察是否發(fā)生溶血并記錄發(fā)生溶血的時間。六、思考脂溶性與水溶性、小分子與大分子、極性與非極性、帶電荷與不帶電荷物質(zhì),分別是哪一種更容易穿過質(zhì)膜?七、注意事項,能夠清楚地透過溶液看到溶液后方紙上清晰的字跡時,為完全溶血。尤其滴加血液的操作要迅速。,血量也要一致。,掌握細胞有絲分裂前、中、后、末期的染色體形態(tài)變化特點。:草履蟲無絲分裂裝片、洋蔥根尖切片、馬蛔蟲裝片,洋蔥根尖。:1mol/L HCl(60℃預(yù)熱),Carnoy固定液(甲醇3∶1冰醋酸),95%、85%、70%酒精。(一)草履蟲無絲分裂切片觀察草履蟲可進行無性生殖(無絲分裂)和有性生殖(接合生殖)。分裂時草履蟲大核向胞體兩端伸長,進而在核的中部向內(nèi)凹陷,呈啞鈴形。(二)洋蔥根尖有絲分裂觀察:待根長達2厘米時,切下根尖,浸入Carnoy固定液中4h,分別在95%和85%酒精中各浸泡30 min,最后在70%酒精中保存。:切取根尖的乳白色的分生區(qū),用鑷子輕輕地搗碎,滴一滴改良苯酚品紅染液,染色20 min后,蓋上蓋玻片。:先在低倍鏡下找出根尖末端,從根尖末端往上依次為根的根冠區(qū)、生長區(qū)和伸長區(qū)(圖181)。小心移動標(biāo)本,選擇處于分裂狀態(tài)最多的部位轉(zhuǎn)高倍鏡觀察,便可見許多處于不同分裂時期的細胞。前期:細胞從間期進入前期時,細胞核膨大,染色質(zhì)逐漸螺旋形成細線狀的染色體。前期末,核仁解體,紡綞絲出現(xiàn),核膜、核仁完全消失。通過PEG誘導(dǎo)雞血細胞之間的融合實驗,初步掌握細胞融合的基本方法。細胞融合技術(shù)是研究細胞遺傳、基因定位、細胞免疫、病毒和腫瘤的重要手段。②化學(xué)因子誘導(dǎo)的細胞融合,如聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)。PEG是乙二醇的多聚化合物,存在一系列不同分子質(zhì)量的多聚體。該方法應(yīng)用相對分子質(zhì)量為400~6000的PEG溶液引起細胞的聚集和粘連,產(chǎn)生高頻率的細胞融合?!緦嶒瀮x器、材料和試劑】儀器、用具:注射器、刻度離心管、離心機、血細胞計數(shù)板、水浴鍋、滴管、顯微鏡、燒杯、容量瓶、凹面載玻片、蓋玻片、酒精燈等。試劑1)%NaCl溶液。2H2O, NaH2PO43)50%(m/V)PEG溶液:①取50g PEG(相對分子質(zhì)量=4000)放入100ml瓶中,高壓滅菌20min。③加入50ml預(yù)熱至50℃的GKN液,混勻,置37℃?zhèn)溆谩?2H2O KCl KH2PO4 MgSO4取1000ml的燒杯及容量瓶各一個,先放重蒸水800ml于燒杯中,然后按上述配方順序,逐一稱取藥品。5)Hanks液:Hanks原液 100ml 重蒸水 896ml %酚紅 4ml 配好的Hanks液,分裝包扎貼上標(biāo)簽,經(jīng)過滅菌后,4℃保存?!痉椒ㄅc步驟】 雞血細胞的獲得從家雞的翼根靜脈用注射器采血,注入試管后,迅速加入肝素(100U肝素/5ml全血)混合,制成抗凝全血。雞血細胞懸液的制備取雞血細胞儲備液200μl,加入800μl %NaCl溶液,混勻后,1200r/min離心5min,棄去上清液,再加入1000μl %NaCl溶液按上述條件離心一次。計數(shù)取100μl雞血細胞懸液,加700μl的GKN溶液進行稀釋,在血細胞計數(shù)板上計數(shù)。雞血細胞的收集吸取200μl雞血細胞懸液放入離心管中,加入800μl Hanks液混勻,1000r/min離心5min。PEG誘導(dǎo)細胞融合 吸取100μl 37℃的50%PEG溶液,慢慢沿著離心管壁逐滴加入,邊加邊輕搖離心管,使PEG與細胞混勻,然后在37℃水浴中靜置2min。制備細胞懸液用吸管輕輕吹打細胞團數(shù)次使細胞團分散,1000r/min離心5min,使細胞完全沉降。滴片、染色和鏡鑒用鑷子取預(yù)先冰凍的干凈載玻片,迅速滴上2—3滴細胞懸浮液,用玻片從載玻片的一邊推到另一邊,使細胞分散均勻,然后置酒精燈上微微加熱干燥。在顯微鏡下觀察細胞融合的情況?!咀⒁馐马棥勘緦嶒炛?,%NaCl液代替了Alsver液。高Ca2+濃度能夠提高細胞融合率。必須嚴格控制PEG的作用時間,通常處理細胞1~2min。融合細胞繼續(xù)培養(yǎng)就變成了一個雜種細胞,它的染色體不是兩核的倍數(shù),因為一些染色體會逐漸的消失。試說明細胞融合的關(guān)鍵。待根長到2厘米左右時,于夜晚12時至1時切取長約1厘米左右的根尖。(3)固定將材料從前處理的藥物中取出,用水沖洗2~3次,放入卡諾氏或FAA固定液中,固定24小時,固定液用量應(yīng)為材料體積的15倍以上。經(jīng)過較長時間保存的材料,進行觀察前再用固定處理一次,效果較好。(5)染色和壓片將解離后的根尖,切取1~2毫米長的分生組織,放在載玻片上,加1滴醋酸洋紅染液,放置約10分鐘。壓好的片子中,材料鋪展成均勻的、單層細胞的薄層。(1)間期細胞形態(tài)無明顯變化,體積有所增大。(2)前期 細胞核脹大,核內(nèi)染色質(zhì)最初表現(xiàn)為極細盤曲的染色絲,以后染色絲逐漸縮短變粗形成染色體。在前期結(jié)束時,核仁核膜消失。染色體排列在細胞中央的赤道面上,從細胞極端觀察,可同時看到全部染色體;從側(cè)面觀察,則染色體排列成“一”字形。(4)后期染色體著絲點分裂,每一染色體的二條單體成為二條獨立的子染色體。(5
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