第六章基因的轉(zhuǎn)移技術(shù)-文庫吧資料
2024-08-14 13:19本頁面
【正文】 單擊主菜單中的 “ 收藏 ” 瀏覽 “ 錄入標(biāo)簽 ” 瀏覽到網(wǎng)址 單擊網(wǎng)址 瀏覽 啟動計算機 雙擊 “ Inter Explorer” 單擊主菜單中的 “ 文件 ” 。 4 4 39。2 2 39。和 339。B39。B39。退火 Pol IdNT P轉(zhuǎn)化大腸桿菌ABA39。 C39。C39。 A39。突變體先人工合成一段低聚核苷酸 ,使其中一些已知核苷酸缺失 ,然后使之與相應(yīng) ssDNA退火 ,用 DNA聚合酶合成另一條鏈 ,轉(zhuǎn)化大腸桿菌 ,分離缺失體 低聚核苷酸缺失 插入突變C CAAA ACC CA39。C39。C39。ACA39。C39。A39。539。539。 539。339。突起端 。R E 1T4D NA連 接酶E x o + S1R E 1 T4D NA連 接酶（1 ）R E1（2 ）S 1 DNA的單向缺失還可以利用兩末端不同結(jié)構(gòu) : (1) 539。 5 39。 2. 真核生物系統(tǒng) 1) 哺乳動物細(xì)胞 2) 兩棲動物卵母細(xì)胞 第二節(jié) 外源基因的表達 一 . 當(dāng)外源基因引入某宿主細(xì)胞表達時，應(yīng)考慮以下各種因素： 1. 外源基因的啟動子順序能否在宿主細(xì)胞起作用（利用表達載體） 2. 對轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物能否進行加工修飾（利用 cDNA） 3. 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的穩(wěn)定性 4. 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的核糖體識別順序能否為宿主細(xì)胞的翻譯系統(tǒng)所識別（利用表達載體的基因融合技術(shù)） 5. 密碼子的使用頻率（選用適當(dāng)宿主細(xì)胞） 6. 翻譯產(chǎn)物的后修飾 選用適當(dāng)宿主細(xì)胞 7. 翻譯產(chǎn)物的穩(wěn)定性 8. 外源基因產(chǎn)物對宿主是否有害 9. 外源基因產(chǎn)物產(chǎn)量（選用不同拷貝數(shù)的載體） 10. 外源基因的最終產(chǎn)物是否具有生物活性（選用適當(dāng)宿主細(xì)胞） 11. 外源基因的穩(wěn)定性（改變宿主細(xì)胞遺傳特性，如將外源基因插入染色體） 12. 對于制備大量外源基因產(chǎn)物，還須考慮到表達產(chǎn)物與其它細(xì)胞成分的分離方法 二 . 表達系統(tǒng) 1. 大腸桿菌系統(tǒng) : 融合表達和直接表達 小于 80AAs的多肽可用融合表達系統(tǒng) , 分子量在 100300AAs 且無過多半胱氨酸的多肽可用直接表達 pET(plasmid for expression by T7 RNA polymerase), pTrcHis系列載體 2. 酵母表達系統(tǒng) : 釀酒酵母 和 巴氏畢赤酵母(Pichia pastoris)系統(tǒng) 直接表達和分泌表達 3. 昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng) 直接表達和分泌表達 4. 哺乳動物細(xì)胞表達系統(tǒng) 瞬時表達和穩(wěn)定表達 : 非微生物來源的大于 500AAs的分泌蛋白質(zhì)和表面受體蛋白 第八章 基 因 突 變 第一節(jié) 基因的體外定向突變 一 .缺失突變 1. 限制酶片段缺失 A:11233R E 1R E 1R E 1R E
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