抗原與抗體的相互作用及免疫學檢測-文庫吧資料
2025-05-21 20:18本頁面
【正文】 例的要求遠比對彼此絕對量方面要高得多。 硫銨鹽析和 DEAE纖維素柱層析法純化 IgG 在 IgG帶正電，其他血清蛋白帶負電，因此陰離子交換劑 DEAE纖維素可以一次將 IgG提純到很高的純度 IgM的純化方法： 18%飽和度硫銨沉淀+DEAE纖維素柱層析法。 ? 抗體純化的方法： 硫銨鹽析法：簡便、蛋白質(zhì)變性較少，33%飽和度的硫銨可以沉淀所有各類免疫球蛋白；缺點是分離的純度較差，對 IgA類抗體來說，濃鹽可使其形成二聚體，不宜采用。 三、免疫球蛋白的純化 由于抗原抗體的結(jié)合具有高度的特異性，在免疫檢測中常常直接運用抗血清進行，而無需對抗體進行純化。 效價測定：用免疫動物時的抗原濃度作抗體效價測定的抗原濃度。 抗血清制備：血液室溫放置 12h或冰箱內(nèi) 4度過夜，血清便可充分析出，用滴管吸出或離心分離取得。第二次免疫后開始測效價。 一、動物的免疫 抗原用量： 佐劑：弗氏佐劑 弗氏佐劑的成分和使用 免疫方法：淋巴結(jié)注射、腹部皮下注射、四足掌皮內(nèi)注射。 動物個體的不同組織部位對抗原刺激的敏感性也是不同的。 佐劑在抗血清制備中的作用： 由于佐劑有吸附和包埋抗原的 “ 儲藏所 ” 作用，延長了抗原在體內(nèi)的存留時間，便于抗原較長時間的、不間斷的刺激機體免疫系統(tǒng)，使初次反應(yīng)與再次反應(yīng)結(jié)合在一起，其免疫效果更為理想。這段時間總的抗體量是較低的，主要成分是 IgM，此為機體對抗原的初次反應(yīng)。常用的動物有馬、羊、兔、鼠和豚鼠。 由于動物的遺傳性不同，同一抗原對不同種動物、同種不同品系甚至不同個體，產(chǎn)生免疫應(yīng)答的強弱是不同的。在這一免疫應(yīng)答過程中，除依賴于抗原物質(zhì)有特定的化學結(jié)構(gòu)外，還依賴于動物機體的免疫應(yīng)答能力。 抗原抗體凝集（沉淀）反應(yīng)形成的特點： 抗原結(jié)合價必須在 2價以上； 抗體結(jié)合價也必須是 2價或 2價以上； 抗原抗體能形成復(fù)合物但不一定能形成沉淀； 抗原抗體結(jié)合形成大分子凝集物的前提是要求其結(jié)合價彼此飽和； 當抗原大大過量時，只有溶解狀態(tài)的抗原抗體復(fù)合物，而無沉淀出
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