【正文】 最佳方法，通常來自臨床和實驗室的醫(yī)學(xué)實踐，包括患者跟蹤隨訪等。對比試劑在預(yù)期用途、適用人群、樣本類型、檢測方法學(xué)、檢測性能等方面應(yīng)與試驗用體外診斷試劑具有較好的可比性。 。 試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細(xì)說明。 申請人應(yīng)對樣本穩(wěn)定性進行研究，主要包括冷藏和冷凍兩種條件下的有效期驗證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)，每間隔一定的時間段對儲存樣本進行性能分析驗證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。 （六）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。 如申報產(chǎn)品陽性判斷值包含灰區(qū)，應(yīng)明確灰區(qū)的確定依據(jù)，并提供相應(yīng)支持性資料。研究過程中應(yīng)選取適當(dāng)?shù)呐R床樣本，應(yīng)包括經(jīng)確認(rèn)的標(biāo)志物為陽性的樣本及經(jīng)確認(rèn)標(biāo)志物為陰性的樣 本。 （五）陽性判斷值確定資料此類產(chǎn)品臨界值通常采用定標(biāo)液 /對照品檢測結(jié)果經(jīng)特定的計算公式得出，樣本檢測結(jié)果通過與臨界值進行比較以判斷檢測結(jié)果的陰陽性?？刹捎蒙陥螽a(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品同時檢測不少于五套經(jīng)充分確認(rèn)的乙型肝炎患者系列采集樣本，也可采用申報產(chǎn)品檢測不少于五套的商業(yè)化 的血清轉(zhuǎn)換盤。申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的反應(yīng)原理選擇是否進行此項研究。 （ HOOK）效應(yīng)須采用多份高濃度樣本進行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開始檢測，每個梯度的稀釋液重復(fù) 3～ 5 份，對鉤狀效應(yīng)進行合理的驗證。建議采用弱陽性水平樣本對每種干擾物質(zhì)的干擾影響進行檢測。 干擾物質(zhì)應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，針對可能存在的干擾情況進行驗證。病原體種類應(yīng)包括人類 EB病毒（ EBV）、巨細(xì)胞病毒（ CMV）、人類免疫缺陷病毒（ HIV）、乙型肝炎病毒（表面抗原 /抗體、核心抗體）、丙型肝炎病毒（ HCV）等。 用于精密度評價的臨床樣本均應(yīng)至少包含 3 個水平：臨界陽性樣品、中及強陽性樣品，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫?。針對本類產(chǎn)品的精密度評價主要包括以下要求： 對可能影響檢測精密度的主要變量進行驗證，除檢測試劑本身的影響外，還應(yīng)對分析儀、操作者、實驗地 點、檢測批次等要素進行相關(guān)的驗證。 ，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等評價標(biāo)準(zhǔn)作出合理要求。 ， 將試驗用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品等進行對比試驗，評價檢測結(jié)果一致性。 選取至少 3 份高濃度臨床樣本，采用臨床參考方法或國家 /國際標(biāo)準(zhǔn)品對其檢測靶物質(zhì)濃度進行確定，之后將臨床樣本做系列倍比稀釋，將檢測結(jié)果的陽性率在 90%～ 95%（ n≥ 20）的最大稀釋倍數(shù)作為試劑盒的最低檢測限。企業(yè)參考品的檢測應(yīng)符合參考品說明書的要求。各項性能評價應(yīng)符合以下要求。 分析性能評價的實驗方法可以參考國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評估的指導(dǎo)原則進行。 （四）分析性能評估資料申請人應(yīng)提交產(chǎn)品所有性能評價的研究資料，對于每項分析性 能的評價都應(yīng)包括具體研究目的、實驗方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細(xì)資料。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對可用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法進行研究，通過實驗確定最終選擇的用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法。如涉及，申請人應(yīng)提供酶催化底物（發(fā)光或變色）的最適條件研究。 ，如：包被工藝、標(biāo)記工藝（如涉及）、顯色（發(fā)光）系統(tǒng)等研究資料。 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料 ，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。企業(yè)參考品應(yīng)至少包括：陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品、精密度參考品。 表 1 抗原外觀、蛋白濃度、純度、分子量及功能性實驗等 2 抗體外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價及功能性實驗等 3 標(biāo)記用酶酶的純度值（ RZ 值）以及功能性實驗 料選擇、制備、陰陽性確認(rèn)等詳細(xì)研究資料。