【正文】 或液泡，和（4）自噬人體分解和回收利用。這被認(rèn)為是細(xì)胞質(zhì)組成部分的一般營(yíng)業(yè)額的主要誘導(dǎo)途徑。然而，這些細(xì)胞確實(shí)需要從頭基因表達(dá)在增加泛素基因，類似的細(xì)胞凋亡（Ohsumi的表達(dá)，2001年Gozuacik和泡菜，2004年）。的分子機(jī)制已被廣泛研究酵母和哺乳動(dòng)物同源繼續(xù)闡明（Ohsumi，2001年，黃和Klionsky，2002年）。自體吞噬的機(jī)制和形態(tài)進(jìn)化與生物之間的強(qiáng)烈的相似之處保守的，多樣的動(dòng)物一樣，植物和酵母。2002年）。作為同義詞使用的其它術(shù)語“macroautophagy”和“自噬性Ⅱ型細(xì)胞死亡”（Klionsky和電子病歷，2000年）。Gozuacik和泡菜，2004年。Turmaine等，2000）?！彪m然這種細(xì)胞死亡的形式不應(yīng)對(duì)Caspase抑制劑或BCL XL，它是由一個(gè)Caspase 9活性APAF 1獨(dú)立的另一種形式。看來，caspase依賴的，caspase獨(dú)立的神經(jīng)細(xì)胞死亡的機(jī)制可能依賴于大腦區(qū)域的細(xì)胞類型，和年齡。奧本海姆和他的同事（2001）表明，編程發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家哺乳動(dòng)物的神經(jīng)元細(xì)胞死亡，甚至后的凋亡基因缺失。在實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）和核酸內(nèi)切酶摹促進(jìn)這種類型的細(xì)胞死亡，但是，SMAC / DIABLO和HtrA2/Omi可能也有助于（Ravagnan等。caspase獨(dú)立的神經(jīng)細(xì)胞死亡的機(jī)制也已確定。這些形式細(xì)胞死亡有壞死和凋亡的某些形態(tài)特征已鑒于“aponecrosis”（Formigli等，2000）?！币虼?，有一些阻力的長(zhǎng)期獨(dú)家使用“程序性細(xì)胞死亡”的具體描述凋亡。而且有證據(jù)表明，某種形式的調(diào)制細(xì)胞死亡，可能會(huì)導(dǎo)致另一個(gè)。其他形式的程序性細(xì)胞死亡有證據(jù)表明其他形式的非凋亡程序性細(xì)胞死亡，也應(yīng)考慮，因?yàn)樗鼈兛赡軙?huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡程序進(jìn)入新的見解，并揭示其潛在的獨(dú)特作用，在發(fā)展，動(dòng)態(tài)平衡，腫瘤和變性。然而，熒光蛋白標(biāo)記，可能會(huì)改變的天然蛋白質(zhì)與其它蛋白質(zhì)的相互作用。然而，細(xì)胞色素c變得不穩(wěn)定，一旦釋放進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)（Goldstein等人，2000年）。然而，這些染料沒有解決細(xì)胞死亡的機(jī)制應(yīng)使用與其他細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法，如一個(gè)凋亡一起檢測(cè)。在細(xì)胞凋亡的MOM不保持電化學(xué)梯度和陽離子染料擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中，它發(fā)出的熒光是從聚合不同形式。對(duì)面的電化學(xué)梯度細(xì)胞凋亡過程中線粒體外膜（MOM）的崩潰，讓與檢測(cè)熒光陽離子染料（Poot和皮爾斯，1999年）。線粒體通透性轉(zhuǎn)換（MPT），內(nèi)線粒體膜的去極化，鈣+通量，線粒體氧化還原狀態(tài)，都可以監(jiān)控與活性氧方法。