制備hplc技術(shù)ppt課件(參考版)
2025-05-09 12:04本頁面
【正文】 具有如下優(yōu)點： 分辨能力和選擇性得到提高 樣品可在運轉(zhuǎn)中純化 微量的樣品可得到富集 可以減少用于清洗色譜柱等所花的時間 制備 HPLC新技術(shù) — 柱切換技術(shù) Thank you! 。 制備 HPLC新技術(shù) — 柱切換技術(shù) 包括改變流動相的所有技術(shù)。（填的時候小心，別重新污染柱子） 制備 HPLC技術(shù)問題 — 組分的收集 收集組分時，通常有以下情況： （ 1）可獲得良好分離，主峰： 使用制備柱，超載提高效率； （ 2）兩主成分之間的小組分： 超載，分離切分使待分離組分成為主成分（富集）后，再次分離制備。 （ 3）如果效果還是不好，就需要打開色譜柱，超聲波清洗篩片（這樣也會使柱子效果下降）。 制備 HPLC技術(shù)問題 — 柱子再生 柱子再生處理辦法如下： （ 1）依次用水，甲醇，四氫呋喃，氯仿，甲醇來沖洗柱子，每種溶劑 510個柱體積。在分析上摸好條件，上制備柱往往還要降低一些洗脫液的濃度。 / Dm)制備 HPLC技術(shù)問題 — 流速問題 d p , C m , C s mu HH H ? 制備 HPLC技術(shù)問題 — 組分保留時間的估計 用分析柱子在同等色譜條件下（同樣的固定相和流動相）測定保留時間后，按照單一組分的線流速（不是體積流速）一定，通過計算可以知道組分的大致保留時間區(qū)域。 ( dp2 /Dm)Cs m= Cs m39。流速越低越有利于分離度的改善，樣品濃度也會相應提高。 （ 3）如果樣品在分析柱上有展寬或拖尾的現(xiàn)象，放大到制備柱上后峰的展寬和拖尾經(jīng)常會非常嚴重，導致分離失敗。 制備 HPLC技術(shù)問題 — 問題解答 同一種填料的分析柱、制備柱按線形放大公式套，分離度會不會變化？ 一般會有一定的變化，原因有以下幾點 （ 1）制備柱的裝填是否均勻，如不均勻則可能產(chǎn)生渦流擴散使各個組分的經(jīng)過通道的直徑不同、阻力不一樣，停留時間不同，色譜峰可能變寬。 4）制備中因為目的物來之不易，常常需要將純度不合格得目的物重新上柱循環(huán)，一般只需稀釋 12倍就可以了。 2）制備的目的是分離你所關(guān)心的組分，只要它能與其它雜質(zhì)分離的好就行了，所以不要希望在分析柱上先得到所有組分的基線分離，完全沒有必要！設(shè)計梯度時只需對目的物前后 510%梯度的范圍進行精細分離?？梢愿鶕?jù)加樣量增加對柱子體積（直徑和長度）和流速進行線形調(diào)整。 成本比較大，同時也大大減少生產(chǎn)的產(chǎn)量和速度 制備 HPLC技術(shù)問題 — 條件的優(yōu)化 流速的調(diào)整： Fp/Fa = Vp/Va = Lp/La * r2p/r2a F ：流速 ； V:柱體積； L:柱長； r：色譜柱內(nèi)徑； p: 制備柱； a：分析柱 注：流速一般為分析流速線性放大量的 40%~50%最好 制備 HPLC技術(shù)問題 — 條件的優(yōu)化 梯度的調(diào)整 tp/ta = Vp/Va * Fp/Fa F ：流速 ； V:柱體積； t:梯度洗脫時間 ； p: 制備柱 ； a： 分析柱 制備 HPLC技術(shù)問題 — 條件的優(yōu)化 從分析到制備轉(zhuǎn)化，分析時應盡量分得開。 R =4n1 / 2*αα 1*1 + k2k2柱 效 項柱 選 擇 項柱 容 量 項α 主 要 受 溶 劑 的 種 類 影 響k 主 要 受 洗 脫 能 力 的 影 響k = K *V sV mK =C sC mR =4n1 / 2*αα 1*1 + k 2k 2柱 效 項柱 選 擇 項柱 容 量 項α 主 要 受
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