實(shí)驗(yàn)一-光學(xué)顯微鏡的使用與微生物觀察(參考版)
2025-04-07 23:19本頁面
【正文】 三角瓶加棉塞后單個(gè)用油紙包扎。目前，國(guó)內(nèi)已開始采用塑料試管塞，可根據(jù)所用的試管的規(guī)格和試驗(yàn)要求來選擇和采用合適的塑料試管塞。過緊易擠破管口和不易塞入；過松易掉落和污染。：試管和三角瓶都需要做合適的棉塞，棉塞可起過濾作用，避免空氣中的微生物進(jìn)入容器。每支吸管用一 條寬約4~5cm的紙條，以30~50℃的角度螺旋形卷起來，吸管的尖端在頭部，另一端用剩余的紙條打成一結(jié)，以防散開，標(biāo)上容量，若干支吸管包扎成一束 進(jìn)行滅菌。：洗凈、烘干后的吸管，在吸口的一頭塞入少許脫脂棉花，以防在使用時(shí)造成污染。（三）器皿的包扎：要滅菌后的器皿仍保持無菌狀態(tài)，需在滅菌前進(jìn)行包扎。一）單獨(dú)高壓滅菌：～30 min→趁熱倒去污物→倒放在鋪有吸水紙的籃子上→用100 ℃→用5%的碳酸氫鈉水煮兩次→再用肥皂水刷洗干凈。最后將載玻片浸入95%酒精中片刻，取出用軟布擦干，或晾干，保存?zhèn)溆?。再放濃洗液中浸泡過液，用自來水沖凈洗液，浸泡在蒸餾水中或擦干裝盒備用。，使用后不得放在桌子上，立即分別放入盛有3～5%來蘇爾或5%%新潔爾滅溶液的玻璃缸（筒）內(nèi)消毒24h后，用夾子取出經(jīng)清水沖干凈。含菌培養(yǎng)皿的滅菌，底蓋要分開放入不同的桶中，再進(jìn)行高壓滅菌。 常用舊玻璃器皿的洗滌 確實(shí)無病原菌或未被帶菌物污染的器皿，使用前后，可按常規(guī)用洗衣粉水進(jìn)行刷洗；吸取過化學(xué)試劑的吸管，先浸泡于清水中，待到一定數(shù)量后再集中進(jìn)行清洗。三、試劑和儀器、試管、三角瓶、培養(yǎng)皿和吸管、棉線、紗布、棉花、牛皮紙、報(bào)紙等、去污粉和相應(yīng)洗滌液四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一） 玻璃器皿的清洗：新購的玻璃器皿的洗滌 將器皿放入２％鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，以除去游離的堿性物質(zhì)，最后用流水沖凈。為保持滅菌后和無菌狀態(tài)，需要對(duì)培養(yǎng)皿、吸管等進(jìn)行包扎，對(duì)試管和三角瓶等加塞棉塞。C。C培養(yǎng)；霉菌則采用1010104三種稀釋度接種于馬丁培養(yǎng)基，28176。C培養(yǎng)；放線菌采用1010105三種稀釋液接種于高氏一號(hào)培養(yǎng)基。接種時(shí)每一稀釋度用一支無菌吸管，菌液注入平板后，應(yīng)立即用無菌涂棒將該菌液均勻地涂布于平板表面，注意勿刮破瓊脂。 ，接種于相應(yīng)的培養(yǎng)基平板上。然后按10倍稀釋法進(jìn)行稀釋分離，以制備10－7稀釋度為例，具體操作過程如下：，按10－3……10－7順序編號(hào)，放置在試管架上。本實(shí)驗(yàn)將采用四種不同的培養(yǎng)基從土壤中分離不用的微生物三、器材 培養(yǎng)基：牛肉蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、高氏一號(hào)培養(yǎng)基、馬丁培養(yǎng)基、赫奇遜培養(yǎng)基 土壤懸液、無菌玻璃棒、無菌吸管、盛有9ml無菌水的試管、無菌試管四、操作步驟 選定采土地點(diǎn)后，鏟去表涂層2～3cm，取3～10cm深層土壤10g。因此可通過挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。 次數(shù)各大格中的藻數(shù)112342八、問題與思考 用此法計(jì)數(shù)的結(jié)果是活藻體還是死、活菌體的總和？實(shí)驗(yàn)七 土壤細(xì)菌、放線菌、霉菌及纖維素降解菌的分離及提純一、目的要求 通過平板涂布法學(xué)習(xí)土壤中一般異養(yǎng)性細(xì)菌、放線菌、霉菌及纖維素降解菌的分離以及純化方法二、基本原理 微生物分離培養(yǎng)的基本原理是：選用不同成分和酸堿度的培養(yǎng)基，在不同的濕度和不同的通氣條件下進(jìn)行培養(yǎng)，使只有適合該條件的微生物得以生長(zhǎng)。 2）計(jì)算藻細(xì)胞密度 數(shù)出對(duì)角線上的 4 個(gè)大方格中的總藻數(shù) A，若藻液的稀釋倍數(shù)為 B，則計(jì)算公式如下：細(xì)胞密度＝A247。每個(gè)大格：邊長(zhǎng) 為１ｍｍ，深為 ，容積為 (104ml)。