申請人可根據(jù)產(chǎn)品生產(chǎn)及質(zhì)量控制需求，針對主要原材料制定合理的控制標(biāo)準(zhǔn)。 質(zhì)控品、定標(biāo)液 /對照品，主要原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)除被分析物外，還應(yīng)包含基質(zhì)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，例如基質(zhì)中被分析物的濃度要求、陰陽性要求及生物安全性指標(biāo)（如適用），質(zhì)控品應(yīng)明確賦值方法。 人源或其他生物源性原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)包含生物安全性指標(biāo)。申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品生產(chǎn)需求，制定科學(xué)、合理的主要原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，在制定標(biāo)準(zhǔn)過程中建議遵循以下幾點： 主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括相應(yīng)實驗方法及原材料應(yīng)達(dá)到的客觀評價標(biāo)準(zhǔn)。如為多克隆抗體，應(yīng)明確免疫動物品系及抗體的收集、純化過程； 如為單克隆抗體 ，應(yīng)明確免疫動物品系，雜交瘤細(xì)胞的制備、細(xì)胞的培養(yǎng)及抗體的收集、純化過程。如抗原為天然抗原，應(yīng)明確抗原制備所選病毒毒株、病毒的培養(yǎng)、抗原提取及純化、抗原鑒定等方法及相關(guān)參數(shù)； 如為重組抗原，則應(yīng)寫明目的基因的選擇及來源、基因克隆過程（如特定脫氧核糖核酸（ DNA）分子的體外處理、重組連接、轉(zhuǎn)化和宿主細(xì)胞繁殖等實驗過程）、抗原表達(dá)及抗原純化鑒定等方法及相關(guān)參數(shù)。同時，抗原應(yīng)明確抗原名稱、生物學(xué)來源； 抗體明確抗體名稱、生物學(xué)來源、刺激免疫原名稱及其來源（天然或重組）、克隆號（如為單克隆抗體）等信息。主要原材料的篩選過程應(yīng)有科學(xué)合理的實驗設(shè)計、完整的實驗過程、詳實的 實驗數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析過程，申請人應(yīng)能夠依據(jù)研究過程確定產(chǎn)品的主要原材料。 抗 HBe 檢測試劑：包被用抗 HBe，標(biāo)記用抗 HBe， HBeAg，反應(yīng)體系中各種信號放大、顯示系統(tǒng)中涉及的生物活性物質(zhì)，試劑盒中包含的定標(biāo)液 /對照品（如涉及）、質(zhì)控品（如涉及）等。綜述資料的撰寫應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021年第 44 號）的相關(guān)要求。 二、注冊申報資料要求（一）綜述資料綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價以及其他等內(nèi)容。目前該標(biāo)志物定量檢測的臨床意義尚不明確。該指標(biāo)定量檢測可用于抗病毒療效的監(jiān)測等。但是，臨床上存在病毒復(fù)制活躍的患者血清中 HBeAg 為陰性的情況，如： HBV 基因組前 C 區(qū) 1896 位堿基的終止密碼變異，可導(dǎo)致HBeAg 陰性。 血清 HBeAg 與 HBV 復(fù)制及疾病傳染性相關(guān)， HBV 感染患者的血清中存在 HBeAg 是病毒活躍復(fù)制的指標(biāo)。 HBeAg 是從病毒 C 基因的第一個起始密碼子開始翻譯產(chǎn)生的包含PreC 及 C 序列的蛋白，該蛋白經(jīng)細(xì)胞內(nèi)蛋白酶切除其 N 端 19 個氨基酸及 C 端 34 個氨基酸后成為可分泌的 e 抗原。 HBV 具有三個抗原系統(tǒng)，如：乙型肝炎病毒表面抗原（ HBsAg）與乙型肝炎病毒表面抗體（抗 HBs）、乙型肝炎病毒 e 抗原（ HBeAg）與乙型肝炎病毒 e 抗體（抗 HBe）、乙型肝炎病毒核心抗體（抗 HBc）及抗 HBcIgM。據(jù)世界衛(wèi)生組織報道，全球約 20 億人曾感染 HBV，其中 億人為慢性 HBV 感染者，每年約有 65萬人死于 HBV感染所致的肝功能衰竭、肝硬化和肝細(xì)胞癌（ HCC）。 HBV 主要經(jīng)血（如不安全注射等）、母嬰及性接觸傳播。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法 規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。 本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。乙型肝炎病毒 e抗原、 e抗體檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（合集） 第一篇：乙型肝炎病毒 e 抗原、 e 抗體檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 附件 2 乙型肝炎病毒 e 抗原、 e 抗體檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對乙型肝炎病毒 e 抗原、 e 抗體檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。 本指導(dǎo)原則是針對乙型肝炎病毒 e 抗原、 e 抗體檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細(xì)化。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。 