【正文】 陳聰 二零一一年六月21。再次，向所有幫助過(guò)我的老師、師兄師姐及同學(xué)表示最衷心的感謝和最誠(chéng)摯的敬意。 在實(shí)習(xí)期間，實(shí)驗(yàn)室的師兄師姐在生活和學(xué)習(xí)上給了我極大的關(guān)心和幫助，在平常的實(shí)驗(yàn)操作中細(xì)心地指導(dǎo)我完成每一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容；在論文課題研究過(guò)程中，馬傳營(yíng)老師，湯艷超師兄為我提供了大力的支持、知道和幫助。.北京；中國(guó)輕工業(yè)出版社， 致謝我的實(shí)習(xí)是在山東中北生物科技有限公司進(jìn)行的。2428[2] 沈衛(wèi)鋒，牛寶龍，[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2005，,1（4）：234238[3] Monica LE Elizabeth ADJ, William EBJ. et al. Viability and stability of biological control agents on cotton and snap bean seeds. Pest. Manag. Sci. 2001, 57(8):695706[4] [J].山東輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào),2004,18(2):3540.[5] [M].化學(xué)工業(yè)出版社，[6] [D].北京；中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2002[7] Hallman J A, Quadt Hallmann A, Mahaffee W F, et al. Bacterial entophytes in agricultural crops [J]. Can J Microbial, 1997,43:895914[8][10] 王星云，宋卡魏，[J].,7（4）：4044[9] PujolM, Badosa E, Manceau C, et al Assessment of t he Environmental Fate of the Biological Control Agent of Fire Blight , Pseudomonas fluorescents EPS ,on Apple by Culture and Real Time PCR Methods Applied And Environmental Microbiology 2006,72( 4 ): 2421 2427[11] 逄奉輝，曹賢香. 微生物在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用[M]. 中國(guó)商業(yè)出版社,[12] 吉林玉米網(wǎng)，玉米苗期管理技術(shù)[OL]。生物菌肥作為一種無(wú)毒無(wú)害的產(chǎn)品將越來(lái)越受到人們的青睞，生物菌肥的推廣勢(shì)將成為肥料發(fā)展的必然趨勢(shì)。 隨著環(huán)境問(wèn)題在全球范圍內(nèi)越來(lái)越受到重視以及農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展策略的應(yīng)用，生物菌肥的開(kāi)發(fā)、生產(chǎn)及應(yīng)用力度在不斷擴(kuò)大。另外，國(guó)家應(yīng)該加大對(duì)微生物肥料基礎(chǔ)研究的投入，收集更多寶貴的資源，對(duì)微生物肥料的作用機(jī)理進(jìn)行更加深入徹底的研究，使我國(guó)的微生物肥料行業(yè)可以更好的發(fā)展[17]。為了促進(jìn)國(guó)內(nèi)微生物肥料行業(yè)的發(fā)展，建議國(guó)家在相關(guān)法律上給予生物菌肥一定的優(yōu)惠政策，比如免收增值稅。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的研究開(kāi)發(fā)，生物菌肥已形成了以下幾種趨勢(shì)：(1) 由單一菌種向復(fù)合菌種轉(zhuǎn)化；(2) 由單一功能向多功能轉(zhuǎn)化；(3) 由豆科作物接種劑向非豆科作物肥料轉(zhuǎn)化；(4) 由單一接種劑向復(fù)合生物肥轉(zhuǎn)化；(5)由用無(wú)芽胞菌種生產(chǎn)向用有芽胞菌種生產(chǎn)轉(zhuǎn)化[16]?，F(xiàn)已有70多個(gè)國(guó)家進(jìn)行生物菌肥的生產(chǎn)機(jī)推廣使用。從而響應(yīng)“發(fā)展綠色農(nóng)業(yè)，發(fā)展生態(tài)農(nóng)業(yè)”的號(hào)召。不同的生物菌肥可以適應(yīng)不同的種植環(huán)境，從而改善不同質(zhì)量的土壤，也就是說(shuō)，生物菌肥的多樣化使得生物菌肥在各種地質(zhì)上都能發(fā)揮充分的效果。在生物菌肥的推廣使用過(guò)程中，強(qiáng)有力的調(diào)查結(jié)果會(huì)提供更好地說(shuō)服力。 從示范和施用效果的角度來(lái)看，推廣和應(yīng)用生物菌肥具有一定的可行性。由于過(guò)去農(nóng)田耕作大量使用化學(xué)肥料，土壤中的氮過(guò)量，難溶解的磷、鉀又不能被植物吸收，使得土壤越來(lái)越板結(jié)，農(nóng)作物的耕種也就越困難，從而導(dǎo)致了農(nóng)作物的質(zhì)量與產(chǎn)量的下降。 