【正文】 b. 如果 λ max處有干擾，應(yīng)選擇靈敏度稍低但能避免干擾的入射光波長(zhǎng)。將 1L的 波長(zhǎng)校正 鐠玻璃或鈥玻璃都有若干特征的吸收峰，可用來(lái)校正分光光度計(jì)的波長(zhǎng)標(biāo)尺，前者用于可見(jiàn)光區(qū)，后者則對(duì)紫外和可見(jiàn)光區(qū)都適用。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 64 ?S為背景吸收 切光器 吸收池 光源 檢測(cè)器 單色器 單色器 2. 雙波長(zhǎng)分光度計(jì) 特點(diǎn)：可測(cè)多組份試樣 、 混濁試樣 、 而且可作成導(dǎo)數(shù)光譜 、不需參比液 、 克服了電源不穩(wěn)而產(chǎn)生的誤差 ， 靈敏度高 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 62 1. 單波長(zhǎng)分光光度計(jì) 5 光源 單色器 吸收池 檢測(cè)器 顯示 優(yōu)點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，操作方便；缺點(diǎn)：光源不穩(wěn)定。 光電池（硒光電池）、光電管 和光電倍增管 ★信號(hào)處理與顯示裝置 放大信號(hào)并以適當(dāng)?shù)姆绞街甘净蛴涗洝? 2）吸收池的光學(xué)面應(yīng)垂直于光束方向?，F(xiàn)代儀器多用光柵作色柵元件。 棱鏡 不同波長(zhǎng)的光具有不同的折射率 光柵 光的衍射和干涉。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 59 ★ 單色器 單色器的用途就是把混合光變成單色光，由入射狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件、聚焦元件和出口狹縫組成。 ★對(duì)光源的要求 足夠光強(qiáng)、穩(wěn)定、連續(xù)輻射且強(qiáng)度隨波長(zhǎng)變化小 ： 340～ 2500nm，多用在可見(jiàn)光區(qū)。 消除措施：試液濃縮富集 。 如酸度控制。 d. 非平行光 通過(guò)吸收池的非平行光影響光程 L，不同儀器測(cè)定 A值不同的主要原因。 c．散射光和反射光 渾濁溶液產(chǎn)生散射和反射，不能用空白消除影響 (被認(rèn)為成吸光）， I變小，但 I0不變。 當(dāng) E1≠E 2時(shí) A～ C 非線性，偏離比爾定律。 設(shè) ?1是需要的光：當(dāng) E1＞ E2時(shí)，測(cè)得的 A值低，負(fù)誤差；反之，產(chǎn)生正誤差。 消除措施：濃度控制在上限以下 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 54 三、 偏離比耳定律的原因 (濃度過(guò)大不適合 ) 當(dāng) c mol （ 6） ε max越大表明該物質(zhì)吸光能力越強(qiáng)，用光度法測(cè)定該物質(zhì)靈敏度越高。 （ 2）溶劑不同，同一物質(zhì)的 ?不同，所以應(yīng)注明溶劑。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 50 LambertBeer 定律是均勻、非散射介質(zhì)對(duì)光吸收的基本定律，只有對(duì)入射光是單色光才完全適用 。 λ 不變，則只與 b（非平行光）、 c有關(guān)。 ta III ??00IIT t?（ T為透光度） rta IIII ???0I a I 0 參比 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 47 溶液對(duì)光透光度： b、 c及入射光 λ(與 a有關(guān)） 等因素有關(guān)。 常將 M與某 L（ 顯色劑）生成具有電荷遷移的配合物，然后進(jìn)行含量測(cè)定 。 SCN比Cl易給電子， FeSCN2+， 吸收波長(zhǎng)長(zhǎng)，在可見(jiàn)區(qū)， FeCl2+在紫外區(qū) 。 M(H2O)6M+(Cr3+、 Co2+) 型水合離子分別為藍(lán)色和桃紅色。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 41 （三） 無(wú)機(jī)化合物的吸收光譜 1. d— d躍遷和 f－ f 躍遷 過(guò)渡金屬離子未充滿(mǎn)的 d軌道，由于受配位場(chǎng)（或晶體場(chǎng)）的影響而發(fā)生分裂，當(dāng)吸收光時(shí)可發(fā)生 d— d躍遷，吸收波長(zhǎng)取決于分裂能的大小， L越強(qiáng)，分裂能越大，吸收波長(zhǎng)越短。隨共軛增長(zhǎng)吸收帶紅移 。 