核酸提取及常見(jiàn)問(wèn)題分析ok-在線瀏覽
2025-07-12 21:40本頁(yè)面
【正文】 ，能與多酚形成一種不溶的絡(luò)合物質(zhì)，有效去除多酚，減少 DNA中酚的污染；同時(shí)它也能和多糖結(jié)合，有效去除多糖。 ? 該復(fù)合物在高鹽溶液中（ ）是可溶的，通過(guò)有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來(lái)。核酸提取及常見(jiàn)問(wèn)題分析 第一部分： DNA提取方法簡(jiǎn)介 第二部分： DNA提取常見(jiàn)問(wèn)題、 原因分析及其對(duì)策 內(nèi)容 第三部分： RNA提取方法簡(jiǎn)介 第四部分： RNA提取及其 RTPCR常見(jiàn) 問(wèn)題、原因分析及其對(duì)策 核酸是遺傳信息的載體，是最重要的生物信息分子，是分子生物學(xué)研究的主要對(duì)象，因此核酸的提取是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)中最重要、最基本的操作 。 前言 第一部分： DNA提取方法簡(jiǎn)介 第二部分： DNA提取常見(jiàn)問(wèn)題、 原因分析及其對(duì)策 第三部分： RNA提取方法簡(jiǎn)介 第四部分： RNA提取及其 RTPCR常見(jiàn) 問(wèn)題、原因分析及其對(duì)策 提取方法簡(jiǎn)介DNA提取的幾種方法 ? 基因組 DNA的提取 ? CTAB法 ? SDS法 ? 其它 DNA提取的幾種方法 ? 非基因組 DNA的提取 ? 質(zhì)粒 DNA的提取 ? 堿裂解法 ? 煮沸法 ? 線粒體、葉綠體 DNA的提取 ? 差速離心結(jié)合 SDS裂解法 基因組 DNA－ CTAB法 ? CTAB法原理 （植物 DNA提取經(jīng)典方法） ? CTAB（ hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化銨），是一種 陽(yáng)離子去污劑 ，可溶解細(xì)胞膜，并與核酸形成復(fù)合物。 注： CTAB溶液在低于 15℃ 時(shí)會(huì)形成沉淀析出，因此在將其加入冰冷的 植物材料之前必須預(yù)熱，且離心時(shí)溫度不要低于 15℃ 。 基因組 DNA－ CTAB法 ? CTAB法流程圖 植物材料 裂解液 上層溶液 液氮研磨 抽提 細(xì)胞裂解 干燥溶解 離心洗滌 酒精沉淀 DNA溶液 基因組 DNA－ CTAB法 ? SDS法原理 基因組 DNA－ SDS法 ? SDS是一種 陰離子去垢劑 ， 在高溫 （ 55～ 65℃ ） 條件下能裂解細(xì)胞 ， 使染色體離析 ， 蛋白變性 ， 釋放出核酸； ? 提高鹽 (KAc或 NH4Ac)濃度并降低溫度 （ 冰浴 ） ， 使蛋白質(zhì)及多糖雜質(zhì)沉淀 ， 離心后除去沉淀； ? 上清液中的 DNA用酚 /氯仿抽提 ， 反復(fù)抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。 快捷高效。 適用于純度要求高的實(shí)驗(yàn)。 基因組 DNA－其它方法 ? 濃鹽法 ： ? 有機(jī)溶劑抽提法： ? 密度梯度離心法： 利用 RNP和 DNP在鹽溶液中溶解度不同，將二者分離 有機(jī)溶劑作為蛋白變性劑，同時(shí)抑制核酸酶的降解作用 利用不同內(nèi)容物密度不同的原理分離各種內(nèi)容物 質(zhì)粒 DNA－堿裂解法 ? 堿裂解法原理 ? 染色體 DNA比質(zhì)粒 DNA分子大得多，且染色體 DNA為 線狀分子，而質(zhì)粒 DNA為共價(jià)閉合環(huán)狀分子； ? 當(dāng)用堿處理 DNA溶液時(shí)，線狀染色體 DNA容易發(fā)生變性，共價(jià)閉環(huán)的質(zhì)粒 DNA在回到中性 pH時(shí)即恢復(fù)其天然構(gòu)象； ? 變性染色體 DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片結(jié)合形成沉淀，而復(fù)性的超螺旋質(zhì)粒 DNA分子則以溶解狀態(tài)存在液相中，從而可通過(guò)離心將兩者分開(kāi)。 細(xì)胞器 DNA－差速離心法 ? 差速離心法原理 ? 是利用物質(zhì)比重的不同分離混合物的一種方法。 線粒體和葉綠體是生物體內(nèi)半自主性細(xì)胞器，自身可編碼蛋白，它們的 比重和大小一定，因而在同一離心場(chǎng)內(nèi)的沉降速度也一定，根據(jù)這一原理，常用不同轉(zhuǎn)速的離心法，將細(xì)胞內(nèi)各種組分分級(jí)分離出來(lái)。 ? 用多糖水解酶將多糖降解。 ? 用 PEG8000代替乙醇沉淀 D
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