實(shí)驗(yàn)課-制藥工程生化原理與制備實(shí)驗(yàn)指doc-展示頁
2024-07-30 04:38本頁面
【正文】 ilog（IV/W）式中： θ：供試品和標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià)比D：標(biāo)準(zhǔn)品高劑量與供試品高劑量之比，一般為1I：高低劑量之比的對(duì)數(shù)，即log2或log4。先測(cè)量出四點(diǎn)的抑菌圈直徑，按下列公式計(jì)算出檢品的效價(jià)。將抗生素標(biāo)準(zhǔn)品和供試品各稀釋成一定濃度比例（2:1或4:1）的兩種溶液，在同一平板上比較其抗藥活性，再根據(jù)抗生素濃度對(duì)數(shù)和抑菌圈直徑成直線關(guān)系的原理來計(jì)算供試品效價(jià)。抑菌圈直徑大小與抗生素濃度相關(guān)，比較抗生素標(biāo)準(zhǔn)品與檢品的抑菌圈大小，可計(jì)算出抗生素的效價(jià)。高10177。管碟法的基本原理是在含有高度敏感性試驗(yàn)菌的瓊脂平板上放置小鋼管（內(nèi)徑 177。管碟法是瓊脂擴(kuò)散法中的一種，已被各國藥典廣泛采用，作為法定的抗生素生物檢定方法。效價(jià)以“單位”(U)來表示。化學(xué)合成和半合成的抗菌藥物都以重量表示，生物合成的抗生素以效價(jià)表示，并同時(shí)注明與效價(jià)相對(duì)應(yīng)的重量。通常各種抗生素的單位，是根據(jù)國家抗生素標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定出來的，是衡量藥物有效成份的一種尺度。二 實(shí)驗(yàn)原理 抗生素效價(jià)：抗生素是一種生理活性物質(zhì)，它對(duì)生命現(xiàn)象很敏感，可以用抗生素的生物效能表示它的效價(jià)，其最小效價(jià)單元就叫做“單位”(U)。 生化技術(shù)理論與實(shí)踐實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)（四年制制藥工程專業(yè)） 生命科學(xué)與工程學(xué)院制藥工程系 張新國編寫 二零一零年六月17 / 18實(shí)驗(yàn)一 管碟法測(cè)定抗生素效價(jià)一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹 ×私夤艿ǖ脑?。掌握二劑量法測(cè)定抗生素效價(jià)單位的技術(shù)和計(jì)算方法。經(jīng)由國際協(xié)商規(guī)定出來的標(biāo)準(zhǔn)單位，稱為“國際單位”(IU)。抗生素的劑量常用重量和效價(jià)來表示。效價(jià)是以抗菌效能(活性部分)作為衡量的標(biāo)準(zhǔn)，因此，效價(jià)的高低是衡量抗生素質(zhì)量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)?？股氐纳餀z定是以抗生素對(duì)微生物的抗菌效力作為效價(jià)的衡量標(biāo)準(zhǔn)，具有與應(yīng)用原理相一致、用量少和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。 管碟法是根據(jù)抗生素在瓊脂平板培養(yǎng)基中的擴(kuò)散滲透作用，比較標(biāo)準(zhǔn)品和檢品兩者對(duì)試驗(yàn)菌的抑菌圈大小來測(cè)定供試品的效價(jià)。177。），管內(nèi)放人標(biāo)準(zhǔn)品和檢品的溶液，經(jīng)16~18小時(shí)恒溫培養(yǎng)，抗生素?cái)U(kuò)散的有效范圍內(nèi)則產(chǎn)生透明的無菌生長的區(qū)域，常呈圓形，稱為抑菌圈（圖實(shí)驗(yàn)18）。抗生素效價(jià)常采用二劑量法。取含菌層的雙層平板培養(yǎng)基，每個(gè)平板表面放置4個(gè)小鋼管，管內(nèi)分別放入檢品高、低劑量和標(biāo)準(zhǔn)品高、低劑量溶液。(1) 求出W和V：(2) W=（SH+UH）（SL+UL）(3) V=（UH+UL）（SH+SL）式中： UH：供試品高劑量之抑菌圈直徑 UL：供試品低劑量之抑菌圈直徑 SH：標(biāo)準(zhǔn)品高劑量之抑菌圈直徑 SL：標(biāo)準(zhǔn)品低劑量之抑菌圈直徑求出θ： （2） θ=D 求出Pr ： (5) Pr = Arθ 式中：Pr：供試品實(shí)際單位數(shù)Ar：供試品標(biāo)示量或估計(jì)單位當(dāng)抗生素在菌層培養(yǎng)基中擴(kuò)散時(shí)，會(huì)形成抗生素濃度由高到低的自然梯度，即擴(kuò)散中心濃度高而邊緣濃度低。根據(jù)擴(kuò)散定律的推導(dǎo)，抗生素總量的對(duì)數(shù)值與抑菌圈直徑的平方成線性關(guān)系。（2）培養(yǎng)基：效價(jià)檢定用培養(yǎng)基（上層、底層）。（4）試劑與器材：滅菌生理鹽水，無菌平皿，牛津杯，無菌吸管，鑷子，滴管，直尺。（2） 用滅菌生理鹽水將短小芽胞桿菌的芽胞懸液稀釋至一定濃度以能得到清晰的抑菌圈，且標(biāo)準(zhǔn)品高濃度所得抑菌圈直徑在1822mm為基準(zhǔn)。（3） 在平板底部四邊，分別對(duì)角注明“SH”、“SL” 和“UH”、“UL”標(biāo)記。（5） 以無菌滴管分別在每個(gè)牛津杯內(nèi)加入相應(yīng)的抗生素溶液至滿但不溢出管外，且四杯內(nèi)液面高度相同，蓋上平皿蓋，靜置30分鐘。（7） 計(jì)算抗生素效價(jià)（8） 查放線圖計(jì)算抗生素效價(jià)思考題怎樣理解抗生素效價(jià)測(cè)定與抗生素含量測(cè)定二者的關(guān)系？實(shí)驗(yàn)二 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)分子量 一、目的1．學(xué)習(xí)SDS—PAGE測(cè)定蛋白質(zhì)分子量的原理。二、原理聚丙烯酰胺凝膠是由單體—丙烯酰胺（acrylamide,簡稱Acr）和交聯(lián)劑N,N甲叉雙丙烯酰胺（methylenebisacrylamide,簡稱Bis）在加速劑和催化劑的作用下聚合而成的高分子物質(zhì)，具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和分子篩性質(zhì)。由于各種蛋白質(zhì)所帶的凈電荷、分子量大小和形狀不同，在電泳中會(huì)產(chǎn)生不同的電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，不連續(xù)電泳還有濃縮效應(yīng)，因而有不同的遷移率。結(jié)構(gòu)中不帶電荷，因而在電場(chǎng)中電泳電滲現(xiàn)象極為微小。在合適濃度范圍內(nèi)還具有較好的透明度，一定的機(jī)械強(qiáng)度，以及化學(xué)上惰性、吸附作用很小等許多優(yōu)點(diǎn)。單體SDS能與蛋白質(zhì)結(jié)合生成蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物。在蛋白質(zhì)溶液中，加入SDS和巰基乙醇，巰基乙醇可使蛋白質(zhì)分子中的二硫鍵還原，使多肽組分分成單個(gè)亞單
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1