【正文】 用作定量測定。 蛋白質含量高時，選擇靠近 500nm波長測定；含量低時，選擇靠近 750nm波長測定。（也可用酪蛋白，但需要經凱氏定氮法測定其蛋白質含量） 51 ? 樣品的測定 取 1ml樣品液（含蛋白質 15～ 500ug），加入 5ml試劑甲，混勻于室溫放置 10min，再加入試劑乙 ，立即混勻，于室溫反應 30min。兩種顯色反應可以疊加，所以此法具有很高的敏感性。 49 酚試劑法 (lowry法 ) ? 原理 福林 酚試劑由兩種試劑組成，其中的堿性銅試劑能與蛋白質中的肽鍵發(fā)生雙縮脲反應生成蛋白質 銅復合物。 ，快速，但測定不是十分精確。 3. 注意： 1～ 10mg蛋白質。以酪蛋白含量為橫坐標，光吸收率為縱坐標，繪制標準曲線。 標準曲線的制作 于試管中分別加入 0、 、 、 、 、％酪蛋白溶液，用水補足至 1ml。 47 ? 實驗操作 雙縮脲試劑的配制 配置的溶液若出現(xiàn)黑點或紅色沉淀時，則不能再用。 45 ? 計算 樣品總氮含量（ mg）＝（ AB） *C*14*100/20 式中， A—— 樣品滴定時消耗的標準鹽酸體積， ml B—— 空白滴定時消耗的標準鹽酸體積， ml C—— 標準鹽酸的當量濃度 14—— 氮的相對分子質量 20—— 用于蒸餾的稀釋消化液體積， ml 100—— 稀釋消耗液體積， ml 樣品粗蛋白含量（ mg）＝樣品總氮含量 * 46 (Biuret法 ) ? 原理 蛋白質含有兩個以上的肽鍵，具有雙縮脲反應，即蛋白質在堿性溶液中與二價銅離子結合，生成紫紅色絡合物?？瞻自囼灠聪嗤僮鬟M行。三角瓶中硼酸－指示劑混合液吸收蒸出來的氨，由紫紅色變?yōu)榫G色。 ? 加熱水蒸氣發(fā)生器，沸騰后。 ? 吸取 20ml稀釋消化液，置于蒸餾裝置反應室中，加 10ml30％氫氧化鈉溶液，將玻璃塞塞緊，漏斗中加少許蒸餾水作為水封。將凱氏燒瓶內的消化液冷卻后，全部轉入 100ml容量瓶中。 另取凱氏燒瓶一個，不加樣品，其他操作相同，作空白對照。電爐加熱，在通風櫥中消化，瓶口加一小漏斗，先以文火加熱避免泡沫飛濺，不能讓泡沫上升到瓶頸，待泡沫停止發(fā)生后，加強火保持瓶內液體沸騰。 42 ? 消化 取一定量樣品，于 50ml干燥的凱氏燒瓶內。（甲基橙為指示劑，黃色為終點） 38 常量凱氏定氮裝置 39 微量凱氏定氮裝置簡圖 40 微量凱氏定氮裝置 41 ? 實驗操作 樣品處理 固體樣品應在 105℃ 干燥至恒重。 滴定時以甲基紅 溴甲酚綠混合液為指示劑，滴至溶液變?yōu)樽霞t色即為終點。氨由硼酸吸收生成硼酸銨以標準酸滴定。 33 第一節(jié) 糖類的化學檢測 酶水解法 （一） 原理： 含淀粉 糊精、麥芽糖 葡萄糖 樣品 酸解 液化 糖化 酸解 淀粉酶水解 有選擇性 34 二 .蛋白質和氨基酸定量檢測 ? 蛋白質的定性定量分析是生物化學和其他生物學科、食品檢驗、臨床檢驗診斷疾病、生物藥物分離提純和質量檢驗中最常用的手段。 淀粉水解 于 250m1錐形瓶中加入 30 ml 6 mol/L鹽酸，裝上冷凝管，臵 沸水浴 中回流 2 h ,速冷。常用的方法有： 酸水解法 酶水解法 旋光法 酸化酒精沉淀法。這里介紹還原糖法。因此，可以用測定還原糖的方法測定蔗糖含量。 ，時間過長會使溶液顏色加深，實驗誤差變大。發(fā)酵液中殘?zhí)潜容^高，所以可能需要進行預備實驗，根據實驗結果對發(fā)酵液進行適當的稀釋。精確吸取稀釋液 1ml，按照 OD值，根據 DNS法標準曲線和稀釋倍數計算發(fā)酵液殘?zhí)呛?。以葡萄?mg數為橫坐標， OD值為縱坐標，繪制標準曲線 。將各管溶液混合均勻，在預先加熱好的沸水中加熱 5min，取出立即用自來水冷卻至室溫，再向每管補充蒸餾水至 25ml，小心搖勻。 27 DNS法測發(fā)酵殘?zhí)? 標準曲線的繪制 預先配制好 1mg/ml葡萄糖標準液。還原糖與濃硫酸作用形成 5羥甲基糠醛， 5羥甲基糠醛，與蒽酮反應生成藍綠色物質，在 625nm處有最大吸收值。其原理是：多糖在濃硫酸作用下水解成單糖 ,并迅速脫水生成糠醛衍生物 ,隨后與苯酚結合生成有色化合物 ,從而可以利用分光光度計測定其吸光度 ,并利用標準曲線定量測定樣品中的多糖含量。 測淀粉或半纖維素含量時，水解后測定的還原糖量要乘上系數 。 樣品的含糖量測定 將還原糖樣品液適當稀釋，取 5ml樣品液代替標準葡萄糖液，按上述方法進行測定。記錄所用硫代硫酸鈉毫升數。 23 加入 ，振蕩。 各瓶加入 5ml銅試劑。 銅試劑中適當增加或減少硫酸銅和碘酸鉀的量，就可測定不同范圍的糖的含量。 19 第一節(jié) 糖類的化學檢測 I2→ NaIO( 氧化劑），其氧化能力較弱， 僅適用于醛糖的測定，與酮糖不起反應 操作要點： （ 1）標準硫代硫酸鈉溶液配制， mol/L，沸騰后冷卻水配制，存放在棕色瓶中，一周后用標準重鉻酸鉀標定。 17 ? 計算 還原糖含量（％）＝（ V0V)*c*N/10 式中， V0—— 斐林試劑標定值， ml V—— 樣品糖液測定值， ml c—— 標準葡萄糖液濃度， g/ml 10—— 樣品液體積， ml N—— 樣品稀釋倍數 18 原理 此法是利用碘與氫氧化鈉反應生成次碘酸鈉，氧化還原糖的自由醛基，過量的碘再用硫代硫酸鈉滴定，從而測定糖的含量。搖勻后按標定時相同操作進行。記錄消耗葡萄糖液的總毫升數 V0。 其特點是試劑用量少，操作和計算都比較簡便、快速，滴定終點明顯。 （ b）定糖 A、 B各 5mL＋ 10mL樣品糖液（ 250mL三角瓶中）搖勻，補加（ V0V2） mL水，并從滴定管中預先加入（ V21