激光掃描共聚焦顯微鏡（LSCM）創(chuàng)建亞微米薄光片，通過活細(xì)胞，可用于監(jiān)測(cè)幾個(gè)線粒體事件隨著時(shí)間的推移（Bedner等人，1999年。這種染料在加工過程中是穩(wěn)定的，穿透厚厚的組織，是耐淬火。 LYSO 追蹤紅是另一種染料，在以類似的方式行為。雖然所有這些染料的快速和價(jià)格便宜，他們有一定的弊端。由于這些染料嗜酸性，他們都集中在高溶酶體的地區(qū)，吞噬活動(dòng)。這種染料吸收的生物活性，細(xì)胞培養(yǎng)工程，沒有標(biāo)簽壞死細(xì)胞，它具有靈敏度高的水平（可以檢測(cè)出單個(gè)細(xì)胞凋亡）。磷脂酰轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外，也將允許某些染料運(yùn)輸?shù)揭粋€(gè)單向的方式細(xì)胞。由于膜的損失誠(chéng)信是一種壞死性細(xì)胞死亡的pathognomonic功能，壞死細(xì)胞染色與特定膜impermeant如核酸染料碘化丙啶和臺(tái)盼藍(lán)。缺點(diǎn)是標(biāo)記以及壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜。一旦細(xì)胞凋亡與FITC標(biāo)記的Annexin V的約束，他們可以可視化熒光顯微鏡。芯片測(cè)試應(yīng)結(jié)合不同的方法，以確認(rèn)細(xì)胞凋亡。一個(gè)實(shí)時(shí)PCR儀用于表達(dá)譜。這種方法使用一個(gè)96孔板和低至5毫微克的總RNA?；虻木垲惙治觯梢越沂静煌臅r(shí)空表達(dá)模式轉(zhuǎn)錄激活和/或鎮(zhèn)壓。在細(xì)胞或組織，可以進(jìn)行基因表達(dá)的比較測(cè)試樣品和對(duì)照之間。這些PCR芯片設(shè)計(jì)，以確定基因的表達(dá)譜編碼的主要配體，受體，細(xì)胞內(nèi)調(diào)制器，和轉(zhuǎn)錄因子的參與程序性細(xì)胞死亡的調(diào)控。表達(dá)。此外，還有巨大的重疊成員基板喜好caspase家族，影響了檢測(cè)的特異性。主要缺點(diǎn)是，樣品的完整性被破壞，從而消除了本地化的可能性內(nèi)組織或確定類型的細(xì)胞發(fā)生凋亡的細(xì)胞凋亡事件。該技術(shù)允許個(gè)人發(fā)起人或執(zhí)行caspases的選擇。標(biāo)記底物。凋亡檢測(cè)方法需要以酶釋放到細(xì)胞裂解液。 caspase活化中可檢出多種方式包括免疫印跡，免疫沉淀和免疫組化（圖5B）。2002年）。也有免疫組織化學(xué)檢測(cè)，可以檢測(cè)如PARP的和已知的細(xì)胞裂解基板修飾，如磷酸化的組蛋白（圖5A）（Love等，1999?；谶@些原因，應(yīng)該與其他檢測(cè)配對(duì)。缺點(diǎn)是成本和未知參數(shù)多少DNA鏈斷裂用這種方法檢測(cè)的必要。此試劑盒也非常敏感，可以探測(cè)一個(gè)單細(xì)胞通過熒光顯微鏡或盡可能少?100個(gè)細(xì)胞，通過流式細(xì)胞儀。允許的dUTP可以被貼上各種探頭通過光鏡，熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀（圖4）的檢測(cè)。末端轉(zhuǎn)移酶是用來添加標(biāo)記的UTP339。此外，DNA的碎片可能會(huì)發(fā)生在使其難以產(chǎn)生一個(gè)核小體的階梯準(zhǔn)備和壞死細(xì)胞也能產(chǎn)生的DNA片段。有這種檢測(cè)等弊端。這種方法很容易執(zhí)行，靈敏度為1 106個(gè)細(xì)胞（即，檢測(cè)水平，是數(shù)百萬細(xì)胞），并負(fù)責(zé)組織和每個(gè)組織的細(xì)胞凋亡與細(xì)胞培養(yǎng)有用質(zhì)量或體積。