【正文】 ? 增變基因： 在確保遺傳信息的完整性上起一定作 用，其突變導(dǎo)致 DNA復(fù)制和修復(fù)障礙。證明缺乏 p53的細胞不能進行凋亡。 這是高水平的細胞結(jié)構(gòu)自然選擇的防御。 B、參于細胞周期 G1/S階段的 Checkpoint（細胞缺少 p53或含有其突變時，就不能停止于 G1期），而損傷 DNA的復(fù)制可導(dǎo)致遺傳的變化。 29 ? p53與細胞凋亡 : 在 Gene 控制下細胞程序化死亡。 ? C、 MDM2癌基因與 pRb結(jié)合并抑制 pRb，而有利細胞周期進展。細胞周期進入 S期前（ 24hr）pRb 磷酸化而失活，解除對 E2F的抑制使細胞進入 S期。對控制細胞增殖起重要作用。 ? 抑癌基因的產(chǎn)物及功能主要包括： 23 ? ① 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，如 :Rb、 p53； ? ②負調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子，如 :WT； ? ③周期蛋白依賴性激酶抑制因子（ CKI），如 :p1 p1 p21； ? ④信號通路的抑制因子，如 :ras GTP酶活化蛋白（ NF1），磷脂酶（ PTEN）； ? ⑤ DNA修復(fù)因子，如 :BRCA BRCA2。 LOH 的方法鑒定了 p53 Gene，位于 17p12 APC Gene位于 5q21 等 ? LOH MI（ Microsatellite instability） N T N T LOH MI 22 2） TSG 的功能 ? TSG 參與細胞周期復(fù)雜調(diào)控等，即作為一種負性調(diào)節(jié)因子（ negative regulation）。 19 20 25個遺傳標記 10個病例 21 選擇遺傳標記跨基因（ TSG ），遺傳標記與侯選 TSG 相鄰，遺傳標記的缺失就意味著 TSG丟失 。 ? LOH：雜合時某一等位基因片段丟失。APC基因被認為是 TSG。 ? WT1 10個外顯子， 50kb，傳錄本 3kb，編碼 46～ 49Ａ a的蛋白質(zhì)。 9 遺傳型 散發(fā)型 10 與 Knodson二次打擊學(xué)說是一致的， Rb Gene缺失或功能喪失，失去對腫瘤細胞的抑制作用，認為 Rb Gene 為 TSG。 7 例 如： 腫瘤細胞 轉(zhuǎn)移染色體 腫瘤生長抑制 ? 視網(wǎng)膜母 C瘤 13 + ? Wilms 11 + ? 神經(jīng)母細胞瘤 17 + 8 ③ 家族性癌的研究 A。 6 ② Stolet和 Shimizu微細胞轉(zhuǎn)移實驗 微細胞（含單個染色體 ） 轉(zhuǎn) 移 腫瘤細胞 腫瘤生長抑制。 5 ① 細胞融合實驗 ? Harris（ 1971年）和 Klein等實驗 鼠正常細胞 腫瘤細胞 喪失成瘤性 鼠 雜種細胞（表型正常） 繼續(xù)培養(yǎng) 形成腫瘤 鼠 出現(xiàn)逆分化（腫瘤表型） 腫瘤的抑制與正常染色體存在著相關(guān)性，正常染色體上有抑制腫瘤效應(yīng)的遺傳物質(zhì) —— TSG。 ? 抑癌基因的發(fā)現(xiàn)和深入研究乃是癌分子遺傳學(xué)的一重大突破，很大程度上回答了癌發(fā)生這個長期難以解答的問題。 ? Sager于 1990年指出，在癌的發(fā)生過程中，需要基因改變，即 癌基因的激活和抑癌基因的失活或丟失 ，二者在細胞繁殖的調(diào)控中起著正負信號的調(diào)節(jié)作用。這些基因編碼抑制細胞增殖的蛋白 , 抑制腫瘤細胞增殖。2022/3/13 1 1 China Medical University Department of Medical Geics （二） Li fucai 2 腫瘤抑制基因 （ Tumor Suppression GeneTSG） 存在于正常細胞中能夠抑制細胞惡性轉(zhuǎn)化，對細胞的增殖起負性調(diào)節(jié)作用的基因，其失活使正常細胞增殖失控，進而轉(zhuǎn)化形成腫瘤細胞。 