【正文】 革蘭氏染色： 取 18h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物作革蘭氏染色。 靛基質(zhì)（ Indole）試驗： ? 某些細(xì)菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚與對二甲基氨基苯醛結(jié)合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。 1C培養(yǎng) 24h時后，取約 2ml培養(yǎng)液，加入 Kovacs氏試劑 2~3滴，輕搖試管，呈紅色為陽性，或先加少量乙醚或二甲苯，搖動試管以提取和濃縮靛基質(zhì)，待其浮于培養(yǎng)液表面后，再沿試管壁徐緩加入 Kovacs氏試劑數(shù)滴，在接觸面呈紅色，即為陽性。 VP試驗 ? 某些細(xì)菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強堿環(huán)境下，被空氣中氧氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物， 稱 V－ P（ +）反應(yīng)。 ? 用上述方法在樣品中分離獲得的純菌落，經(jīng)抗 O157:H7標(biāo)準(zhǔn)血清或 EHEC O157:H7膠乳凝集測試為陽性者，報告檢出腸出血性大腸桿菌 O157:H7。 大腸桿菌的檢測 （ 1）常規(guī)檢測方法 國家標(biāo)準(zhǔn)： 國家標(biāo)準(zhǔn)采用三步法，即：乳糖發(fā)酵試驗、分離培養(yǎng)和證實試驗。 36177。 2h，觀察是否產(chǎn)氣。 1℃ 培養(yǎng) 1824h，觀察菌落形態(tài)。同時接種乳糖發(fā)酵管 36177。 2h，觀察產(chǎn)氣情況。 原國家商檢局制訂的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) ，等效采用美國 FDA的標(biāo)準(zhǔn)方法，用于對出口食品中的大腸桿菌進行檢測。 36177。 2h，觀察是否產(chǎn)氣。 1℃ 培養(yǎng) 48177。以 BGLB產(chǎn)氣為陽性。 (2) PCR方法 ?大腸桿菌是食品和水源污染糞便的指示菌。 ?Hsu等報導(dǎo)此方法特異性（除相近的志賀氏菌外）達 100％，假陽性率達 ％。在世界各國各類細(xì)菌性的食物中毒中，沙門氏菌常居前列。 ?沙門氏菌屬是腸桿菌科中最復(fù)雜的菌屬。可根據(jù)沙門氏菌的菌體抗原（ O抗原）分群（ A, B, C等），再根據(jù)其鞭毛抗原（ H抗原）分血清型（ 2等）。 ? 沙門氏菌主要通過食物、飲水經(jīng)口感染。 ? 沙門氏菌主要通過食物、飲水經(jīng)口感染。 （ 1）傷寒、副傷寒 由沙門氏屬中的傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿菌引起。臨床癥狀主要是胃腸炎。 （ 3）敗血癥 多為豬霍亂桿菌引起，甲、乙、丙型副傷寒桿菌和腸炎桿菌亦可引起敗血癥。 從食品中分離沙門氏菌樣品制備 ? 由于食品種類繁多，且每類中包括許多品種。故在進行微生物學(xué)檢驗時，應(yīng)按不同的形狀、加工方式及檢驗?zāi)康暮侠磉M行檢樣處理。 ? 粉狀樣品 應(yīng)將 225ml增菌液分?jǐn)?shù)次加入，并用滅菌玻棒攪拌成均勻懸液。將蛋類在含％十二烷基磺酸鈉的 200mg/kg Cl溶液中浸泡 30min后方可破殼取蛋。 ② 選擇性增菌： 此培養(yǎng)基允許沙門氏菌持續(xù)增菌，同時阻止大多數(shù)其他細(xì)菌的增殖。 ④ 生物化學(xué)篩選： 排除大多數(shù)非沙門氏菌，也提供了沙門氏菌培養(yǎng)物菌屬的初步鑒定。 （ 1）沙門氏菌的增菌和分離 ? 預(yù)增菌 將制備好的預(yù)增菌試液于 35℃ 培養(yǎng) 24h后，輕輕振搖培養(yǎng)液。 （ 2）沙門氏菌的篩選和生化、血清學(xué)鑒定 ① 篩選 用滅菌接種針挑取每個典型或可疑菌落的中心部位，分別接種三糖鐵（ TSI）、賴氨酸鐵瓊脂斜面，于 35℃ 培養(yǎng) 24h。 ② 生化學(xué)、血清學(xué)鑒定 ③ 混雜培養(yǎng)物 對呈混雜的 TSI瓊脂培養(yǎng)物，皆應(yīng)劃線于 MC、HE或 XLD瓊脂上，于 35℃ 培養(yǎng) 24h后，進行重新分離并至少挑取 2個可疑菌落接種到斜面上進行鑒定。棄去所有呈陽性結(jié)果的培養(yǎng)物，保留所有呈陰性反應(yīng)的培養(yǎng)物作進一步鑒定。 ? 彎曲菌是革蘭氏陰性菌，呈弧形和 S型。食用被污染的食物、水，尤其是雞、鴨、蛋，未消毒或消毒不完全的牛奶，均可致病?；蛱结樝到y(tǒng)采用的是發(fā)光劑標(biāo)記的單鏈 DNA探針，該探針與核糖體 RNA結(jié)合形成穩(wěn)定的 DNA:RNA雜交體。標(biāo)記的DNA:RNA雜交作用 GENPROBE發(fā)光儀檢測。 ② PCR法 根據(jù)彎曲菌屬 16sRNA高保守序列設(shè)計一對引物；在合適的反應(yīng)條件和反應(yīng)體系下進行反應(yīng)；最后利用電泳觀察結(jié)果。標(biāo)記物為發(fā)光素。近年來用堿性磷酸酶人工合成的寡核苷酸檢測人工污染的糞便樣品，檢測量為一百萬個菌落形成單位（ CFU)，敏感性和特異性達 100％。 金黃色葡萄球菌 ? 葡萄球菌是一類革蘭氏陽性菌。人一旦感染該菌，當(dāng)機體抵抗力減弱或皮膚受損時，易被感染，引起傷口化膿、中耳炎、毛囊炎等。 ? 對人有致病性的葡萄球菌多產(chǎn)生 α 溶血素；對動物有致病性的葡萄球菌多產(chǎn)生 β溶血毒素。其中以 A型引起的食物中毒最多， B和 C型次之。 ? 血漿凝固酶是鑒別葡萄球菌有無致病性的重要指標(biāo)。大多數(shù)致病性葡萄球菌能產(chǎn)生此酶，而非致病菌不產(chǎn)生。 檢驗方法 檢 樣2 5 g （ M l ) + 2 2 5 m L 滅 菌 生 理 鹽 水直 接 計 數(shù) 法 增 菌 培 養(yǎng) 方 法B a i r d P a r k e r 平 板7 . 5 ％ 氯 化 鈉 肉 湯或 胰 酪 胨 大 豆 肉 湯血 平 板血 平 板B a i r d P a r k e r 平 板觀 察 溶 血涂 片 染 色 血 漿 凝 固 試 驗報 告 3 6 ℃ 177。 1 ℃ ， 2 4 h 3 6 ℃ 177。 1 ℃ ， 2 4 h（ 1）常規(guī)檢驗方法 （ 2）現(xiàn)代檢驗技術(shù) ① 利用 mini－ Vidas全自動免疫分析儀，它是應(yīng)用酶聯(lián)免疫技術(shù)，用熒光分析技術(shù)通過固相吸附器，用已知抗體來捕捉目標(biāo)生物體，然后以帶熒光的酶聯(lián)抗體再次結(jié)合，經(jīng)充分沖洗，通過激發(fā)光源檢測，即能自動讀出發(fā)光的陽性標(biāo)本，其優(yōu)點是檢測靈敏度高、速度快，可在 48h的時間內(nèi)快速篩選鑒定出金黃色葡萄球菌及金黃色葡萄球菌腸毒素。 ③ 大多數(shù)檢測葡萄球菌的探針是針對腸毒素的。 ④ PCR法：設(shè)計特異性引物根據(jù)產(chǎn)生腸毒素 AE基因（ entA, entB, entC, entD和 entE),檢測葡萄球菌exfoliative基因，檢測中毒休克毒素基因 (tst)。這種毒素毒性強烈，是一種獨特的神經(jīng)麻痹毒素，即肉毒毒素。 ? 肉毒梭菌在自然界的分布具有某種區(qū)域性差異，顯示出生態(tài)上的差異傾向。 ? 肉毒梭菌一年四季均可發(fā)生，發(fā)病主要與飲食習(xí)慣有密切的關(guān)系。 檢驗方法 1）常規(guī)肉毒梭菌的檢出 GB/T 2022 2） PCR法 食 品毒 素 檢 測增 菌 ， 產(chǎn) 毒 培 養(yǎng)3 0 ℃ ， 5 d報 告（ 一 ）毒 素 檢 測報 告（ 二 ）觀 察 生 長 性 狀 ，染 色 鏡 檢分 離 培 養(yǎng)觀 察 菌 落 性 狀 ，染 色 鏡 檢增 菌 ， 產(chǎn) 毒 培 養(yǎng)3 0 ℃ ， 5 d毒 素 檢 測 培 養(yǎng) 檢 查報 告 （ 三 ）報告（一）：檢樣含某型肉毒毒素 報告