這個(gè)實(shí)驗(yàn)涉及從裂解細(xì)胞勻漿提取DNA其次是瓊脂糖凝膠電泳。其他缺點(diǎn)包括窗體頂端在檢測(cè)凋亡細(xì)胞由于其短暫性的困難和無法檢測(cè)在最初階段的細(xì)胞凋亡。吞噬凋亡細(xì)胞與也要靠TEM。因?yàn)榧?xì)胞凋亡的進(jìn)展,就會(huì)失去細(xì)胞間的粘連,將獨(dú)立于鄰近的細(xì)胞。(5)大清晰液泡。(3)完整的細(xì)胞膜均勻細(xì)胞分化晚階段。這些特征:(1)electrondense核(一定是在早期)。瞬變電磁法(TEM)被認(rèn)為是確定凋亡的黃金標(biāo)準(zhǔn)。此外,在處理過程中喪失antigenicity這樣immunohistological或酶檢測(cè)不能履行在同一組織。組織和細(xì)胞的細(xì)節(jié)都保存在該技術(shù)調(diào)查地區(qū)的大型組織的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)中。光學(xué)顯微鏡下，藍(lán)色或亞甲藍(lán)染色可作為強(qiáng)烈的細(xì)胞凋亡評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。在某些組織細(xì)胞凋亡可能發(fā)生之前，phagocytized可觀,組織學(xué)明顯。因?yàn)樾螒B(tài)細(xì)胞凋亡是快速的。盡管一凋亡細(xì)胞能被檢測(cè)到。檢測(cè)細(xì)胞凋亡的整個(gè)坐騎6。檢測(cè),貼近還基質(zhì)、監(jiān)管機(jī)構(gòu)和抑制劑4。Cytomorphological改變2?；诩?xì)胞凋亡測(cè)定等方法,可分為六大組織和一個(gè)子集可,每組進(jìn)行了簡(jiǎn)要論述。詳細(xì)描述所有的檢測(cè)方法和顆粒細(xì)胞凋亡是超越這篇文章的范圍。在這種情況下, 大部分地區(qū)快速調(diào)查的能力是很有用的。因此, 檢測(cè)做得太早或是太晚會(huì)導(dǎo)致一些錯(cuò)誤的負(fù)面的消息。在任何一個(gè)系統(tǒng)中凋亡細(xì)胞都會(huì)死亡，且消失相對(duì)快速。某些蛋白質(zhì),如caspases,只有在突變時(shí)才會(huì)表達(dá)。因此,在研究細(xì)胞凋亡的機(jī)制的方法的選擇時(shí)，在細(xì)胞、組織或器官,理解優(yōu)缺點(diǎn)分析是至關(guān)重要的?？梢越邮芤粋€(gè)應(yīng)用程序,對(duì)于其它程序則不適用(Watanabe et al., 2002。多路復(fù)用,就是能夠聚集超過一個(gè)數(shù)據(jù)集的同一樣品,另一個(gè)方法是,使細(xì)胞凋亡檢測(cè)變得越來越流行。一個(gè)分析可能發(fā)現(xiàn)早(啟動(dòng))凋亡的事件，而不同的目標(biāo)檢測(cè)或許可以發(fā)現(xiàn)稍后(執(zhí)行)事件。因?yàn)榇舜未?lián)反應(yīng)的激活劑,影響因素和監(jiān)管機(jī)構(gòu)的能夠被證明,可以設(shè)計(jì)大數(shù)目的細(xì)胞凋亡的檢測(cè)來檢測(cè)細(xì)胞凋亡。隨著細(xì)胞凋亡的分子和生化復(fù)雜性的繼續(xù)發(fā)展,新的治療策略也將繼續(xù)發(fā)展。輸注胰島素樣生長(zhǎng)factor1(IGF1),促進(jìn)PKB /蛋白激酶b等信號(hào)的傳導(dǎo),促進(jìn)細(xì)胞的存活,結(jié)果對(duì)動(dòng)物性的心肌缺血是有益的(Fujio et al., 2000).其他的關(guān)于轉(zhuǎn)基因模型和全球腦缺血、心肌缺血的研究表明這種抑制BAX的表達(dá)和（或）功能可以防止細(xì)胞色素c的釋放,抑制線粒體膜電位的減少,保護(hù)細(xì)胞與凋亡(Hochhauser et al., 2003。