α ,β 不飽和醛酮會(huì)使 n→π ＊ 與 π→π ＊ 發(fā)生紅移 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 39 ③醛酮：有＞ C＝ O基因，產(chǎn)生 n→π ＊； n→σ ＊ ； π→π ＊ 三種躍遷。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 38 c．各類(lèi)有機(jī)化合物的紫外吸收光譜 ①飽和化合物： σ→σ ＊ 躍遷， λmax 一般在 150nm； 當(dāng)含有 n電子的原子取代時(shí)產(chǎn)生n→σ ＊ 躍遷，可使 λmax 增大，達(dá)到近紫外區(qū) (200~270nm)。 影響藍(lán)移因素： 1）溶劑效應(yīng) 極性溶劑使 nπ* 躍遷發(fā)生藍(lán)移 2） pH值 pH值減小，苯胺的 π π* 吸收帶藍(lán)移 n— π 共軛參與少，使分子整體 π 共軛效應(yīng)減少。 Note: 測(cè) UVVis應(yīng)注明溶劑 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 35 5)取代基 苯環(huán)或烯烴（吸電子基）上的 H被各種取代基取代，多發(fā)生紅移。 4） pH值 pH增大，苯酚 π π* 吸收帶發(fā)生紅移。 C=O雙鍵同 C=C雙鍵的共軛作用使 n→ ?*和 ?→ ?*躍遷的吸收峰都發(fā)生紅移 。 ?→ ?*躍遷吸收峰 發(fā)生紅移。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 32 紅移：使化合物的吸收波長(zhǎng)向長(zhǎng)波方向移動(dòng)效應(yīng)。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 30 生色團(tuán) （發(fā)色團(tuán)）：能吸收外來(lái)輻射并引起 n→ ?*和 ?→ ?* 躍遷結(jié)構(gòu)單元。 ε 不大，為100～ 300 能量 成鍵 成鍵 未成鍵 反鍵 反鍵 ? ? n ?* ?* ?→?* ?→ ? * n→?* n→ ? * 特點(diǎn)： n→ ?*所需能量在 200nm 接近。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 26 2. ?→ ?*躍遷 鍵類(lèi)型：碳碳雙鍵、三鍵、共軛雙鍵等 特點(diǎn)：吸收強(qiáng)度大 單個(gè)飽和鍵吸收波長(zhǎng)200nm，如乙烯為165nm。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 24 四 .有機(jī)化合物的吸收光譜 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 25 能量 成鍵 成鍵 未成鍵 反鍵 反鍵 ? ? n ?* ?* ?→?* ?→ ? * n→?* n→ ? * 1. ?→ ?*躍遷 鍵類(lèi)型：飽和鍵。 ??在 λ max處吸光度隨濃度變化的幅度最大，所以 測(cè)定最靈敏 。 吸收曲線的討論： College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 23 ?③吸收曲線可以提供物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，并作為物質(zhì) 定性分析的依據(jù)之一 (分子內(nèi)部能級(jí)分布狀況 )。吸光度最大處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)稱(chēng)為 最大吸收波長(zhǎng) λ max ?②不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收曲線形狀相似 λ max不變。 它反映物質(zhì)對(duì)各種不同波長(zhǎng)光的吸收情況。 因此，人眼可以通過(guò)比較溶液顏色的深淺來(lái)確定溶液中吸光物質(zhì)的濃度大小。 例： College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 19 溶液顏色的深淺，決定于溶液吸收光的量，即取決于吸光物質(zhì)濃度的高低。 ?人眼可以比作是定性分析可見(jiàn)光區(qū)分光光度計(jì)。 M＋ hν M* 。 ?若反射所有顏色的光則呈現(xiàn)白色 ?若透過(guò)所以顏色的光，則為無(wú)色 。 白光 紅 650～ 750 紫 400～ 450 藍(lán) 450～ 480 綠藍(lán) 480～ 500 綠 500～ 560 黃綠 560～ 580 黃 580～ 600 橙 600～ 650 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 16 ?物質(zhì)呈現(xiàn)的顏色與吸收光顏色是互補(bǔ)色