不可忽視的細節(jié)—血液基因組提取(參考版)
2024-10-21 20:52本頁面
【正文】 適合樣本： 微量血液、干血點、微量組織 。 DNA提取的原則 基因組提取方法 樣本保存和前處理 基因組提取流程 DNA保存及檢測方法 試劑選擇原則 內(nèi)容 試劑選擇指南 硅膠膜吸附法 微量樣本（ DP316） 口拭子（ DP322） (DP318) 應用： 1. HLA分型、親子鑒定及芯片檢測實驗：對 DNA的純度、濃度均有要求。各取2μ l基因組 DNA為模板，擴增 GAPDH基因，熒光定量 PCR分析實驗結(jié)果。 若上樣量合適，泳道有彌散、拖尾現(xiàn)象，說明書基因組 DNA有降解。上樣量過大會導致泳道過亮、拖尾等現(xiàn)象，影響正確判斷。 溶解 DNA Buffer：純化得到的基因組 DNA最好溶解在 TB Buffer (TIANGEN) 或者 Tris緩沖液里，因為大片段的基因組 DNA在酸性水溶液中不穩(wěn)定，易水解。 DNA提取的原則 基因組提取方法 樣本保存和前處理 基因組提取流程 DNA保存及檢測方法 試劑選擇原則 內(nèi)容 濃度： 100－ 300ng/ul 純度：任何雜質(zhì)都可能導致 DNA在儲存過程中的降解，因此要確保純化得到的核酸的純度。 溶液法 1. 使用 7075％乙醇對核酸沉淀進行洗滌。 核酸洗脫或溶解 硅膠膜吸附法 1. 用去蛋白液、漂洗液將膜上的核酸漂洗后，將不加溶液的吸附柱離心以去除殘留的液體及揮發(fā)乙醇成分。 2. 加入異丙醇顛倒混勻后應出現(xiàn)絲狀沉淀，動作要輕柔，避免基因組因過于猛烈的外力而降解。通過硅膠膜特異吸附核酸的特性將裂解溶液中的核酸吸附到硅膠膜上。 核酸吸附或沉淀 硅膠膜吸附法 1. 加入乙醇顛倒混勻后可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，動作要輕柔。 水浴時看到溶液變清，沒有粘稠物或沉淀時即可進行下步操作，通常水浴時間 1030min. 若采用有機（酚 /氯仿）抽提時應充分混勻，動作要輕柔。 加入裂解液（如： TIANGEN試劑盒中的 GB或 FG）和蛋白酶 K需要徹底混勻。有時血液需要進行兩次裂解，注意第二次加入裂解液后需要將沉淀 votex徹底混勻。紅細胞裂解有兩種方式： 采用紅細胞裂解液進行裂解（通常紅細胞裂解液按照 3倍全血
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