【正文】 。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 血漿殼三糖苷酶活性與冠狀動脈病變密切相關(guān) ? 對 126例冠狀動脈造影術(shù)患者按冠狀動脈狹窄程度分組 ， 將狹窄程度 50%者列為對照組 ， ≥ 50%者列為病變組 ， 比較各組血清殼三糖苷酶及血脂等指標 ， 進行統(tǒng)計學分析。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 內(nèi)切木聚糖酶與木糖苷酶預處理 對麥草漿漂白性能的影響 ? 結(jié)果表明 ， 無論是內(nèi)切木聚糖酶還是木糖苷酶預處理漂白漿的白度均比對照漿高，分別高出對照漿的 2. 5 和 1. 9 個百分點，同時漂白漿的強度也好于對照漿的強度。 ? 動態(tài)監(jiān)測有利于肝癌的早期診斷、鑒別診斷 , 并可作為轉(zhuǎn)移、復發(fā)的指標 ， 也可用于白血病及卵巢癌的診斷。 ? 以往主要用于遺傳性 AFU缺乏引起的巖藻糖貯積病的診斷。 (3)是否遇到了不常見的呋喃糖環(huán) ? ? 因為絕大多數(shù)工具糖苷酶，是專一于吡喃環(huán)形式的。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 其他方面 (2)是否有抑制劑存在 ? ? 在復雜的無細胞制劑系統(tǒng)中，抑制劑存在的可能性更大。 (1)底物是否充分溶解了 ? ? 有的樣品在水溶液中溶解不好，尤其是糖脂和膜結(jié)合糖蛋會極大地影響糖苷酶的水解效果。 ? 可能是另一個原因，底物結(jié)構(gòu)較為復雜，造成了分子的空間遮蔽效應(yīng)。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (3) 遮蔽效應(yīng) ? 按照其他技術(shù)方法得到的信息，選擇了一個合適的糖苷酶，可得不到預期的結(jié)果。 ? 如果有少量蛋白酶沒有除盡，則可能在酶反應(yīng)中將所用的工具酶水解掉，使糖鏈水解過程中斷，并使產(chǎn)物中混入不應(yīng)有的雜質(zhì)，結(jié)果分析帶來困難。 ? 一種新分離純化的糖苷酶，應(yīng)該用各種常見的糖苷鍵結(jié)構(gòu)類型作底物，做一系列酶活性測定，確定其底物專一性，然后才能用做工具酶。 ? 影響糖苷酶測定結(jié)果的因素很多，大致有以下幾個方面： TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (1) 工具酶的選擇 ? 任何一助糖苷酶都可用于糖鏈結(jié)構(gòu)研究的工具酶。 ? 來自一株土壤芽孢桿菌的 ?1,6甘露聚糖酶，能水解無側(cè)鏈取代的 ?1,6甘露糖糖苷鍵，在研究酵母胞壁外層甘露聚糖結(jié)構(gòu)時，將大分子甘露聚糖外側(cè)鏈打斷，獲得靠近天冬酰胺結(jié)合位置的內(nèi)核結(jié)構(gòu)。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (4) 其他內(nèi)切糖 苷酶 ? 來自灰色鏈霉菌發(fā)酵液的一個氨基半乳糖苷內(nèi)切酶，可以水解 ?氨基半乳糖苷鍵。 ? 被酶水解打開的糖苷鍵必須是 ?1,4連接。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (3) ? 半乳糖苷內(nèi)切酶 ? 糖基一側(cè)必須是一個三糖單位，失去非還原末端的半乳糖 乙酰半乳糖胺，都不能成為該酶的底物。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (2) ?N乙酰半乳糖苷內(nèi)切酶 ? 蛋白的 O型糖鏈中最常見的一種，是由糖鏈還原末端的 N乙酰半乳糖胺和糖鏈中的絲氨酸或蘇氨酸的羥基以 ?0糖苷鍵連接而成。 卵清蛋白糖肽的一條糖鏈 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY ?N乙酰葡糖胺內(nèi)切酶 (4)EndoC11的底物專一性，在糖基一側(cè)要求一個分枝的五糖單位，并且兩個處于還原末端的 ?甘露糖殘基都必需、或者不被別的糖基取代 ， 或者僅取代在 C2位置上。非還原末端的?甘露糖殘基必需沒有被其他糖取代。 (2)EndoD和 EndoC1的底物專一性完全相同。