ICE抑制劑已經(jīng)發(fā)展到用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和其他炎癥性疾病，通過減少白細(xì)胞介素1β(Le and Abbenante, 2005.)。 知道半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活性抑制劑的具體作用機(jī)制或許可以帶來益處。 到目前為止,IAP蛋白家族成員已經(jīng)開始用于治療中風(fēng)、脊髓損傷、多發(fā)性硬化癥，還有癌癥。八種人類的IAP蛋白質(zhì)現(xiàn)在已經(jīng)被確認(rèn)，雖然 XIAP（哺乳動(dòng)物凋亡蛋白抑制劑)和生存素已被人們所熟知 (Silke et al.,2002。一小單子有潛力阻止凋亡的方法，包括刺激IAP(凋亡蛋白抑制劑)蛋白家族、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶抑制蛋白, 抑制PARP(聚[ADPribose]聚合),刺激PKB /蛋白激酶B (蛋白激酶B)途徑以及抑制Bcl2蛋白質(zhì)。作者的手稿NIHPA NIHPA作者NIHPA手稿。我們對(duì)于進(jìn)化的理解,新的目標(biāo)的鑒定和利用（病理學(xué)雜志。雖然細(xì)胞凋亡的程度都是徒勞的。有一個(gè)猜想是, 缺血所產(chǎn)生的傷害能啟動(dòng)細(xì)胞凋亡，但是如果缺血發(fā)生時(shí)間太長(zhǎng),就會(huì)發(fā)生壞死。雖然壞死發(fā)生時(shí),過度表達(dá)的BAX在缺血心肌組織中被發(fā)現(xiàn)。過度凋亡也被認(rèn)為在廣泛的局部缺血傷害中扮演著重要的角色。通過氧化應(yīng)激或引發(fā)神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)的Fas配體的表達(dá)方式增加，β淀粉樣蛋白被認(rèn)為可以減少細(xì)胞凋亡。這種狀況被認(rèn)為和β淀粉樣蛋白在細(xì)胞外的沉積有關(guān)，稱為β淀粉樣蛋白斑塊。阿爾茨海默氏癥是一種神經(jīng)退化性的狀態(tài),被認(rèn)為是由于某種特定蛋白質(zhì)的突變導(dǎo)致,如APP(淀粉樣前體蛋白)和Presenilins(早老蛋白) 。該病毒感染CD4 + T細(xì)胞并綁定到CD4受體。 自身免疫性缺陷綜合癥(艾滋病)是自身免疫性疾病的一個(gè)例子,是由于感染了人類免疫缺陷病毒(HIV)所致。1A型結(jié)果來自Fas受體死亡區(qū)域的突變,1B型結(jié)果來自Fas配合基的突變，2型結(jié)果來自caspase10的突變，因而導(dǎo)致其活性降低。一些常見的此類疾病,包括免疫介導(dǎo)性的溶血性貧血，免疫介導(dǎo)血小板減少、自身免疫性中性粒細(xì)胞減少癥。這發(fā)生在有autoaggressive T細(xì)胞的凋亡不足的地方,導(dǎo)致多種自身免疫性疾病。除了調(diào)控細(xì)胞的凋亡,這條生化途徑還會(huì)調(diào)節(jié)其他細(xì)胞程序或過程，比如細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)及細(xì)胞骨架重排(Vivanco and Sawyers, 2002)。其他的細(xì)胞信號(hào)通路也可以參與在腫瘤的發(fā)展過程中。（11到13頁的）如前所述,p53作為一個(gè)DNA損傷檢查點(diǎn)分子，如果信號(hào)傳導(dǎo)停滯，不可以傳導(dǎo)至DNA損傷修復(fù)的檢查點(diǎn)，則細(xì)胞就會(huì)因?yàn)閾p無法被修復(fù)而凋亡。