培養(yǎng)量與總?cè)萘康谋刃∮?2/3；培養(yǎng) ：按上述培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，在培養(yǎng)的過程中，每天搖瓶 3 次，使藻類充分見接觸氧氣和光照； 換代：57 天換代 1 次，換代濃度同上； 固定：將藻液搖勻，用小三角瓶分別倒取一定量(2030ml)的上述3種藻液加入幾滴碘液，搖勻殺死細(xì)胞； 取樣：搖勻后，用吸管吸取上述不同的藻液分別滴到蓋有蓋玻片的血球計(jì)數(shù)板的邊緣，使藻液慢慢進(jìn)入蓋有蓋玻片的區(qū)域，避免蓋玻片浮起，用吸水紙輕輕吸走多余的藻液，每種藻液取樣 2 次； 觀察計(jì)數(shù)：顯微鏡下觀察不同的藻種并分別計(jì)數(shù)。問題與思考（1）作革蘭氏染色涂片為什么不能過于濃厚？其染色成敗的關(guān)鍵一步是什么？（2）當(dāng)你對(duì)一株未知菌進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)，怎樣能確證你的染色技術(shù)操作正確，結(jié)果可靠？實(shí)驗(yàn)六、藻類的培養(yǎng)、觀察、計(jì)數(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^實(shí)驗(yàn)了解藻類生長(zhǎng)的基本條件和方法，掌握淡水微藻的基本培養(yǎng)方法；顯微鏡下觀察并識(shí)別幾種常見淡水微藻；了解血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)原理，掌握血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)方法。選用培養(yǎng)1624h菌齡的細(xì)菌為宜。染色過程中勿使染色液干涸。一般可用已知革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌作練習(xí)，以掌握脫色時(shí)間。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而被誤認(rèn)為是革蘭氏陰性菌；如脫色時(shí)間過短，革蘭氏陰性菌也會(huì)被認(rèn)為是革蘭氏陽性菌。被染成紫色者即為革蘭氏陽性菌(G+)；被染成紅色者是革蘭氏陰性菌(G)。最后用吸水紙輕輕吸干。 ⑶脫色 滴加95%乙醇，脫色2025s立即水洗，以終止脫色。傾去染色液，用自來水小心地沖洗。 固定 將制成的涂片干燥固定，固定時(shí)通過火焰12次即可，不可過熱，以載玻片不燙手為宜。 涂片 在一張載玻片上加兩滴蒸餾水后，分別涂布枯草芽孢桿菌和大腸桿菌(注意涂片切不可過于濃厚)。二、實(shí)驗(yàn)器材菌種 牛肉膏瓊脂斜面28℃培養(yǎng)24h的大腸桿菌(Escherichia coli)斜面菌種，牛肉膏瓊脂斜面28℃培養(yǎng)16h的枯草桿菌(Bacillus subtilis)斜面菌種；儀器 顯微鏡； 材料 載玻片，香柏油，二甲苯，擦鏡紙，吸水紙，染色缸等。G菌的細(xì)胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇或丙酮脫色時(shí)溶解了類脂質(zhì)，增加了細(xì)胞壁的通透性，使結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)菌就被脫色，再經(jīng)蕃紅復(fù)染后就成紅色。凡細(xì)菌不被脫色而保留初染劑的顏色(紫色)者為革蘭氏陽性菌，如被脫色后又染上復(fù)染劑的顏色(紅色)者為革蘭氏陰性菌。革蘭氏染色法可將所有的細(xì)菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌(G+)和革蘭氏陰性菌(G)兩大類，是細(xì)菌學(xué)上最常用的鑒別性染色法。Ⅱ、革蘭氏染色法四、注意事項(xiàng) 玻片要潔凈無油，否則菌液涂不開。 清理 實(shí)驗(yàn)完畢，擦凈顯微鏡。 干燥 自然干燥或用吸水紙 蓋在涂片部位以吸去水分(注意勿擦去菌體)。待玻片冷卻后，再加染料； 染色 玻片置于玻片擱架上，加適量(以蓋滿菌膜為度)結(jié)晶紫染色液(或石炭酸復(fù)紅液)于菌膜部位，染l2min。干燥 將涂片于空氣中自然晾干，或?qū)⑼科糜诨鹧娓咛幬岷娓?，但不能直接在火焰上烘烤，以免菌體變形。 染料 草酸銨結(jié)晶
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