【正文】 操作人員 部門主管 質(zhì)量負責人姓名 ****** ****** ****** 日期 **年**月**日。多條測定線法在NC膜上置多條受體線(抗體或抗原)，顯色線條數(shù)與被測物濃度相關(guān)，或顯色線第幾條與被測物濃度達到多少濃度相關(guān)。：可用質(zhì)控線對比法及多條測定線法?！窘饦税攵俊浚嚎捎脴藴噬A對比法及質(zhì)控標準對照法?！景攵颗c定量】在測定一般正常體液中存在而在疾病時升高的物質(zhì)時，如單以超過正常參考值上限為陽性界限往往不能滿足臨床要求。：試劑盒中質(zhì)控點或質(zhì)控線中包被的是與標記結(jié)合物能直接結(jié)合的物質(zhì)，僅能作為試驗過程是否有效的參考指標(標記結(jié)合物是否失效、層析過程是否正常、被測物中有無干擾物質(zhì)等)，不能反映敏感性、特異性、重復(fù)性等質(zhì)量指標；室內(nèi)質(zhì)控應(yīng)有質(zhì)控物(應(yīng)有低濃度)經(jīng)常檢測試驗條(卡)有否呈色、呈色時間、呈色深淺，將敏感性及敏感性改變作為質(zhì)控要點。(有時即使標出也不相符)及檢測上限(有發(fā)生前帶)，敏感性及臨界值標準不統(tǒng)一，造成一些疾病診斷上的假陰性、假陽性。金標記法商品化試劑盒眾多，無統(tǒng)一管理，存在問題有：，方法學表示不明確，包被物與檢測物表示不明確。金標記方法學尤其適合個人保健、床邊檢測、基層衛(wèi)生單位檢測、急診檢驗、新項目小標本量篩查等。【金標記方法學特點及質(zhì)量控制】特異性與ELISA相似，敏感性略低于ELISA?！九R床應(yīng)用】應(yīng)用范圍 包括感染性疾病抗原、抗體檢測，如HBsAg、瘧原蟲抗原、TB—Ab、HP—Ab、HIV—Ab等；各種蛋白質(zhì)抗原檢測，如AFP、CEA、肌紅蛋白、肌鈣蛋白、尿微量白蛋白、OB等；激素檢測，如HCG、LH、FSH、TSH等；藥物檢測，如嗎啡、可卡因等。離心后SPA—金顆粒復(fù)合物濃縮于管底部，呈暗紅色，盡量吸去無色上清后，收取暗紅色層，而緊挨管壁的致密凝集塊不應(yīng)收集。將SPA—金顆粒復(fù)合物加到幾個洗凈的離心管中，再于離心管底部加進3—6 ml 5％ 甘油、％聚乙二醇、％疊氮鈉的混合液墊層。以膠體金未改變顏色，且SPA濃度最稀一孔膠體金與SPA的比例，計算出全部膠體金溶液所需SPA的總量，最后以10～20％ 過量加入到膠體金中，結(jié)合2—5min，再加入1％ 聚乙二醇(MW 20，000)％，以進一步穩(wěn)定包埋后的膠體金。1的膠體金，5min后再加入250181。用一個滴定盤或一排小試管，(1mg／m1)至第十孔或第十管為止。因為過多或過少地結(jié)合生物大分子均可使膠體金呈不穩(wěn)定狀態(tài)，它們的最佳濃度可通過如下方法獲得。[1]生物大分子的準備 鹽類成分能影響膠體金的吸附能力，并使膠體金顆粒發(fā)生聚集，因此，生物大分子在包被金顆粒前，常需透析，使溶液無鹽或鹽的濃度極低。膠體金顆粒在吸附生物大分子之前具有一定的穩(wěn)定性，4℃可存放一周左右，％ 疊氮鈉，能保存5個月左右。如有條件，所有試劑最好經(jīng)過超過濾處理，以除去其中的分子聚合體和可能混入的雜質(zhì)塊。將造成如下結(jié)果：第一不能獲得預(yù)期大小的膠體金顆粒，第二將影響到下一步生物大分子的吸附過程和包被后膠體金的穩(wěn)定性。一般膠體金溶液呈紅葡萄酒顏色，大顆粒膠體金是紫紅色。膠體金制備一般需在中性pH()條件下進行，也可在稍偏酸或稍偏堿的環(huán)境中進行。[3] 以檸檬酸為還原劑制備5—6 nm直徑膠體金(Au 6) 將l ml氯化金加入100 ml 3DW中煮沸，快速加進2．45ml檸檬酸—單寧酸的混合液(2 ml 1％ 檸檬酸三鈉、 ml 1％ 單寧酸)，繼續(xù)煮沸5 min，放室溫待用。[1] 以抗壞血酸為還原劑制備10～15nm直徑的膠體金(Au l5) 在一個洗凈烤干的250 ml容量的三角燒瓶中，加入20ml三蒸去離子水(3DW)、l ml mol/L K2CO3和l ml％氯化金水溶液于冰浴中混勻，立即加入l ml ％ 抗壞血酸，并充分搖動至溶液呈紫紅色，加3DW至100ml，100℃水浴5min后，溶液變成紅色，放室溫冷卻待用。用這三種還原劑可分別制備出大、中、小三種主要膠體金顆粒。3. 膠體金顆粒的制備在氯化金溶液中加入不同的還原劑，可制備出不同大小的金顆粒。