生物菌肥的推廣使用及展望 生物菌肥的推廣使用從目前的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)形勢(shì)和肥料使用狀況來(lái)看，農(nóng)藥化肥將逐步被生物肥料、生物農(nóng)藥所取代，化學(xué)制劑防治害蟲(chóng)是一種治標(biāo)不治本的方案，雖然在短期內(nèi)可能達(dá)到消滅害蟲(chóng)，提供作物營(yíng)養(yǎng)的目的，但是但是時(shí)間久了害蟲(chóng)雜草逐漸產(chǎn)生了抗性，土壤中殘留大量的化肥農(nóng)藥，都將嚴(yán)重影響人類及牲畜的健康以及環(huán)境的協(xié)調(diào)穩(wěn)定。 生物菌肥的研發(fā)面臨的一個(gè)問(wèn)題是生物菌的生物活性如何在產(chǎn)期保存的情況下保存完好，有些菌肥只能進(jìn)行短期保存，這樣對(duì)工業(yè)生產(chǎn)來(lái)說(shuō)會(huì)造成較大負(fù)擔(dān)。 現(xiàn)在市場(chǎng)上出售的生物菌肥大部分對(duì)土壤的溫度、濕度、pH等要求比較嚴(yán)格，使得施用后菌種可能不能發(fā)揮最大的作用?，F(xiàn)在，國(guó)家對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)資料有相應(yīng)的免稅政策，其中包括飼料、農(nóng)膜、部分化學(xué)農(nóng) 藥與部分化學(xué)肥料，對(duì)銷售種子、種苗、農(nóng)機(jī)、化肥、農(nóng)藥的銷售商也有相應(yīng)的免稅政策，但這些都不包括微生物肥料行業(yè)與產(chǎn)品。同時(shí)建立與完善市場(chǎng)檢查和監(jiān)督機(jī)制，一旦發(fā)現(xiàn)不合格產(chǎn)品，立刻依據(jù)法律給予對(duì)應(yīng)的處罰。這樣在某種程度上實(shí)現(xiàn)了枯草芽孢桿菌菌劑的使用，也使得其使用效果在其他微生物的協(xié)同作用下得到提高。通過(guò)這些作用機(jī)理的研究，可以有效指導(dǎo)枯草芽孢桿菌制劑的產(chǎn)品生產(chǎn)工藝和應(yīng)用技術(shù)方法，是其的應(yīng)用和研究水平有更大的發(fā)展和提高。5 存在問(wèn)題及展望 枯草芽孢桿菌生物肥料研發(fā)的展望及應(yīng)用對(duì)策在對(duì)枯草芽孢桿菌已有的研究基礎(chǔ)上，再進(jìn)行進(jìn)一步的研發(fā)，如對(duì)植物內(nèi)外微生物區(qū)系及微生態(tài)平衡的影響；對(duì)土壤性質(zhì)改良的長(zhǎng)效機(jī)理；也可以研發(fā)在畜禽魚(yú)免疫方面的研發(fā)，擴(kuò)大其應(yīng)用范圍。該實(shí)驗(yàn)只是粗略地測(cè)定了枯草芽孢桿菌對(duì)玉米小斑病菌生長(zhǎng)的抑制作用，對(duì)于枯草芽孢桿菌作用的最適條件還應(yīng)有進(jìn)一步的要求，比如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、溶氧量、pH等。 枯草芽孢桿菌拮抗實(shí)驗(yàn)分析在枯草芽孢桿菌抑制玉米小斑病菌生長(zhǎng)的試驗(yàn)結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌A16對(duì)玉米小斑病菌的生長(zhǎng)的確起到了一定的抑制作用。在發(fā)酵前期過(guò)程中觀察0006罐一直發(fā)酵正常，但從第三天觀察發(fā)現(xiàn)發(fā)酵罐里含有大量雜質(zhì)而菌體量和芽孢量很少，可能原因就是發(fā)酵過(guò)程中被污染，應(yīng)屬于發(fā)酵中期污染，在該種情況下會(huì)嚴(yán)重影響產(chǎn)生菌的代謝，雜菌大量產(chǎn)酸致使培養(yǎng)液pH下降，糖、氮消耗快，發(fā)酵液發(fā)粘，菌絲自溶，產(chǎn)物分泌減少或停止，有時(shí)甚至?xí)?huì)使已產(chǎn)生的產(chǎn)物分解。待菌體進(jìn)入穩(wěn)定期之后，發(fā)酵進(jìn)入產(chǎn)物合成階段，菌體穩(wěn)定期的生長(zhǎng)規(guī)律對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐有著重要的指導(dǎo)意義，例如，對(duì)生產(chǎn)菌株或與菌體生長(zhǎng)相平行的代謝產(chǎn)物（SCP、乳酸等）為目的的某些發(fā)酵來(lái)說(shuō)，穩(wěn)定期是產(chǎn)物的最佳收獲期[13]。4 討論 實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵生產(chǎn)監(jiān)測(cè)工業(yè)生產(chǎn)之前一般都要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室小規(guī)模的發(fā)酵罐實(shí)驗(yàn)，在該實(shí)驗(yàn)發(fā)酵生產(chǎn)監(jiān)測(cè)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)室小罐發(fā)酵周期與工業(yè)生產(chǎn)發(fā)酵周期基本相符。在培養(yǎng)基上培養(yǎng)了3d之后，接種了枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基上已經(jīng)明顯出現(xiàn)了抑菌帶，在菌絲直徑與時(shí)間關(guān)系圖表中也可以明顯地看出沒(méi)有接種枯草芽孢桿菌的對(duì)照組菌絲生長(zhǎng)狀況比實(shí)驗(yàn)組要好一些。得6500ml LB培養(yǎng)基,待用（以下實(shí)驗(yàn)部分需用不同容量及數(shù)量的LB培養(yǎng)基，按照比例重新配置即可） 活化菌種①將裝有Bacillus subtilis A