僅僅只遺傳了一種功能復(fù)制基因的人很有可能患李佛美尼癥候群，其特征是腫瘤發(fā)生在早期成人期。各種細(xì)胞信號(hào)的傳導(dǎo)途徑的改變可以導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的失調(diào)并且致癌，P53腫瘤抑制基因是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，它可以調(diào)節(jié)細(xì)胞周期并且是人類腫瘤發(fā)生最廣泛的突變基因，P53的重要作用是顯而易見的，事實(shí)上，它是突變超過50%的所有人類癌癥基因，P53可以激活DNA修復(fù)蛋白，當(dāng)DNA遭到破壞時(shí)，可以維持細(xì)胞周期在G1/S作為DNA損傷的識(shí)別，在DNA出現(xiàn)不可逆轉(zhuǎn)損害的時(shí)候可以觸發(fā)凋亡，當(dāng)系統(tǒng)出現(xiàn)在錯(cuò)誤的時(shí)候腫瘤可發(fā)生。分泌高效的可溶性的FAS（脂肪酸合成酶），使之與FAS配合基隔離，或者在腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)FAS配合基。為了逃避免疫摧毀，一腫瘤細(xì)胞通過T細(xì)胞產(chǎn)生的乙型跨膜糖蛋白來減少死亡受體通路的應(yīng)答。另外一種抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡的方式包括逃避免疫監(jiān)視。癌癥是一個(gè)很好的例子，正常細(xì)胞的調(diào)控機(jī)制不正常，要么是因?yàn)榧?xì)胞過度增生，要么細(xì)胞急劇減少，事實(shí)上，腫瘤期間抑制凋亡被認(rèn)為在癌癥的發(fā)展過程中發(fā)揮了關(guān)鍵的作用，有多種分子機(jī)制是通過用腫瘤細(xì)胞來抑制細(xì)胞凋亡的。 病理細(xì)胞凋亡細(xì)胞死亡的異常是疾病發(fā)生的重要原因，如癌癥、自身免疫性內(nèi)科、艾滋病、缺血綜合癥,神經(jīng)衰退性疾病如帕金森氏病、阿爾茨海默病,杭丁頓氏癥,和肌萎縮側(cè)索硬化。很明顯,由于凋亡太少或太多的細(xì)胞死亡都可以導(dǎo)致疾病的發(fā)生，所以凋亡機(jī)制必須嚴(yán)格管制。除此之外，隨著器官的生長(zhǎng)，有些細(xì)胞開始迅速惡化并通過細(xì)胞凋亡消除。傷口愈合時(shí)期細(xì)胞凋亡異常能導(dǎo)致病理性的愈合，如過度的纖維化，形成瘢痕組織，在成熟中央淋巴器官 (骨髓和胸腺)或在周圍組織中，細(xì)胞凋亡在活化的或者自動(dòng)侵略性的免疫細(xì)胞方面是必要的。例如，神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)都是由大量的細(xì)胞構(gòu)成的，這些初期的大量細(xì)胞將會(huì)填補(bǔ)那些不能進(jìn)行突觸連接的或者不能產(chǎn)生特異性抗原的細(xì)胞。這一數(shù)字會(huì)大大增加,當(dāng)?shù)蛲霭l(fā)生在生長(zhǎng)，老化，疾病的時(shí)期。但與有規(guī)律的各種細(xì)胞群的有絲分裂和增殖恰恰相反。表4列出了在執(zhí)行途徑中主要的蛋白質(zhì)的縮寫和常用術(shù)語。 凋亡細(xì)胞外部的小葉的phosphotidylserine出現(xiàn)后能促進(jìn)噬菌體對(duì)Noninflammatory的吞噬識(shí)別,以及早期吞噬和處理。雖然phosphatidylserine向外移位的機(jī)理在細(xì)胞凋亡中還不明了,但它與活化的氨磷脂轉(zhuǎn)化酶的損失和各階段磷脂質(zhì)非特異觸發(fā)有關(guān)。細(xì)胞凋亡的最終結(jié)局是被吞噬細(xì)胞吞噬。