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 用于糖鏈結(jié)構(gòu)研究的內(nèi)切糖 苷酶 ? ?N乙酰葡糖胺內(nèi)切酶 ? ?N乙酰半乳糖胺內(nèi)切酶 ? ?半乳糖苷內(nèi)切酶 ? ?1,6甘露聚糖內(nèi)切酶 ? ?1,4氨基半乳糖苷內(nèi)切酶 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 幾種內(nèi)切糖 苷酶的底物專一性 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (1) ?N乙酰 葡糖胺內(nèi)切酶 ? 按其來源和底物專一性的差別，共分四種。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 用于糖鏈結(jié)構(gòu)研究的外切糖 苷酶 ? ?半乳糖苷酶 ? ?半乳糖苷酶 ? ?甘露糖苷酶 ? ?甘露糖苷酶 ? ?巖藻糖苷酶 ? ?N乙酰己糖胺酶 ? ?N乙酰半乳糖胺酶 ? 唾液酸苷酶 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY ?半乳糖苷酶的底物專一性 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY ?巖藻糖苷酶的底物專一性 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 唾液酸 苷酶的底物專一性 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY ?半乳糖苷酶的底物專一性 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 用于糖鏈結(jié)構(gòu)研究的內(nèi)切糖 苷酶 ? 內(nèi)切糖苷酶主要體現(xiàn)在對糖基一側(cè)整個寡糖鏈的結(jié)構(gòu)有專一要求。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 用于糖鏈結(jié)構(gòu)研究的外切糖 苷酶 ? 從肺炎雙球菌的培養(yǎng)液中純化得到 ?半乳糖苷酶，可以水解 Gal?1,4GlcNAc糖苷鍵，但不能水解 ?1,3和 ?1,6鍵，表現(xiàn)出嚴格的對取代位置的專一性要求。 ? ?N乙 酰葡糖胺內(nèi)切酶 H(EndoH)的應(yīng)用，在多甘露糖型 N型糖鏈的研究中，收到良好效果。 ? 打開 N型糖肽鍵主要采用肼解法。在不具備這些大型儀器的條件下，可采用糖苷酶水解的。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 外切糖苷酶的作用特點和底物專一性 ? 糖鏈中糖基的連接順序分析，甲基化反應(yīng)過碘酸氧化和核磁共振等方法，結(jié)合糖苷酶的逐步水解方法，可提供順序的信息。 ? 糖苷酶的使用在糖鏈結(jié)構(gòu)研究主要體現(xiàn)在以下幾個方面： TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (1)外切糖苷酶的作用特點和底物專一性 ? 通過糖苷酶水解，能切下非還原末端的一個單糖，同時提供關(guān)于糖基的組成、排列順序以及糖苷鍵的 ?或 ?異頭構(gòu)型的信息。 ? 研究其功能，首先要研究其結(jié)構(gòu)。 ? 采用螢光化合物 (?氨基吡啶 , 5二甲氨基萘磺?；?)標記在底物糖鏈的還原末端，結(jié)合使用高效液相色譜分離，用螢光分光光度計檢測酶活性。釋放出來的巖藻糖，可以轉(zhuǎn)變?yōu)槿谆杳蜒苌铮瑲庀嗌V上測定。 ? 有兩種情況： ? 一是測定糖苷酶作用下從非還原端釋放的單糖。在酶作用下，釋放出發(fā)螢光的 4甲基傘形酮，用360nm波長光作激發(fā)光，在 440nm波長處測發(fā)射光，可定量地測定釋放的 4甲基傘形圈。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 一些糖苷酶的分離純化方法 來 源 酶的名稱 方 法 刀豆粉 ?甘露糖苷酶 乙醇沉淀、凝膠過濾、離子交換 ?N乙酰己糖胺酶 柱層析 ?半乳糖苷酶 無花果 ?半乳糖苷酶 丙酮沉淀、凝膠過濾、離子交換 柱層析、等電聚膠 產(chǎn)氣夾膜梭菌 ?N乙酰葡糖胺酶 ?N乙酰半乳糖胺酶 ?半乳糖苷酶 硫酸銨沉淀、凝膠過濾、離子交換柱層析、制備電泳 豬腎 ?甘露糖苷酶 硫酸銨沉淀、