植株生理生長指標(biāo)的測定(參考版)
2025-04-10 23:15本頁面
【正文】 （2）葉綠體色素提取液不能混濁。1000—1L=1000mL。公式11相加即得葉綠素總濃度。以95%乙醇為空白，在波長665nm、649nm、470nm下測定吸光度（如用丙酮提取，波長應(yīng)調(diào)整）。最后用乙醇定容至25mL，搖勻。（4）用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。靜置3~5min。三、實(shí)驗(yàn)步驟（1）取新鮮葉片（或其他綠色組織）或干材料，擦凈組織表面污物，用打孔器剪取葉片組或剪碎（去掉中脈），混勻。（二）儀器設(shè)備分光光度計(jì)、電子天平、研缽、棕色容量瓶、小漏斗、定量濾紙、吸水紙、擦鏡紙、滴管。由于葉綠體色素在不同溶劑中的吸收光譜有差異，因此，在使用其他溶劑提取色素時，計(jì)算公式也有所不同。解方程組（1）、（2）得：Ca= （3）Cb= （4）將Ca與Cb相加即得葉綠素總量CTCT=Ca+Cb=+ （5）另外，由于葉綠素a、葉綠素b在652nm的吸收峰相交，兩者有相同的吸光系數(shù)（），也可以在此波長下測定一次吸光度（A652）而求出葉綠素a、葉綠素b總量： CT=A652 （6）在有葉綠素存在的條件下，用分光光度法可同時測定出溶液中類胡蘿卜素的含量。在測定葉綠素a，葉綠素b時為了排除類胡蘿卜素的干擾，所用單色光的波長應(yīng)選擇葉綠素在紅光區(qū)的最大吸收峰。這就是吸光度的加和性。各種有色物質(zhì)溶液在不同波長下的吸光系數(shù)可通過測定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長下的吸光度而求得。 葉綠素含量的測定一、原理根據(jù)葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收，利用分光光度計(jì)在某一特定波長測定其吸光度，即可用公式計(jì)算出提取液中各色素的含量。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出反應(yīng)液中生成的亞硝態(tài)氮總量（μg）。最后通入氮?dú)饷芊夂?，?5℃黑暗中反應(yīng)30min，再分別向測定管（對照管除外）加入1mL 30%三氯乙酸終止酶反應(yīng)。二、實(shí)驗(yàn)步驟（一）標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：同離體法（二）酶反應(yīng)及活性測定取樣：~ 4份，剪成1cm左右的小段，放于小燒杯中，用直徑略小于燒杯直徑的玻璃瓶塞將材料全部壓于杯底，其中1份作對照，另外3份做酶活性測定用。30%三氯乙酸溶液：30g三氯乙酸，水溶后定容至100mL。 ％萘基乙烯胺溶液： mL無離子水中，貯于棕色瓶中。 （二）試劑 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取分析純NaNO2 ，然后再吸取5mL定容至1000mL，即為含亞硝態(tài)氮的1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。三、結(jié)果計(jì)算樣品
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