尿中無HCG時，溶解的抗αHCG至固定有金標二抗的MC膜處顯示膠體金特有紅色(質(zhì)控線條)，提示試驗陰性。試驗中將濾膜條浸入被測尿液或滴加尿液，尿液在毛細管作用下向試紙條上端緩緩移行，尿液將金標抗。如單克隆雙抗體法測HCG，濾膜條各區(qū)域分別為：吸水濾紙—固定有金標二抗的MC膜—固定有抗βHCG抗體的MC膜—金標記抗。2. 斑點金免疫層析試驗 固相膜免疫測定中液體通過毛細管作用在膜上向前移行呈橫流形式，為斑點金免疫層析試驗(dotimmunogoldchromatographyassay，DIGCA)。以雙抗體夾心法測dsDNA為例：試驗中將標本加在反應(yīng)盒上，血清(標本)透過過濾層進入反應(yīng)層，反應(yīng)層上點有“一”字形抗IgG(或某種人血清蛋白作為試驗陽性對照)及“．”形被測物相應(yīng)抗體，血清中抗原與反應(yīng)層中抗體結(jié)合，其余無關(guān)蛋白等濾出膜片，加入金標記抗體試劑，反應(yīng)膜上“一”字形及“．”形均顯紅色為試驗陽性，僅“一”形顯紅色為試驗陰性(試劑盒狀態(tài)良好)，“一”不顯色提示試劑盒質(zhì)量不合格，需另取反應(yīng)盒重做試驗。【方法學分類】1. 班點金免疫滲濾試驗 固相膜免疫測定中液體在微孔膜中穿過流出呈穿流形式，為斑點金免疫滲濾試驗(dot immunogold filtration assay，DIGFA)，亦有稱免疫金溶膠斑點法、滴金免疫測定法等。【原理】氯化金分子在還原劑作用下聚合形成金顆粒，顆粒與顆粒之間因靜電作用而相互排斥，使其保持一個比較穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱作膠體金?！举|(zhì)量改進（Quality Improvement，QI）】質(zhì)量改進的建議來源于三方面：：提示實驗的精密度差，應(yīng)規(guī)范各項操作；：提示實驗的準確性差，應(yīng)改進設(shè)備的準備或更換試劑；：提示實驗的偶然誤差，應(yīng)分析實驗的質(zhì)控過程是否達標。,。從全部參評單位的得分中求出該批質(zhì)控物平均分（X）和標準差（s），再通過公式計算出每一個實驗室的得分比值（SI） SI=（實驗室得分平均分X）/平均標準差（s），,SI為負值時數(shù)值越大成績越差。派觀察員到實驗室進行試劑調(diào)查，這種調(diào)查事先不通知，臨時派觀察員到實驗室，指定采用常規(guī)方法，檢驗規(guī)定的一組標本，進行評價。，事先不通知，臨時派出人員到各實驗室，規(guī)定采用常規(guī)方法，檢測一組標本，進行評價。 這種評價方式有一定缺點，即各實驗室常對質(zhì)控物特殊對待，在檢驗時選用特殊試劑盒，選派特別的技術(shù)員進行檢驗，有的實驗室互相和對結(jié)果并作修改。部臨檢中心經(jīng)統(tǒng)計分析，將評價結(jié)果寄回各實驗室。這是國內(nèi)外室間質(zhì)評的常用形式。組織者通過統(tǒng)計分析，再將評價結(jié)果寄回實驗室，使其了解工作質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)問題，提高質(zhì)量。2SD數(shù)據(jù)的均值作為靶值，并與已知定值血清對比測定。6. 標定含量。被檢物要求檢出的水平常被認為是質(zhì)控血清應(yīng)選擇的水平。按一次使用的量分裝小安瓿，封口，20℃保存?zhèn)溆?。如能用正常的人血清稀釋更好，因其成份更接近于檢測標本。3. 離心或過濾除去沉淀。1. 收集新鮮的無溶血、無黃疸、無細菌污染的陽性血清。 臨界值質(zhì)控血清可以作為試劑盒中的陽性對照品和陰性對照品以外的第三個對照品，它可以靈敏地反映出試劑盒的檢出水平，確保弱陽性反應(yīng)的標本不漏檢。如只用一份質(zhì)控血清定值，一般定在正常值與異常值交界點上，定性測定時處于弱陽性水平，稱為臨界值。質(zhì)控血清要求性能穩(wěn)定，較長期內(nèi)效價不變，其理化性質(zhì)應(yīng)與病人樣本相近，這樣才能有效地起到監(jiān)測作用。開展某項檢驗的室內(nèi)質(zhì)控工作需要的質(zhì)控血清，一般按36個月用量準備。冰凍狀態(tài)融化使用時，應(yīng)先混勻，未用完部分可在4℃保存5天。因此質(zhì)控血清在質(zhì)控