一、適用范圍（一）背景簡介乙型肝炎病毒（ hepatitisBvirus，HBV）屬嗜肝 DNA 病毒科，是乙型病毒性肝炎的病原體。 HBV 感染呈世界性流行，但不同地區(qū) HBV 感染的流行強度差異很大。 通過免疫學(xué)方法檢 測 HBV 標(biāo)志物是臨床最常用的 HBV 感染的病原學(xué)診斷方法。 HBV 抗原與抗體的血清學(xué)標(biāo)志物與臨床關(guān)系復(fù)雜，必須對幾項標(biāo)志物綜合分析，方有助于臨床診療。 HBeAg 為可溶性蛋白質(zhì)，產(chǎn)生后分泌入血，在患者癥狀出現(xiàn)后大約 1 周出現(xiàn)，通常在幾周后消失，但在 HBV慢性感染者體內(nèi)可能持續(xù)存在。在 HBsAg 陽性人群中， HBeAg 的消失以及抗 HBe 的出現(xiàn)是血清學(xué)轉(zhuǎn)換的標(biāo)志，表示病毒復(fù)制活躍程度的下降。 （二）本指導(dǎo)原則適用范圍 、化學(xué)發(fā)光法、時間分辨免疫熒光法等免疫學(xué)方法，對來源于血清或血漿等人體樣本中的 HBeAg、抗 HBe 進行體外檢測，其臨床預(yù)期用途如下： 適用于：急性及慢性乙型肝炎病毒感染的輔助診斷； 慢性乙型肝炎病毒感染者 HBeAg 陽性與陰性人群區(qū)分； 慢性乙型肝炎患者 HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換的判定。 抗 HBe 適用于：急性及慢性乙型肝炎病毒感染的輔助診斷及慢 性乙型肝炎患者 HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換的判定。 HBeAg、抗 HBe 的定性檢測試劑，關(guān)于 HBeAg的定量檢測可參考本指南。其中，與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥應(yīng)重點描述申報產(chǎn)品臨床預(yù)期用途，包括適用人群、適應(yīng)癥及臨床使用環(huán)境； 產(chǎn)品描述應(yīng)明確申報產(chǎn)品主要組成成分及檢測原理； 同類 產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況，應(yīng)著重從預(yù)期用途、產(chǎn)品性能等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。 （二）主要原材料研究資料 品主要原材料是指影響檢測反應(yīng)的靈敏度與特異性的生物活性物質(zhì)，本指導(dǎo)原則涉及產(chǎn)品的主要原材料如下： 檢測試劑：包被用抗 HBe，標(biāo)記用抗 HBe，反應(yīng)體系中各種信號放大、顯示系統(tǒng)中涉及的生物活性物質(zhì)，試劑盒中包含的定標(biāo)液 /對照品（如涉及）、質(zhì)控品（如涉及）等。 研究資料。 如主要原材料為外購，應(yīng)確定供應(yīng)商名稱，供應(yīng)商應(yīng)為原材料的生產(chǎn)商，供應(yīng)商應(yīng)固定，不得隨意更換。 如主要原材料為申請人自制，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)明確原材料的制備原理，描述制備過程。針對主要原材料抗體，應(yīng)明確免疫刺激原的名稱及來源。 企業(yè)對主要原材料的質(zhì)量控制，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)依據(jù)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)對原材料進行檢驗，檢驗合格方可用于生產(chǎn)。 主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)至少包括原材料的功能性指標(biāo)要求，功能性指標(biāo)可 以為功能性實驗指標(biāo)或其他體現(xiàn)原材料相應(yīng)生物活性的指標(biāo)。 對于涉及標(biāo)記的主要原材料，如外購方提供的為已標(biāo)記好的原材料，則原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)除了對原材料本身的質(zhì)量控制外，還應(yīng)依據(jù)標(biāo)記物特性，針對標(biāo)記物制定相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。 本指導(dǎo)原則涉及的主要原材料常見的質(zhì)量控制指標(biāo)見表 1。申請人需在申報資料中提供依據(jù)主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)對原材料進行質(zhì)檢的資料，如主要原材料為外購，還需提供主要原材料供應(yīng)商的出廠檢測報告。 企業(yè)參考品的基質(zhì)建議與申報產(chǎn)品適用的樣本類型一致。參考品設(shè)置建議參考國家參考品，陽性參考品應(yīng)著重考慮抗原濃度 /抗體滴度要求，陰性參考品則 主要考慮對產(chǎn)品分析特異性（交叉反應(yīng)）的驗證情況。 ， HBeAg 檢測試劑一般采用雙抗體夾心法，抗 HBe檢測試劑一般為競爭法。 ：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過實驗確定上述條件的最 佳組合。 ：申請人應(yīng)考慮樣品加樣方式、加樣量對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，通過實驗確定最佳的加樣方式及加樣量。 。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等。對于此類產(chǎn)品，性能評估中所用樣品（除非特別說明）可參考上述企業(yè)參考品的制備要求。 /陽性參考品符合率申請人應(yīng)考察申報產(chǎn)品