微生物的誘變育種ppt課件-文庫吧資料
2025-05-09 23:19本頁面
【正文】 別涂布 CM和 MM平板 統(tǒng)計 CM和 MM平板上菌落的差數(shù)，確定哪種青霉素濃度的樣品中含缺陷型數(shù)量最大，進一步分離營養(yǎng)缺陷型 營養(yǎng)缺陷型菌株的分離和篩選 ?3. 營養(yǎng)缺陷型的檢出 ? (1) 點植對照法 ?(2) 影印法 注意事項： – ①加入 ％脫氧膽酸鈉或在MM中用山梨糖作為碳源，再加入適量蔗糖可使菌落小而緊密； – ②改進操作，克服孢子擴散而帶來的不純現(xiàn)象。 誘變育種實例 2. 灰黃霉素耐前體變株 D756的育種 第四節(jié) 營養(yǎng)缺陷型菌株的篩選 ? 營養(yǎng)缺陷型 (auxotroph)：野生型菌株經(jīng)過人工誘變或自然突變失去合成某種營養(yǎng)（氨基酸、維生素、核酸等）的能力，只有在基本培養(yǎng)基中補充所缺乏的營養(yǎng)因子才能生長。 (4) 挑菌標(biāo)準(zhǔn)，挑選營養(yǎng)菌絲色素為淺色者，色素越淺產(chǎn)量越高。 誘變育種實例 (2) 27種單一和復(fù)合誘變劑比較，紫外線＋氯化鋰復(fù)合處理的效果最好。 誘變育種實例 2. 灰黃霉素耐前體變株 D756的育種 (1) 為達(dá)到不用乳糖和玉米漿為原料的定向篩選要求，共設(shè)計了108種不同組分的培養(yǎng)基配方，控制發(fā)酵周期在 200h左右。 變種的特性研究與鑒定 1. 堿性脂肪酶高產(chǎn)變株 FS1884的選育 (1) 原生質(zhì)體作為誘變材料 (2) 采用定向控制的理性篩選 —— 抗阻遏和解除反饋抑制篩選模型 添加琥珀酸鈉（脂肪酶底物的類似物）和制霉菌素（引起膜透性改變，篩選高滲菌）到分離平板。 ? 2. 菌株紅外吸收特性一定程度上可以反映 DNA的吸收特性。 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的調(diào)整 ? 1. 以同工酶 (Isoenzyme) 作為一種生化指標(biāo)，研究各種突變株，以便從分子水平分析研究一些突變體的實用價值和理論意義。 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的調(diào)整 2 正交試驗設(shè)計的方法步驟 A. 極差分析 (1) 統(tǒng)計試驗結(jié)果 (2) 計算 K、 R值 (3) 因素與試驗結(jié)果的關(guān)系圖 Na》 大米粉 》 KCl (4) 比較各因素的作用 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的調(diào)整 B. 方差分析 為了判斷實驗因素之間的差異是來自于隨機誤差還是來自于其本質(zhì)的差異，可以通過計算方差，得出 F比值。 ? 優(yōu)點： A）使參與試驗的各因素的不同水平之間保持嚴(yán)密的正交； B）使試驗全部因素的不同水平均衡地分布在有限處理中，用少數(shù)幾個處理就能獲得比較豐富的試驗信息，得出較全面的結(jié)論； C）能給試驗因素間的交互作用及試驗誤差以恰當(dāng)?shù)墓烙嫛? ? 要對篩選過程中搖瓶產(chǎn)量數(shù)據(jù)的分布作全面分析，以便幫助判斷誘變劑、誘變劑量及篩選條件的選擇是否恰當(dāng)。 ? 在試驗過程中的每個階段，都要周密地觀察并記錄菌株特性。 搖瓶液體培養(yǎng) ? 1. 瓊脂平板活性圈法 ? 2. 紙片法 :發(fā)酵液濃度高時 ? 3. 瓊脂薄層紙片法 ? 4. 自動生化儀器分析法 產(chǎn)物活性測定 透明圈 變色圈 生長圈 抑菌圈 (水解酶、有機酸） （產(chǎn)酸菌） （工具菌 +待檢菌） （抗生素） ? 菌株產(chǎn)量的檢測的兩種誤差： A）搖瓶培養(yǎng)條件變化影響遺傳特性的表達(dá)； B）檢測過程中的誤差。 ? 初篩時菌株較多，常用錐形瓶或大號試管搖床培養(yǎng)； ? 復(fù)篩時一個菌株重復(fù) 3～ 5個試驗瓶，以提高重演性；必要時還可采用兩種以上的培養(yǎng)基進行篩選，以防漏篩。 ? 幾種具體方法 分離和篩選 ? A. 根據(jù)形態(tài)篩選變株 ? B. 根據(jù)平板菌落生化反應(yīng)篩選變株 ? C. 采用冷敏感菌篩選抗生素變株 :先低溫后高溫培養(yǎng) . 分離和篩選 2. 平板菌落預(yù)篩 D 濃度梯度法 E 應(yīng)用復(fù)印技術(shù)快速篩選變株 分離和篩選 2. 平板菌落預(yù)篩 優(yōu)點 1：判斷活性圈準(zhǔn)確 ? 所有菌落限制在同面積瓊脂塊上，避免相互干擾； ? 每個菌落的產(chǎn)物都在相同體積的瓊脂塊中，避免擴散造成的誤差。 ? 缺點：在突變率小的情況下，如果菌落挑取少，很難篩選到理想的突變株。 ? 復(fù)篩：以質(zhì)和精為主，反復(fù)多次，結(jié)合自然分離，選育高產(chǎn)或其他優(yōu)良菌株。 誘變劑及誘變劑量 1. 單因子處理 誘變劑的處理方式 ? (1) 兩個以上因子同時處理 2. 復(fù)合因子處理 誘變劑的處理方式 2. 復(fù)合因子處理 誘變劑的處理方式 ?(2) 不同誘變劑交替處理 ?(3) 同一種誘變劑連續(xù)重復(fù)使用 ?(4) 紫外線光復(fù)活交替處理 ?(5) 誘變劑處理時間與誘變效應(yīng)的關(guān)系 1. 菌種遺傳特性與生理狀況 2. 菌體細(xì)胞壁結(jié)構(gòu) 3. 環(huán)境條件的影響 ? (1) 誘變前預(yù)培養(yǎng)和誘變后培養(yǎng) ? (2) 溫度、 pH、氧氣等外界條件對誘變效
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1