Caspase3會(huì)裂解gelsolin及其碎片,反過來通過鈣獨(dú)立的方式裂解肌動(dòng)蛋白碎片。Gelsolin（凝容膠蛋白）,肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白,已被確定為一種關(guān)鍵的caspase3基片的激活物。 在細(xì)胞凋亡中、活性caspase3調(diào)節(jié)ICAD釋放CAD， 然后使得染色體DNA溶解減少，并且使得核染色質(zhì)濃縮。 被激活，尤其Caspase3能特意激活endonuclease（核酸內(nèi)切酶） CAD（輔助）。Caspase（半胱天冬酶）3,caspase6,caspase7的功能可以形象的稱為效應(yīng)器或者“劊子手 ”凋亡蛋白酶，裂解成很多不盡相同的物質(zhì)，包括cytokeratins（細(xì)胞角蛋白） PARP（二磷酸腺苷多聚酶）,原生質(zhì)膜細(xì)胞骨架蛋白時(shí),等離子體膜，細(xì)胞核蛋白NuMA,生化改變?cè)诩?xì)胞凋亡中看到。正是半胱氨酸酶的激活使得這階段細(xì)胞凋亡的發(fā)生。執(zhí)行途徑外在和內(nèi)在的途徑都在執(zhí)行階段結(jié)束。Myc癌基因，也曾報(bào)道可能通過對(duì)p53的依賴和獨(dú)立的機(jī)制凋亡共同作用凋亡。研究表明這種蛋白質(zhì)可以定位到線粒體還可以與抗凋亡Bcl2家族互動(dòng)。細(xì)胞色度c的釋放和減少在線粒體膜電位。Puma在p53（腫瘤抑制蛋白）導(dǎo)細(xì)胞凋亡中起重要作用。表達(dá)這兩種蛋白質(zhì)之間的相互調(diào)節(jié)。一個(gè)額外的蛋白質(zhì)：“埃文”似乎結(jié)合了BclX1和Apaf1，從而防止procaspase9的激活。當(dāng)沒有被bad隔離，Bc1X1和Bc12都會(huì)抑制細(xì)胞色素c從線粒體釋放，雖然這個(gè)機(jī)制還不明確。在蛋白質(zhì)，但一旦沒被磷酸化，它將作用線粒體釋放細(xì)胞色素C。Bcl的絲氨酸磷酸化與1433是一個(gè)多功能磷酸絲氨酸結(jié)合分子的家族成員。幾個(gè)可能的機(jī)制進(jìn)行了研究，但沒有一個(gè)被確切闡明，線粒體損傷誘導(dǎo)介導(dǎo)的凋亡系統(tǒng)被caspase8暴露。 這些蛋白質(zhì)有特殊意義,因?yàn)樗麄兛梢源_定這些細(xì)胞凋亡或中止犯這個(gè)過程。到目前為止,共有25個(gè)基因已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)的Bcl2家族。但Bcl2的作用機(jī)制還沒被完全闡明。 控制和調(diào)節(jié)線粒體地阿王是通過Bcl2家族蛋白質(zhì)。CAD隨后被轉(zhuǎn)到細(xì)胞核中的Caspase3裂解的地方。核算內(nèi)切酶G也轉(zhuǎn)到細(xì)胞核中，他能分解染色質(zhì)使DNA成為碎片。AIF轉(zhuǎn)到細(xì)胞核中引起DNA費(fèi)解為50300kb的碎片，還有核凝聚。細(xì)胞色素c的束縛、激活A(yù)paf1以及procaspase9形成以一個(gè)凋亡復(fù)合體。所有這些襲擊引起的變化，其結(jié)果是線粒體內(nèi)膜內(nèi)通過轉(zhuǎn)換孔的開放，線粒體凄厲的損失和兩大類前凋亡小體的釋放這兩大類物質(zhì)是由從膜間隙蛋白質(zhì)空間進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)的第一組由細(xì)胞色素c、Smac /暗黑破壞神、和絲氨酸蛋白酶HtrA2 /尾身。換句話說,有撤軍的損失、凋亡抑制因素,和隨后的激活細(xì)胞凋亡的機(jī)制。 Intrinsic Pathway 刺激凋亡內(nèi)在信號(hào)傳達(dá)途徑包括nonreceptormediated，能夠產(chǎn)生一種內(nèi)部信