農(nóng)學(xué)院本科生-農(nóng)桿菌介導(dǎo)gmftsh基因的煙草遺傳轉(zhuǎn)化畢業(yè)論文-展示頁
2025-07-07 13:49本頁面
【正文】 ，表達(dá)效果好，儀器和操作技術(shù)較簡單等優(yōu)點(diǎn)，引起了人們的極大關(guān)注［2］。 PCR assay在植物基因工程中，目前研究最清楚、應(yīng)用最廣泛的外源基因轉(zhuǎn)化方法便是根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)。最后通過RTPCR反應(yīng)進(jìn)行陽性轉(zhuǎn)基因植株GmftsH基因在轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)，在轉(zhuǎn)基因煙草中能夠擴(kuò)增出特異條帶，而在野生型煙草對(duì)照中沒有檢測(cè)到特異條帶，說明該基因在RNA水平上得到表達(dá)。 本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）題 目: 農(nóng)桿菌介導(dǎo)GmftsH基因的煙草遺傳轉(zhuǎn)化 姓 名: 學(xué) 院: 農(nóng)學(xué)院 專 業(yè): 農(nóng)學(xué) 班 級(jí): 學(xué) 號(hào): 指導(dǎo)教師: 職稱: 2011 年 5 月 15 日目 錄摘要 3關(guān)鍵詞 3Abstract 3Key Words 31 材料與方法 4 材料 4 植物材料 4 菌株和載體 5 培養(yǎng)基 5 農(nóng)桿菌培養(yǎng)基 5 煙草組織培養(yǎng)基 5 主要試劑 5 方法 5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草 5 受體材料準(zhǔn)備 5 農(nóng)桿菌的培養(yǎng) 6 農(nóng)桿菌侵染外植體及培養(yǎng) 6 轉(zhuǎn)基因煙草的分子鑒定 6 轉(zhuǎn)基因煙草DNA的提取 6 PCR鑒定 7 轉(zhuǎn)基因煙草RNA的提取 7 cDNA的合成 8 RTPCR檢測(cè) 82 結(jié)果與分析 9 影響根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化煙草的因素 9 菌液濃度對(duì)轉(zhuǎn)化效率的影響 9 侵染時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響 9 共培養(yǎng)時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化效率的影響 10 預(yù)培養(yǎng)時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化效率的影響 10 轉(zhuǎn)基因植株的獲得及分子檢測(cè)（PCR、RTPCR） 11 轉(zhuǎn)基因植株的獲得 11 轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測(cè) 113 討論 12致謝 13參考文獻(xiàn) 13農(nóng)桿菌介導(dǎo)GmftsH基因的煙草遺傳轉(zhuǎn)化摘要：利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將GmftsH基因轉(zhuǎn)入三生煙煙草中，震蕩4～5分鐘，然后置于MS1固體培養(yǎng)基上，在25℃的組織室內(nèi)共培養(yǎng)2天，待再生幼苗根系發(fā)達(dá)后，將不定芽進(jìn)行移栽從而獲得了三生煙煙草轉(zhuǎn)化植株。再經(jīng)PCR檢測(cè)，為陽性的植株均能擴(kuò)增出與目的片斷大小一致的特異性條帶，初步表明GmftsH基因已經(jīng)轉(zhuǎn)到這些煙草基因組中。關(guān)鍵詞：GmftsH基因；煙草；農(nóng)桿菌；遺傳轉(zhuǎn)化；PCR鑒定GmftsH agrobacteriummediated genetic tobacco genetic transformationAbstract：In the way of agrobacteriummediated,putting GmftsH gene into Sansheng tobacco, then we make cm x cm tobacco explant soaked in cultivating good agrobacterium suspension, Concussing 4 to 5 minutes, then placed on MS1 solid medium, and Altogether training for two days in 25 ℃ organization regeneration seedling root developed enough，transplanting adventitious bud thereby obtaining Sansheng tobacco conversion assay is the mon way to validate the transgenic Plant, specific corresponding fragment was amplified by PCR detection．It showed that GmftsH gene has been transferred into tobacco. Finally through RT polymerase chain reaction, detecting positive GmftsH gene transcription of transgenic plants level, In transgenic tobacco could amplify specific bands, whereas in wildtype tobacco control in the specific band was not detected, indicating that the gene was expressed at the RNA level.Key words: GmftsH gene；tobacco；agrobacterium；transformation。在已獲得的近200種轉(zhuǎn)基因植物中約有80％是由農(nóng)桿菌介導(dǎo)完成的［1］。該實(shí)驗(yàn)旨在建立農(nóng)桿菌介導(dǎo)的高效快速的煙草遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)體系，為分子生物學(xué)和植物基因工程的研究提供較好的技術(shù)基礎(chǔ)
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