qpcr實驗操作流程-展示頁
2024-09-21 11:29本頁面
【正文】 NA抽提1）細胞培養(yǎng)皿中細胞樣品用1*PBS洗兩次后，用1ml槍將PBS吸干凈，加入1ml Trizol （Invitrogen）溶液，吹打混勻， RNase free EP管中使細胞充分裂解，室溫靜置5min；組織樣品用液氮充分研磨，加入1ml Trizol （Invitrogen）溶液，混勻，室溫放置5min使其充分裂解；（管蓋與管壁都需標記樣品名稱）2） 加入200μl氯仿，劇烈振蕩混勻30s，使水相和有機相充分接觸，室溫靜置35min；（離心時離心管按順序排放，離心完畢，離心管的順序也按順序排好，與第一步的順序一致）3） 4℃下，14,000g離心15min，可見分為三層，RNA在上層水相，移至另一個新的RNase free EP管；（用20200ul的槍吸取上清，吸上清時，槍頭應沿著液面上層吸取上清，槍頭不可碰到、吸到中間層）4） 沉淀RNA：加入等體積異丙醇，輕柔地充分混勻（顛倒68次）（不應用振蕩器混勻），室溫靜置10min；5） 4℃下，14,000g離心10min，收集RNA沉淀（如離心后仍不見EP管底部有沉淀，應將EP管放置在80度冰箱過夜，繼續(xù)在4℃下，14,000g離心10min，收集RNA沉淀），去上清；6） 用75％乙醇洗滌兩次（12,000g離心5min）（加入乙醇后只需輕輕顛倒EP管即可，不用振蕩器震蕩或槍頭吸打沉淀），超凈臺風干；沉淀不能過干或過濕，過干則不易溶解，過濕則乙醇殘留。④橡膠手套須放入超凈臺照射紫外，實驗操作過程中不得帶出超凈臺，移液器在一天工作結(jié)束后調(diào)至最大量程，并用75%乙醇清潔移液器，槍頭盒及超凈臺面。③取EP管/槍頭時需用鑷子，不可以用使用過的手套直接取用。QPCR實驗流程一、 ①實驗前準備，每天早上到實驗室
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