制備hplc技術(shù)ppt課件-展示頁(yè)
2025-05-15 12:04本頁(yè)面
【正文】 峰高不變，峰變寬并呈矩形 制備 HPLC技術(shù)問(wèn)題 — 超量載樣 注意 ! 應(yīng)盡可能選用流動(dòng)相來(lái)溶解樣品，但應(yīng)注意樣品在流動(dòng)相中應(yīng)有良好的溶解度。 制備 HPLC采用超量進(jìn)樣的原因 : 大樣品量的純化 方法 分析系統(tǒng)的放大 : 使用直徑更大的制備柱、更高的流速，根據(jù)色譜柱的長(zhǎng)度增加進(jìn)樣量并保持樣品濃度不變，峰形尖銳而對(duì)稱。在這種條件下，會(huì)達(dá)到很好的分離效果，峰形尖銳并且很對(duì)稱。 制備 HPLC有關(guān)技術(shù)問(wèn)題 第二部分 制備 HPLC技術(shù)問(wèn)題 — 超量載樣 在分析液相中色譜柱的典型進(jìn)樣量是微克級(jí)，甚至更低。 分辨率 速度 載樣量 制備 HPLC概述 — 應(yīng)用舉例 在許多分離工作中，需要從大量的物質(zhì)中分離純化不足１％的所需成分，這種分離工作十分困難，在純化的最后階段常需使用１０ μ m或更小顆粒的高效填料。 增加洗脫液流速會(huì)降低分辨率，分辨率也會(huì)因上樣量過(guò)大而下降。 制備 HPLC概述 — 柱容量 制備 HPLC概述 — 分離效能 取決于分離速度、分辨率和上樣量。柱效迅速下降，峰變寬。 分析 HPLC 定性分析： 檢測(cè)的靈敏度 定量分析：分離度、再現(xiàn)性 35μ in 一般的分析池的最大允許流速僅為5 mL/min，或者10mL/min 制備 HPLC概述 — 主要結(jié)構(gòu)單元 輸液部 :輸液泵 shimadzu LC6AD(適用于分析 半制備 ,再循環(huán)半制備 ) 分離部 :制備柱 內(nèi)徑 20～ 50mm，柱長(zhǎng) 50cm。制備 HPLC技術(shù) 主要內(nèi)容 第一部分 .制備 HPLC概述 第二部分 .制備 HPLC技術(shù)問(wèn)題 上樣 條件的選擇 餾分的收集 循環(huán)色譜 柱切換 第一部分 制備 HPLC概述 ? 制備型液相色譜 ：結(jié)構(gòu)與分析型一樣，但泵流量大、進(jìn)樣量大、采用制備柱；柱后餾分收集器。 制備 HPLC概述 制備 HPLC概述 — 制備 HPLC與 分析 HPLＣ比較 目的 填料 流量 流通池 聯(lián)系 制備 HPLC 樣品中特定成分的高純度獲取，大量、廉價(jià)的制備 20μ以上為佳 150ml/min 最大允許流速可為150mL/min 在進(jìn)行制備 HPLC之前，常先進(jìn)行分析 HPLC實(shí)驗(yàn)，對(duì)分析方法進(jìn)行優(yōu)化、放大應(yīng)用到制備HPLC中，詳見后。 檢測(cè)部 :檢測(cè)器 shimadzu SPDM10Avp 餾分部 :餾分收集器 shimadzu FRC10A 制備 HPLC概述 — 制備泵的耐壓 制備 HPLC系統(tǒng)因制備柱的填料很細(xì)，分離度好，同時(shí)反壓很高，整個(gè)系統(tǒng)對(duì)壓力很敏感，制備泵要求能在制定的恒流量下 , 克服 100 150 bars反壓 ? 色譜柱的柱容量（柱負(fù)荷） 對(duì)分析柱： 不影響柱效時(shí)的最大進(jìn)樣量； 對(duì)制備柱： 不影響收集物純度時(shí)的最大進(jìn)樣量； 超載： 進(jìn)樣量超過(guò)柱容量。 超載可提高制備效率，以柱效下降一半或容量因子 k降低 10%為宜。對(duì)某一個(gè)分離參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化常會(huì)影響到其他分離參數(shù)。但分辨能力并不總是制備 HPLC首要考慮的因素，制備型HPLC應(yīng)首先具有經(jīng)濟(jì)、快速的生產(chǎn)所需產(chǎn)品的能力。為獲得所需微量組分，可采用如下手段： 制備型分離 半制備型分離 分析型分離 產(chǎn)物。樣品量和固定相
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