其作用恰好與癌基因相反，其失活的 TSG（突變、喪失功能）常發(fā)現(xiàn)于人類腫瘤樣本中。 3 ? TSG： 在正常情況下對細胞的繁殖具有負調(diào)節(jié)作用，抑制癌基因。 ? 現(xiàn)有抑癌基因 30多種。 4 1） TSG的發(fā)現(xiàn)及其研究途徑（ TSG存在的證據(jù)） ? 腫瘤的發(fā)生不僅僅涉及顯性癌基因激活，而且還涉及其它隱性基因的功能喪失，這其它基因就是抑癌基因。 逆向發(fā)生腫瘤現(xiàn)象可能是雜種細胞中攜帶抑癌基因丟失。 ? ? 證明抑制基因存在于單個染色體上，并將 TSG 在染色體上定位。視網(wǎng)膜母細胞瘤 ? Rb Gene 是最早發(fā)現(xiàn)的TSG ，證據(jù)來自于對視網(wǎng)膜母細胞瘤的研究。 11 B、 Wilms 瘤 ? 在 Wilms瘤患者中發(fā)現(xiàn) 11p13， WT1 Gene定位于 11p13 區(qū)域， 認為 WT1為 TSG。 12 Ｃ、家族性腺瘤樣息肉 ? 家族性腺瘤樣息肉（ familial adenomatous polyposis－ ＦＡＰ ） ? ＦＡＰ Ｇ ene定位于５ p２１，即 ＡＰＣ基因，轉(zhuǎn)錄本８ .4kb,編碼 2844Aa的蛋白 質(zhì)， 其突變引起家族性腺瘤樣息肉 癌。 13 ④ 雜合性丟失 ? 雜合性丟失（ Loss of heterozygosity, LOH ） ? 應(yīng)用于檢測、鑒定 TSG 。 14 LOH：雜合時某一等位基因片段丟失 15 16 LOH 17 PCR產(chǎn)物序列分析 18 視網(wǎng)膜母細胞瘤的遺傳分析 ＊ 前三種情況（ 2和 3），腫瘤組織中正常等位基因丟失（ A），這稱為雜合性丟失。在腫瘤細胞中 LOH 提示TSG 的存在，在染色體某一區(qū)域 LOH頻率高，可能為 TSG 的侯選位點。其中 RB基因和 P53基因在細胞周期調(diào)控進展中起重要作用，它們的產(chǎn)物在腫瘤細胞中經(jīng)常同時失活。 ? ⑥與發(fā)育和干細胞增殖相關(guān)的信號途徑組分，如 :APC、 Axin等 24 RB Gene產(chǎn)物的功能 RB Gene ↓轉(zhuǎn)錄 mRNA ↓翻譯 110kD (pRb核蛋白 ) ↓調(diào)控 細胞增殖 RB廣泛表達，編碼 110Kda核蛋白 pRB。 25 26 Rb Gene Rb Gene 突變 Cyclin（ CDK， CKI） 磷酸化 pRb蛋白 pRb蛋白 （ 激活） 去磷酸化 （失活） pRb降解（病毒蛋白 EIA/SV40T） E2F MDM2Gene擴增（ Gene產(chǎn)物抑制 pRb 調(diào)節(jié)） G1期 癌基因變化 DNA損傷 S期 C增殖 P53 失 控 Apoptosis 復(fù)制終止 C過度增殖 直至修復(fù) 癌變 27 磷酸化 ? A正常情況 pRb激活 失活 去磷酸化 它的部分作用是調(diào)控一組細胞轉(zhuǎn)錄因子 E2F。 28 ? B、磷酸化是由一套 Cyclin、 CDK激酶、 CKI控制，即控制細胞周期中重要的檢 控點（ checkpoint）。 ? D、某些病毒癌基因蛋白 — EIA、 SV40T抗原，人乳頭了瘤病毒 E7蛋白相結(jié)合，使 pRb降解，或直接使 pRb基因突變功能喪失。 A、停止細胞復(fù)制損傷的 DNA。 C、與細胞死亡有關(guān)，調(diào)節(jié)細胞凋亡。癌的發(fā)生就是這一控制功能的喪失。 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有 30多種 TSG，近年發(fā)現(xiàn)的有 FHIT、PTEN（ MMAC1）等。 ? 研究表明，腫瘤表現(xiàn)遺傳不穩(wěn)定性： 數(shù)目異常 核型異常 結(jié)構(gòu)異常 都和增變基因突變相關(guān)。這些基因編碼一種錯誤改正系統(tǒng) — 檢查 DN